TENM1基因及其表达产物在诊治乳头状腺癌的应用制造技术

本发明专利技术涉及TENM1基因及其表达产物在诊治乳头状腺癌的应用。发明专利技术人基于高通量测序结果采用生物信息学方法分析进行基因筛选，挑选出候选基因TENM1，进一步，通过分子细胞生物学实验证实了TENM1与甲状腺乳头状癌具有很好的相关性，可用于制备甲状腺乳头状癌辅助诊疗制剂，具有重要的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
TENM1基因及其表达产物在诊治乳头状腺癌的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体的本专利技术涉及TENM1基因及其表达产物在诊治乳头状腺癌的应用。
技术介绍
甲状腺癌是内分泌系统最常见恶性肿瘤，发病率在头颈部恶性肿瘤中居首位。甲状腺癌的发病机制以及发病率急剧增加的原因尚不明确。甲状腺乳头状癌(papillarythyroidcarcinoma,PTC)的发病率约占所有甲状腺癌发病类型的80％。PTC约占成人甲状腺癌的60％和儿童甲状腺癌的全部，恶性程度较低。PTC多发于青年女性，多见于30-45岁之间。约80％肿瘤为多中心性，约1/3累及双侧甲状腺。较早便出现颈淋巴结转移，但预后较好。PTC早期无明显症状，表现为甲状腺区的无疼痛性肿块或在体检时偶然查出，肿块可数月至数十年，质地软硬不一，半数以上的肿块较韧，不足1/3的患者表现为质硬肿块；发生颈淋巴结转移时有颈淋巴结肿大，侵犯喉返神经出现声音嘶哑。侵犯气管内可引起呼吸困难或咳血。甲状腺微小癌临床检查不易查出，往往以颈淋巴结肿大为首发症状，也可以压迫喉返神经首先表现为声音嘶哑。目前甲状腺乳头状癌的诊断方法主要包括患者的病史和症状、实验室检查、影像学检查以及细针穿刺抽吸细胞学检查等，但仍存在一些不足。因此，探讨甲状腺乳头状癌发生的危险因素，从分子水平上研究甲状腺乳头状癌的发病机制，发现特异性的分子标志物，对于早期预防、早期发现，早期治疗甲状腺乳头状癌具有重要的意义。专利技术人对6例甲状腺乳头状癌病例样本及3例正常对照进行高通量测序，结合生物信息学方法进行基因筛选，挑选出候选基因TENM1。进一步，本专利技术进行了分子细胞生物学方法证实了TENM1与甲状腺乳头状癌的关系：与甲状腺乳头状癌具有很好的相关性，可用于制备甲状腺乳头状癌辅助诊疗制剂，具有重要的临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供TENM1基因和/或蛋白抑制剂在制备抗甲状腺乳头状癌制剂中的应用。为实现上述目的，本专利技术首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基因TENM1，进而通过分子细胞生物学方法验证了TENM1与甲状腺乳头状癌的关系：TENM1与甲状腺乳头状癌具有很好的相关性，可用于制备甲状腺乳头状癌辅助诊疗制剂，具有重要的临床应用价值。进一步，所述抗甲状腺乳头状癌制剂是指可以抑制甲状腺乳头状癌细胞中TENM1基因的表达的制剂。本领域人员熟知抑制基因的表达通常可以采用下述方法中的一种和/或几种：通过激活目的基因的抑制基因、激活目的基因的抑制基因表达的蛋白、采用RNA干扰技术抑制目的基因表达、激活促进目的基因mRNA降解的microRNA、导入促进目的基因编码蛋白降解的分子、抑制促进目的基因表达的因子及蛋白的表达。即通过激活TENM1基因的抑制基因、激活抑制TENM1基因表达的蛋白、导入抑制TENM1基因表达的siRNA、激活促进TENM1mRNA降解的microRNA、导入促进TENM1蛋白降解的分子、抑制促进TENM1基因表达的因子及蛋白的表达。RNA干扰(RNAi)是指外源性和内源性双链RNA在生物体内诱导同源靶基因的mRNA特异性降解，导致转录后基因沉默的现象，是一种使用小的双链RNA高效、特异地阻断体内某种特定基因的表达，促使mRNA降解，使细胞表现出特定基因缺失表型的技术。siRNA设计完成后可以采用直接合成法或者构建siRNA表达载体，制备好的siRNA可以通过磷酸钙共沉淀法、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene法、显微注射或基因枪等机械法、阳离子脂质体试剂法等途径转染细胞。进一步，所述抑制TENM1基因表达的siRNA序列选自下列序列中的一种和/或几种：SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5、SEQIDNO.6。优选siRNA序列为SEQIDNO.3和SEQIDNO.4。本专利技术的目的在于提供一种抗甲状腺乳头状癌制剂，所述抗甲状腺乳头状癌制剂抑制甲状腺乳头状癌细胞中TENM1基因的表达。进一步，所述的抗甲状腺乳头状癌制剂中含有抑制TENM1基因表达的siRNA。本专利技术的目的在于提供TENM1基因在制备甲状腺乳头状癌诊疗制剂中的应用。进一步，所述的甲状腺乳头状癌的诊疗制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法检测甲状腺乳头状癌组织中TENM1基因的表达。荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。所述的用于荧光定量PCR方法检测甲状腺乳头状癌中TENM1基因的产品含有一对特异性扩增TENM1基因的引物；所述的基因芯片包括与TENM1基因的核酸序列杂交的探针。进一步，所述的甲状腺乳头状癌的诊疗制剂包括用免疫方法检测肺腺癌中TENM1蛋白的表达。优选所述免疫检测方法检测甲状腺乳头状癌中TENM1蛋白表达的为westernblot和/或ELISA和/胶体金检测方法。酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。常用的免疫胶体金检测技术：(1)免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。(2)免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。(3)斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。(4)胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
TENM1基因和/或TENM1蛋白抑制剂在制备抗乳头状腺癌制剂中的应用。

【技术特征摘要】
2015.06.01 CN 20151029203851.TENM1基因抑制剂在制备抗乳头状腺癌...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11