PES1P基因及其表达产物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种PES1P基因及其表达产物的应用，用于制备诊断肝癌的产品。本发明专利技术的PES1P基因及其表达产物，可作为诊断肝癌的特异标志基因，使肝癌诊断更加准确、快速。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基因的应用，特别是涉及一种PESlP基因及其表达产物的应用。
技术介绍
肝癌严重威胁着我国人民的生命健康。肝癌的诊断，尤其早期诊断是临床诊疗和 预后的关键。目前，在我国肝癌的定性诊断仍以检测血清AFP (甲胎蛋白）为主，呈现如下 特点：60%以上的肝癌病例血清AFP > 400 μ g/L ;目前还没有其他肿瘤标志物的特异性可 与AFP相媲美；AFP检测较少依赖影像学设备和新技术。AFP是目前全球应用最为广泛的肝 癌肿瘤标志物，已经应用了数十年，其敏感性为40%~65%，特异性为76%~96%，如此的敏 感性和特异性均不令人满意。因此，发现灵敏度和特异性高的新的肿瘤标志物将是提高肝 癌早期诊断水平的关键。除AFP外，近年来用于肝癌检测的其他血清标志物还包括：甲胎 蛋白异质体、Y-谷氨酰转肽酶同工酶II (GGT- II)、碱性磷酸酶同工酶I、醛缩酶同工酶A (ALD-A)、岩藻糖苷酶(AFU)、抗胰蛋白酶I、异常凝血酶原、铁蛋白与酸性铁蛋白等。AFP异 质体和异常凝血酶原的应用提高了肝癌患者的检出率，但早期诊断和指导个性化治疗的分 子分型诊断仍是我们面临的极大挑战。一般认为以下四类生物分子常作为原发性肝癌标志 物：①癌胚和糖蛋白抗原；②酶和同工酶；③细胞因子；④基因。 然而，关于人PESlP基因在肿瘤的表达谱及与肿瘤发生的关系尚不清楚，有待进 一步研究。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种PESlP基因及其表达产物的应用，使肝癌诊 断更加准确、快速。 为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种PESlP基因及其表达产物在制备诊断肝 癌的产品中的应用。 所述诊断肝癌的产品包括：用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因 芯片诊断肝癌的产品。 在本专利技术中，所述用RT-PCR诊断肝癌的产品至少包括一对特异扩增PESlP基因的 引物。 所述用实时定量PCR诊断肝癌的产品至少包括一对特异扩增PESlP基因的引物。 其中，用于制备用RT-PCR或实时定量PCR诊断肝癌产品中的一对特异扩增PESlP基因的引 物，所述引物的上游引物序列具有如SEQ ID NO. 1所示的序列或其互补序列，所述引物对的 下游引物序列具有如SEQ ID NO. 2所示的序列或其互补序列。 所述用免疫检测诊断肝癌的产品包括：与PESlP蛋白特异性结合的抗体，包括多 克隆抗体和单克隆抗体。 所述用原位杂交诊断肝癌的产品包括：与PESlP基因的核酸序列杂交的探针。 所述用基因芯片诊断肝癌的产品包括：与PESlP基因的核酸序列杂交的探针。 在本专利技术中，可以使用一系列本领域已知的方法来制备针对PESlP蛋白特异的抗 体。例如，将提纯的人PESlP基因产物或它的抗原片段注射入动物体内以产生多克隆抗体。 同样，表达人PESlP蛋白或它的抗原的细胞也可以用来对动物致免疫而产生抗体。根据本 专利技术制备的抗体可以是单克隆抗体，这些单克隆抗体可用杂交瘤及时制备。本专利技术的抗体 包括可以阻抑PESlP功能的抗体，也可以是不影响人PESlP功能的抗体。每一类抗体都可 以通过对人PESlP基因产物的片段或功能域致免疫而产生，而人PESlP基因产物及其片段 可以用重组方法产生或用多肽合成仪进行合成。与非修饰形式的PESlP基因产物结合的抗 体，可以利用在原核细胞例如E. coli中产生的基因产物来免疫动物而得到。与翻译后修饰 形式如糖基化或磷酸化PESlP蛋白或多肽结合的抗体，可以利用在真核细胞如酵母或昆虫 细胞中产生的基因产物来免疫动物而得到。 在本专利技术中，所述探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其他衍生物。所述 探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可 以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至 60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信 号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱 基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15~25个碱基对最佳。所述探针自身互补最好少 于4个碱基对，以免影响杂交效率。 本专利技术实验证实PESlP基因在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织，因此，PESlP 基因及其表达产物（蛋白产物）可作为诊断肝癌的特异性标志基因，使肝癌诊断更加准确、 快速。【附图说明】 下面结合附图与【具体实施方式】对本专利技术作进一步详细的说明： 图1是RT-PCR检测PESlP基因在20例肝癌病人中癌旁组织及癌组织中的表达情 况，其中，N指癌旁组织，C指肝癌组织。【具体实施方式】 以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例中未注明具 体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建 议的条件。 实施例1RT-PCR实验检测PESlP基因在肝癌组织中的表达情况 RT-PCR 是指将逆转录（Reverse Transcription ;RT)反应和 PCR (Polymerase Chain Reaction)反应组合在一起的方法。RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合 在一起，提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RT-PCR用于对表达信息进行检测或 定量。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及Sl核酸酶分析在内 的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作。RT-PCR的模板可以为总RNA或poly (A)选择性RNA。 逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物起始。RT-PCR 可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA 的合成首先在逆转录缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。 1、组织分离 实验用组织来源于原发性肝癌的手术病人。手术切除的肝脏一经离体，迅速切取 病灶及周围5公分外癌旁组织，放入液氮中（-80°C)保存。癌和癌旁的诊断均以病理诊断 为最终依据。 2、总核糖核酸（RNA)的抽提试剂盒 抽提总核糖核酸（RNA)采用TRIZOL (Invitrogen),该试剂是基于酸性酚一步抽提 法生产的。TRIZOL试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时 能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。 收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。用于抽提总核糖核酸（RNA)所用 的器皿和水均进行核糖核酸酶灭活处理，以保证实验中无核糖核酸酶的环境。 3、核糖核酸（RNA)抽提步骤 RNA提取的一般步骤是：破碎组织一分离RNA -沉淀RNA -洗涤RNA -融解RNA - 保存RNA。破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行，可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白 酶K等破碎组织，加入β-ΜΕ可以抑制RNA酶活性。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PES1P基因及其表达产物的应用，其特征在于：所述PES1P基因及其表达产物在制备诊断肝癌的产品中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄健，亓垚，刘星，欧莹，
申请(专利权)人：上海人类基因组研究中心，
类型：发明
国别省市：上海;31