布加综合征的诊断标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种布加综合征的诊断标志物‑SNCA基因。本发明专利技术通过检测受试者血液中的SNCA基因表达产物的含量可以判断受试者是否患有布加综合征或者诊断受试者是否存在患有布加综合征的风险，或者判断患者是否复发或者判断患者的预后情况。基于本发明专利技术的研究成果，本发明专利技术还公开了一种诊断布加综合征的试剂盒，该试剂盒可用于早期布加综合征的诊断，利于在临床上推广使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疾病诊断领域，更具体地，本专利技术涉及SNCA在布加综合征诊断中的应用。
技术介绍
布加综合症(Budd-Chiarisyndrome，BCS)是由肝静脉和(或)其开口以上段下腔静脉阻塞性病变引起的常伴有下腔静脉综合征为特点的一种肝后性门脉高压症。从全球范围来看，BCS发病率较低，其病因有明显的地域差别，西方国家以肝静脉阻塞型BCS多见，大多有明确的病因，如口服避孕药、妊娠、血液性疾病等，已有文献报道，肝静脉型BCS与基因突变导致的血液高凝状态、肝静脉血栓形成有关；而在亚洲和南非地区则以IVC阻塞型BCS多见，发病原因大多不清。BCS可引起肝脏损害、门静脉高压，甚至导致肝硬化、肝衰竭、上消化道出血等严重并发症，自然预后极差，5年生存率很低，非手术治疗死亡率高。BCS患者早期的临床表现隐匿，无特异性，且缺乏早期诊疗的有效方法，患者在就诊时多属晚期，临床表现复杂多样，容易造成误诊、误治。国内对BCS的研究多集中在临床治疗方面，相比之下流行病学和病因学的研究滞后，缺乏全国普查和病因学研究。因此，深入开展BCS病因学研究，提高BCS的早期诊断率是提高BCS患者生存与预后的关键问题。
技术实现思路
本专利技术涉及一种布加综合征的诊断标志物，本专利技术通过实验证明在布加综合征患者的血液中SNCA基因mRNA含量显著高于正常人群，因此SNCA基因的差异表达的性质使其成为可以用来诊断受试者是否患有布加综合征的分子标志物。具体地，本专利技术提供了检测SNCA的产品在制备布加综合征诊断工具中的应用。进一步，所述检测SNCA的产品包括检测样品中SNCA基因表达量的产品。更进一步，所述检测SNCA的产品包括能够定量样品中SNCA基因mRNA的产品，和/或能够定量样品中SNCA蛋白的产品。本专利技术的定量样品中SNCA基因mRNA的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(AmplificationRefractoryMutationSystem，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。所述能够定量样品中SNCA基因mRNA的产品包括实时定量PCR中使用的特异扩增SNCA基因的引物，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。产品中包括的引物可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的定量样品中SNCA蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的定量样品中SNCA蛋白的产品包括特异性结合SNCA蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本专利技术的定量样品中SNCA蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的SNCA蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对SNCA蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(DojindoLaboratories)；藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻红蛋白标记试剂盒-NH2，B-藻红蛋白标记试剂盒-SH、R-藻红蛋白标记试剂盒-NH2、R-藻红蛋白标记试剂盒SH(DojindoLaboratories)；荧光标记试剂盒诸如荧光素标记试剂盒-NH2、HiLyteFluor(TM)555标记试剂盒-NH2、HiLyteFluor(TM)647标记试剂盒-NH2(DojindoLaboratories)；及DyLight547和DyLight647(TechnoChemicalCorp.)、Zenon(TM)、AlexaFluor(TM)抗体标记试剂盒、Qdot(TM)抗体标记试剂盒(InvitrogenCorporation)和EZ-标记物蛋白质标记试剂盒(FunakoshiCorporation)。为了正确标记，可以使用适宜的仪器来检测经过标记的抗体或其片段。作为依照本专利技术的检测产品的样品，可以使用例如自活检受试者获得的组织样品或流体。样品不受特别限制，只要它适于本专利技术的测定；例如，它可以包括组织、血液、血浆、血清、淋巴液、尿液、浆膜腔液、脊髓液、滑液、房水、泪液、唾液、或其级分或经过处理的材料。在本专利技术的具体实施方案中，所述样品来源于血液。进一步，所述定量SNCA基因或SNCA蛋白的产品可以是检测SNCA基因或SNCA蛋白的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测SNCA的产品在制备诊断布加综合征工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测SNCA的产品在制备诊断布加综合征工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测SNCA的产品包括检测样品中SNCA基因表达量的产品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测SNCA的产品包括能够定量样品中SNCA基因mRNA的产品，和/或能够定量样品中SNCA蛋白的产品。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述能够定量样品中SNCA基因mRNA的试剂包括实时定量PCR中使用的特异扩增SNCA基因的引物，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示；所述能够定量样品中SNCA蛋白的试剂包括特异性结合SNCA蛋白的抗体。5.根据权利要求2-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述样品来源于血液。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，任静，宋宏涛，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11