本发明专利技术公开了一种检测非交通性脑积水易感基因的引物及试剂盒，本发明专利技术提供的检测非交通性脑积水易感基因的方法为检测易感基因GSTT2的一个多态性位点:rs2719，本发明专利技术的引物及试剂盒可用来准确检测非交通性脑积水易感基因；利用本发明专利技术的引物及试剂盒可以为非交通性脑积水的深入研究和辅助诊断、防治、新药研发提供了新的思路。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测试剂盒，特别是非交通性脑积水的基因检测试剂盒。
技术介绍
脑积水是由于颅脑疾患,使得脑脊液分泌过多或(和)循环、吸收障碍而致颅内脑脊液量增加，脑室系统扩大或(和)蛛网膜下腔扩大的一种病症。其典型症状为头痛、呕吐、视力模糊，视神经乳头水肿，偶伴复视，眩晕及癫痫发作。未经治疗的先天性脑积水，虽有20％可以停止发展，但是，约半数患儿一年半内死亡。脑积水分为交通性脑积水和非交通性脑积水，正常人的脑脊液的形成和吸收是一个动态的平衡过程。脑脊液的形成是由侧脑室的脉络丛产生的，脉络丛产生的脑脊液经过其他脑室，经过小脑与脑桥的间隙流到蛛网膜下腔，经过蛛网膜下腔的血管重新吸收，以达到平衡。如果脉络丛产生的脑脊液过多或者蛛网膜下腔发生纤维化，就会导致交通性脑积水，非交通性脑积水又称梗阻性脑积水，是指病变位于脑室系统内或附近，阻塞脑室系统脑脊液循环而形成，即第四室出口以上部位发生阻塞造成的脑积水，常见于蛛网膜囊肿，导水管闭锁或狭窄，正中孔或室间孔发育不良，Chiari畸形，颅咽管瘤等。脑积水患儿起初没有明显的临床表现，随着脑脊液的增多，患儿表现为明显的头围增大，语言认知能力受到影响，肢体瘫痪；患儿需要做脑脊液分流手术，即从侧脑室分流过多的脑脊液经导管到腹腔中进行治疗；因此对患儿的早期诊断非常重要，可以实现早诊断早治疗；当前的诊断主要是核磁共振扫描技术，通过对病人脑部扫描，确定Evan比例，即侧脑室最宽的部分与脑部最宽的部分的比例，如果大于0.3即为脑积水，但核磁共振扫描所需费用高,对病人体动敏感，易产生伪影，扫描时间长,部分病人会有幽闭恐惧症；而且当用核磁共振技术扫描后判断的脑积水是要等到病人发病甚至病重后才能被确诊，这样很不利于病情的控制，而脑积水病人如果早诊断早治疗的话会有效控制病情。一个世纪以来，人们对脑积水的生理、生化、影像、药物治疗以及社会家庭、环境等方面观察，对脑积水发病机理做出了各种假说和判断，随着科技进步，人们越来越认识到基因缺陷是产生非交通性脑积水的重要原因，经调查研究，非交通性脑积水是遗传度很高的疾病，科技日益发展的今天如何对待交通性脑积水，如何从遗传角度检测易感基因以及个体的疾病易感性，从而进行进一步风险预测和诊断，成为广大科技人员和医疗卫生人员面临的严峻问题，利用遗传标记对致病基因进行检测，是近几年来发展的技术。遗传标记，即在染色体上有一段特异DNA序列片段，且有多态性，在世世代代传递中，遵循规律为分离、独立分配和连锁规律，因此可获得遗传物质传递信息。遗传标记可以把基因组分为不同区域，通过连锁和关联分析可获得致病基因所在染色体区域，可对该病基因进一步进行克隆。对于各种不同疾病，寻找致病基因和分析是研究的关键之一。第三代遗传标记—SNP(singlenucleotidepolymorphism)指基因组中某特定核苷酸的位置上会存在两种或两种以上的不同碱基，在群体中最小等位基因频率≥1％。人类的基因组中多数SNP位点仅存在2种等位基因，所以通常SNP会指在特定位置上，某一核苷酸出现双等位基因的改变。SNP是人类基因组计划走向应用的非常重要方法。主要因为SNP提供一个非常有力的工具，用于高危人群的发现、疾病易感基因的鉴定、药物设计和基础生物学研究等。因为人类大量存在SNP位点，提供了更多的机会发现基因与疾病间的关系。通过SNP发现疾病相关基因的突变要比家系等研究容易。某些SNP并不是致病基因，但它可能与某些相邻的致病基因连锁，也同样为重要标记。SNP以其密度高(平均每1kb就有1个)、代表性强(位于基因内部的SNP可能直接影响蛋白质结构或表达水平)、遗传稳定性好(同微卫星多态性比较而言)、易于自动化分析(因SNP在人群中多为双等位基因标记，可简单以“+/－或1/0”直接分型)等特点成为很好的遗传标志。目前尚无任何关于GSTT2基因与非交通性脑积水相关联的研究结果，本专利技术第一次利用SNP技术对非交通性脑积水易感基因进行检测，为非交通性脑积水的深入研究和防治、诊断、治疗提供了新的思路。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测非交通性脑积水易感性的引物及试剂盒，从而满足本领域对于正确识别非交通性脑积水易感基因的需求，为非交通性脑积水的深入研究、预防、治疗、诊断提供了新的思路。专利技术人通过研究结果表明，22号染色体GSTT2基因位于22q11.23，编码谷胱甘肽硫转移酶，是非交通性脑积水的易感基因，通过对GSTT2基因的SNP位点：rs2719进行分析，结果显示，rs2719与非交通性脑积水高度相关。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：1、一种检测非交通性脑积水易感基因的引物，其特征在于：所述引物为扩增GSTT2基因rs2719的核苷酸序列，分别为序列表SEQIDNo.1和序列表SEQIDNo.2所示。2、一种检测非交通性脑积水易感基因的试剂盒，其特征在于包括以下试剂：1)引物：为SEQIDNo.1，SEQIDNo.2所示的核苷酸序列，2)PCR扩增缓冲液，TaqDNA聚合酶，3)dNTP混合液。具体的说，本专利技术是用以下技术方案实现的：一种检测非交通性脑积水的GSTT2易感基因rs2719的核苷酸序列，为序列表SEQIDNo.3所示核苷酸序列。该核苷酸序列位于GSTT2基因，其变异位点，以字母“R\表示，所述的单核苷酸多态性位点rs2719的基因型为G时，受试者的易感性最低，携带T等位基因时候，受试者的易感性升高。一种体外检测非交通性脑积水易感基因的检测方法，包括如下步骤：1、基因组DNA提取采用提取DNA的试剂盒，提取外周血的白细胞中全基因组的DNA2、基因组DNA质量检测3、基因组DNA含量和纯度的检测4、利用引物，PCR扩增目的片段扩增GSTT2基因rs2719多态性的引物分别为：SEQIDNo.1，SEQIDNo.2的核苷酸序列5、检测多态性位点的基因型。将PCR产物直接测序，根据荧光信号的差异判定基因型。6、结果判定rs2719碱基为(T)的个体为非交通性脑积水易感人群。本专利技术的测定方法测定了来源于人的基因组DNA，样品来源无限制，如：体液(血液、腹水及尿液等)、组织细胞(如肝组织)等。通过提取和纯化这些样品可制备基因组DNA。调整基因组DNA的浓度，使其尽可能的一致。以基因组DNA为模板，可扩增出含GSTT2基因突变位点的核酸片段，以获取测定的大量样本。这种通过扩增含GSTT2基因变异点的DNA片段获得的样品，特别适于用作测定材料。在进行基因辅助诊断时，本专利技术优先适用于测定根据GSTT2基因突变类型存在的辅助诊断试剂，辅助诊断试剂包括作为必要成分的特定试剂，其对应于用于测定基因突变类型的方法。按采用的测定方法来选择适当的特定试剂，如DNA片段和/或用于PCR扩增步骤的引物。本专利技术通过大样本的统计分析，研究了GSTT2基因序列的rs2719多态性位点在非交通性脑积水患者的等位基因频率，并根据基因型在患病子女中的传递情况，进行传递不平衡检验和单体型分析，结果发现，全部样本的基因型分布和等位基因频率均符合Hardy-Weinburg平衡，经过Bonferroni矫正，传递不平衡检验分析有显著的统计学差别，通过大样本实验进行了论证。根据本专利技术由GSTT2基因碱基突变特性判本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测非交通性脑积水易感基因的引物，其特征在于：所述引物为扩增GSTT2基因rs2719的核苷酸序列，分别为序列表SEQ ID No.1和序列表SEQ ID No.2所示。
【技术特征摘要】
1.一种检测非交通性脑积水易感基因的引物，其特征在于：所述引物为扩增GSTT2基因rs2719的核苷酸序列，分别为序列表SEQIDNo.1和序列表SEQIDNo.2所示。2.一种检测非...
【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：张建华，
类型：发明
国别省市：山东;37
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