一种帕金森病诊断试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种帕金森病诊断试剂盒及其应用。本发明专利技术对263例帕金森病患者和242例年龄性别匹配的健康对照组血浆中的miR‑105‑5p，miR‑21‑5p，miR‑29a‑5p，miR‑30e‑5p表达水平进行单盲检测，发现这4种miRNAs在帕金森病患者和健康人群血浆中有明显差异，提示这四种miRNAs可作为分子标志物用于制备诊断帕金森病的试剂盒，或用于制备治疗帕金森病的药物。本发明专利技术同时发现服药情况对miR‑21‑5p有显著影响，提示其可用于筛选治疗帕金森病的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物技术，疾病诊断和生物医药领域，具体地说，涉及一种帕金森病诊断试剂盒及其应用。
技术介绍
帕金森病(Parkinson’sdisease，PD)又称震颤麻痹，是仅次于阿尔茨海默病的第二常见神经系统变性疾病。除黑质纹状体变性引起的静止性震颤、肌强直及运动迟缓等运动症状外，非运动症状如嗅觉缺失、抑郁、自主神经功能障碍、快动眼睡眠行为异常(rapideyemovementsleepbehaviordisorder，RBD)及认知损害等也是PD的重要组成部分。随着人口老龄化的加剧，PD的患病率呈逐年上升趋势，给患者的家庭和社会造成了严重负担。当PD患者出现临床症状时，其黑质多巴胺神经元死亡已超过60％，此时，药物治疗仅能改善患者的临床症状，并不能减缓其疾病的进展。对PD临床前期或早期的识别和诊断，是PD及其他神经变性疾病发病机制研究和新药研发的基础。目前临床上常规的药物主要有(1)多巴胺替代药物；(2)单胺氧化酶(MAO)抑制剂；(3)儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)抑制剂；(4)抗胆碱能药物；(5)多巴胺受体激动剂等等。以上药物能够暂时缓解和改善相关症状，但不能推迟病程，也不能治愈该病。近年来，随着PD病理机制研究进一步深入，与PD有关的致病基因及调控此类基因的非编码RNA(例如miRNA)备受瞩目。miRNA(microRNA，miR)是有21-23个核苷酸的非编码单链微小RNA，能够通过序列特异性的方式来调节靶基因表达。miRNA具有高度保守性、组织特异性、阶段特异性和时序性等特点。近期研究表明，有大量的miRNA与PD病理机制密切相关，可能为PD治疗提供新的思路。miRNA可调节与遗传性PD相关的基因，如miR-7和miR-153可以调控PD致病基因PARK1/PARK4，miR-205可以调控PARK8，miR-34b/miR-34c可以调控PARK2，miR-494可以调控PARK7等；miRNA也可以调控多种与PD发病机制相关的基因，如miR-34a、miR-132、miR-133b可以分别调控与多巴胺能神经元发育有关的基因Nurr1、Notch1、Pitx3，miR-320可以调控与突触形成有关的基因ARPP-19，miR-433可以调控与神经营养因子有关的基因FGF20等。直接调控PD致病基因的miRNA可能具有直接的治疗作用，而调节PD相关基因的miRNA可能具有辅助治疗作用。miRNA能够调控PD致病基因与相关基因的表达，是一种非常具有前景的治疗手段。因此，进一步研究miRNA在PD发病机制探索以及临床诊断中具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供四种miRNAs：miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p和miR-30e-5p的新用途。第一方面，本专利技术提供了miRNA在制备诊断帕金森病的试剂中的应用，所述的miRNA选自下列中的任一种：a)miR-105-5p，b)miR-21-5p，c)miR-29a-5p，d)miR-30e-5p，e)miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p和miR-30e-5p中任两种或任几种的组合。第二方面，本专利技术提供了检测血浆中miRNA表达水平的试剂在制备诊断帕金森病的试剂中的应用，所述的miRNA选自下列中的任一种：a)miR-105-5p，b)miR-21-5p，c)miR-29a-5p，d)miR-30e-5p，e)miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p和miR-30e-5p中任两种或任几种的组合。作为本专利技术的一种具体实施方式，所述的试剂为检测miRNA的引物。第三方面，本专利技术提供了一种帕金森病诊断试剂盒，所述的试剂盒含有检测血浆中miRNA表达水平的试剂，所述的miRNA选自下列中的任一种：a)miR-105-5p，b)miR-21-5p，c)miR-29a-5p，d)miR-30e-5p，e)miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p和miR-30e-5p中任两种或任几种的组合。第四方面，本专利技术提供了miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p或miR-30e-5p的抑制剂在制备治疗帕金森病的药物中的应用。第五方面，本专利技术提供了miR-21-5p在制备筛选治疗帕金森病的药物中的应用。本文中，各miRNA具有如下序列：miR-105-5p：UCAAAUGCUCAGACUCCUGUGGU(SEQIDNO.1)，miR-21-5p：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA(SEQIDNO.2)，miR-29a-5p：ACUGAUUUCUUUUGGUGUUCAG(SEQIDNO.3)，miR-30e-5p：UGUAAACAUCCUUGACUGGAAG(SEQIDNO.4)。本专利技术优点在于：本专利技术对263例帕金森病患者和242例年龄性别匹配的健康对照组血浆中的miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p，miR-30e-5p表达水平进行单盲检测，发现这4种miRNAs在帕金森病患者和健康人群血浆中有明显差异，提示四种miRNAs包括miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p，miR-30e-5p可作为诊断分子标志物用于制备诊断帕金森病的试剂盒，或用于制备治疗帕金森病的药物。同时，我们发现服药情况对miR-21-5p有显著影响，提示其可用于筛选治疗帕金森病的药物。本专利技术对进一步研究miRNAs在帕金森病发病以及临床诊断和治疗中的功能具有重要的意义。附图说明图1.miRNAs在帕金森病患者血浆中的表达。荧光定量RT-PCR方法检测健康对照(n＝242)和帕金森病患者(n＝263)血浆中miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p，miR-30e-5p的表达。HC：健康对照；PD：帕金森病患者。图2.服药情况对帕金森病患者血浆中miRNAs的影响。分析与健康对照相比，帕金森病患者未服药(n＝66)，服用左旋多巴(n＝65)，服用左旋多巴与多巴胺受体激动剂联合用药(n＝71)对血浆中miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p，miR-30e-5p表达的影响。ctrl：健康对照；naive：帕金森病患者未服药组；L-dopa：帕金森病患者服用左旋多巴组；L-dopa+DR：帕金森病患者服用左旋多巴与多巴胺受体激动剂联合用药组。与健康对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。与帕金森病患者未服药组相比，###p<0.001。图3.年龄对帕金森病患者血浆中miRNAs的影响。将入组帕金森病患者分为四个年龄段40～59岁(HC组n＝34；PD组n＝58)、60～69岁(HC组n＝101；PD组n＝85)、70～79岁(HC组n＝76；PD组n＝87)和80～89岁(HC组n＝30；PD组n＝27)，分析比较健康对照组和帕金森病患者在不同年龄段血浆中miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p，miR-30e-5p表达水平变化。HC：健康对照；PD：帕金森病患者。与本文档来自技高网...

【技术保护点】
miRNA在制备诊断帕金森病的试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的miRNA选自下列中的任一种：a)miR‑105‑5p，b)miR‑21‑5p，c)miR‑29a‑5p，d)miR‑30e‑5p，e)miR‑105‑5p，miR‑21‑5p，miR‑29a‑5p和miR‑30e‑5p中任两种或任几种的组合。

【技术特征摘要】
1.miRNA在制备诊断帕金森病的试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的miRNA选自下列中的任一种：a)miR-105-5p，b)miR-21-5p，c)miR-29a-5p，d)miR-30e-5p，e)miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p和miR-30e-5p中任两种或任几种的组合。2.检测血浆中miRNA表达水平的试剂在制备诊断帕金森病的试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的miRNA选自下列中的任一种：a)miR-105-5p，b)miR-21-5p，c)miR-29a-5p，d)miR-30e-5p，e)miR-105-5p，miR-21-5p，miR-29a-5p和miR-30e-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：乐卫东，
申请(专利权)人：乐卫东，
类型：发明
国别省市：上海;31