人p51基因及其基因产物制造技术

本发明专利技术的目的是提供包含有作为细胞繁殖基因所公知的ｐ５３基因所关联的家族基因、新的人基因及其基因产物。本发明专利技术是以编码序列号１所示的氨基酸序列为特征的人ｐ５１基因，在序列号２中具有表示碱基序列号１４５－１４８８的人ｐ５１基因、具有该基因的载体，用该载体转化的宿主细胞、培养该宿主细胞，从得到的培养物回收具有序列号１所示的氨基酸序列ｐ５１蛋白的制造方法及序列号１所示的氨基酸序列ｐ５１蛋白。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新的人基因。更详细地说涉及作为抑制癌基因所公知的、与人p53基因及人p73基因类似的新的人基因及基因产物。
技术介绍
p53蛋白是以DNA型肿瘤病毒SV40的大型T抗原和结合核内蛋白而被发现，其基因(p53基因)被克隆着。最初，认为p53基因，通过与ras基因一起导入细胞，使来自胚胎的细胞被转化而得到的，而认为癌基因。可是，通过以后的研究，明显地看出，最初得到的p53基因的克隆是变异型，野生型倒是可以抑制变异型的转化。现在，p53基因的缺失或异常，在很多人的癌中被检测出，作为高发癌性基因病中所知道的Li Fraumeni症候群中，发现了p53基因配偶子变异等，可以认为p53基因是重要的癌抑制基因。人p53基因由393个氨基酸构成，大体上分为N末端结构域(第1～101的氨基酸领域)、芯结构域(第102～292的氨基酸领域)及C末端结构域(第293～393的氨基酸领域)的三个领域。N末端结构域包括酸性氨基酸和高脯氨酸领域等的复制控制所必须的领域，可认为是复制活性化结构域。另外C末端结构域包括很多的碱性氨基酸及形成四聚体的必需领域，可以认为担负着非特异DNA结合和DNA损伤的识别及抑制转化的作用。在人癌细胞检测出的p53基因的很多异常是误义变异，其大部分是相当从N末端到100～300氨基酸的部位的芯结构域，特别是集中在超过种被保留下的热点(Hot Spot)的领域。这样的芯结构域中的热点领域是涉及到p58蛋白和DNA结合的领域，实际上，由于该领域的变异阻碍了与DNA的特异结合。从以上，可明显地看出，p53蛋白与其他的基因特异结合后，具有控制复制因子的作用，该控制复制因子可以调节该基因的表达。作为用p53蛋白诱导复制的基因，可以举出p21基因、GADD45、细胞周期蛋白G、BAX及胰岛素类的生长因子结合蛋白。编码p21基因的蛋白质是细胞周期蛋白依赖性激活酶(CDK)的阻碍蛋白质，野生型p53蛋白可以通过p21抑制地调节细胞周期。另外也有报告，p21基因结合增殖细胞抗原(PCNA)可直接抑制DNA的复制。进而判明，p21基因是与诱导细胞的老化具有抑制DNA合成作用的SD11基因相同的基因。MDM2结合p53蛋白后可以将该蛋白的复制控制活性不活性化，推测可以作为负的反馈调节因子作用。IGF-BP3是IGF是信号化的负的调节因子。因此，由于p53蛋白的IGF-BP3因子的增加，其结果暗示p53蛋白可以导致抑制IGF性依赖性细胞的成长。另外，有报告说野生型p53蛋白可以诱导骨髓白血性细胞的编程性细胞的死亡。用放射线照射胸腺细胞编程细胞死亡的诱导对于p53缺损的老鼠不会产生、另外p53蛋白，可以诱导在水晶体、网膜、脑中失去正常网膜胚种基因(RB基因)活性的细胞的编程细胞的死。何瓦特氏提出，p53蛋白对于RB基因变异的研究是有用的、可以诱导含在RB基因变异的细胞的编程性细胞死亡。另外，对于只是表达具有温度感受性的p53基因的白鼠的红血球性细胞系，在温度下降时变异的p53基因返回野生型、诱导编程性细胞死亡，从其取出的p53基因在p53缺损的线纤维胚细胞系的软琼脂的培养基中可付与增殖的能力(anchorage-independency)。BAX可以结合作为编程性细胞死亡的抑制因子的bc1-2上，促进编程性细胞死亡。由于p53蛋白的BAX基因的增加和bc1-2的减少是与白鼠的白血病细胞株M1的编程性细胞死亡有关系，。另外，有报告说对于编程性细胞死亡的信号转导物之一的Fas，在其非小细胞肺癌和白血病中是增加的。从以上的很多研究。可以看出p53蛋白不限于p21基因，可以促进或抑制各种基因的复制。即使在复制调节机能缺损的变异型p53蛋白中，也显示了与细胞内的其他蛋白质的相互作用后传递信号能力和DNA的损伤修复功能。迄今所知道的p53的蛋白功能，可以举出，复制调节功能、与其他的蛋白质结合的信号传递功能、涉及DNA复制的蛋白质复合体的要素、DNA结合功能、外切核酸酶活性等，这些功能的复合作用的结果，可以引起细胞的细胞周期停止、诱导细胞编程性死亡、DNA的修复、DNA的复制调节及分化诱导。进而，p53蛋白的功能不仅是基因产生损伤时发生作用，例如在病毒感染、细胞因子刺激、低氧状态、核甘酸库的变化、药物引起的代谢异常等的各种的应激涉及到生体组织时，该刺激作为触发器会引起p53蛋白质的量及质的变化。接受量及质的调节的p53蛋白，通过与其他蛋白质的相互作用表达信号传递和控制其他基因复制的功能，接受生体紧张的生体的组织的细胞的DNA被进行复制调节，使细胞周期停止后修复细胞、通过编程性细胞死亡排除细胞或者促进细胞分化使生体从应激的状态得到缓解。人的肿瘤一半是存在p53基因的变异，所以近年来对于肿瘤的诊断和治疗，都在研究p53基因及其蛋白的临床的应用。使用可特异认识p53基因的变异部位的引物，进行PCR，检测淋巴细胞和体液中浸润的肿瘤细胞的方法，是可以预测肿瘤的浸润范围或者再发等的有效的诊断方法。进而，p53蛋白，由于具有编程性细胞死亡诱导功能，所以使用病毒.载体，向肿瘤细胞内导入野生型p53基因的治疗方法已在美国进行着。最近在日本，有几个地方也开始该基因的治疗。另一方面，又指出，人肿瘤半数以上不具有p53基因的变异，依此可以判断存在有其他蛋白，该蛋白具有类似p53蛋白抑制肿瘤生成的功能。本专利技术者首先发现p53的基因变异不是霍奇金型的恶性淋巴肿瘤(NHL)的前兆指标。近年，确认了与上述的p53基因高度相同的、被命名为p73的新基因。根据本专利技术者的见解，p73蛋白在复制活性化结构域内(1～45的氨基酸领域)与人p53显示29％的相同性，在有6个变异热点的相辅的保存领域的DNA结合结构域(第113～290的氨基酸领域)的相同性是63％，在低聚化领域(第319～363的氨基酸领域)的相同性是38％。可是，对C末端结构域，在p73蛋白和p53蛋白间看不到有明显的相同性。有报告说，通过p73蛋白过剩表达，可以抑制神经胚细胞株和SAOS2细胞(骨肉肿瘤细胞株)的生长，另外，通过p73的暂时的表达，可以促进微型·同源肾细胞的编程性细胞死亡。可是p73蛋白，在正常的组织中只是低量的发现，这一点上是与p53蛋白有着小小的区别。进而，神经胚细胞株中的p73蛋白的表达，在用紫外线照射和用低量的放线菌素D不能诱导的点上也是与p53蛋白不同。这样的p73蛋白不是具有与p53完全相同的功能，今后还需要进一步研究。迄今的观察，报告了此p73作为神经胚肿瘤上推测的肿瘤抑制因子的位置。本专利技术的目的是提供人肿瘤的形态形成关连的新基因及基因产物的信息。更详细地说，本专利技术的目的在于提供如上述的作为癌抑制基因的、与公知的p53基因类似性的新基因及其基因产物。进而，本专利技术的目的在于提供培养含有由该基因的部分DNA构成的引物和探针、该基因的载体、导入该载体的形质转化体及培养该形态转化体得到上述基因产物的制造方法。图的简单说明附图说明图1是与p53蛋白及p73β蛋白一起表示p51A蛋白的构造的结构域特征的图。图中，“TA”是复制活性领域、“DNA binding”是DNA的结合领域及“origo”是低聚领域。图2是表示用人51A基因编码的氨基酸序列与p53蛋白及p73本文档来自技高网...

【技术保护点】
编码以下（ａ）或（ｂ）的蛋白质的基因，（ａ）具有序列号１所示的氨基酸序列的蛋白质，（ｂ）具有序列号１的氨基酸序列中１个或多个氨基酸缺失、替换或插入的氨基酸序列，而且具有ｐ５１活性的蛋白质。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：井川洋二，井川俊太郎，带刀益夫，
申请(专利权)人：大塚制药株式会社，井川洋二，
类型：发明
国别省市：JP[日本]