LYRM2基因及其表达产物的新用途制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及LYRM2基因及其表达产物的新用途。为解决目前骨质疏松分子标记物稀缺的问题，发明专利技术人基于高通量测序结合生物信息学方法分析进行致病靶点基因的筛选，挑选出候选基因LYRM2，进一步，通过分子生物学实验证实了LYRM2基因与骨质疏松具有很好的相关性，同时设计了针对LYRM2的高效干扰RNA。本发明专利技术提供的骨质疏松辅助诊疗靶点具有很好的临床应用价值。

New use of LYRM2 gene and its expression product

The invention relates to the field of biomedicine, in particular to a new application of LYRM2 gene and its expression product. In order to solve the osteoporosis molecular markers of scarce, inventor of methodology of high-throughput sequencing combined with bioinformatics analysis based on the screening of pathogenic target genes, selected candidate gene LYRM2, further, through molecular biology experiments confirmed that LYRM2 gene and osteoporosis has a good correlation, and is designed for efficient interference RNA LYRM2. The present invention provides an auxiliary diagnostic and therapeutic target for osteoporosis, which has good clinical application value.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及LYRM2基因及其表达产物的新用途，更具体的涉及LYRM2基因及其表达产物在检测骨质疏松中的新应用。
技术介绍
骨质疏松症是一种以低骨量和骨组织微结构破坏为特征，导致骨质脆性增加和易于骨折的代谢性骨病。骨质疏松症后果严重，是老年人群致死、致残的常见原因。发生骨折后大多数的老年病人都存在慢性疼痛，永久的残疾，失去独立生活的能力，严重降低了生活质量；椎体骨折也常致背痛、身体畸形，身高缩短、驼背甚至残疾。此外，骨质疏松症医疗费用高，由其引起的骨折导致巨大的医疗资源占用，给社会带来沉重负担。鉴于骨质疏松症所带来的严重后果和社会经济负担及医疗资源的占用已经随社会的进步而日益明显，迫切需要寻找新的解决途径。科研工作者已经在尝试从分子生物学的角度寻找骨质疏松致病机理，并取得一定进展，研究表明骨质疏松症之所以出现特征性的低骨矿物密度(BMD)，主要原因是由于出现了不平衡的骨吸收和骨形成体系，也即破骨细胞骨吸收程度超过了成骨细胞作用的骨形成程度，免疫系统与骨代谢也具有很强的关联，特别是外周血单核细胞直接参与了破骨细胞形成。它们是破骨细胞的前体细胞，并分泌破骨细胞诱导因子。对人类自身的研究显示：外周血单核细胞中特定基因的表达水平和骨质疏松症密切相关。但是，目前人们对于骨质疏松症病因研究方面任然不是很清楚，相关的研究成果也十分匮乏。为解决目前骨质疏松分子标记物稀缺的问题，专利技术人对9例骨质疏松外周血样本及6例健康人对照外周血样本进行高通量测序，结合生物信息学方法分析进行致病靶点基因的筛选，挑选出候选基因LYRM2，进一步，通过实验证实了LYRM2基因与骨质疏松具有很好的相关性，同时设计了针对LYRM2的高效干扰RNA。本专利技术提供的骨质疏松辅助诊疗靶点具有很好的临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供LYRM2基因和/或其表达的蛋白在制备抗骨质疏松制剂和/或骨质疏松诊断制剂中的应用。本专利技术的目的在于提供检测LYRM2基因和/或其表达蛋白的制剂在制备骨质疏松诊断制剂中的应用。进一步，所述的骨质疏松的诊断制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法检测外周血中LYRM2基因和/或LYRM2蛋白的表达。荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。所述的用于荧光定量PCR方法检测骨质疏松中LYRM2基因的产品含有一对特异性扩增LYRM2基因的引物；所述的基因芯片包括与LYRM2基因的核酸序列杂交的探针。进一步，所述的骨质疏松的诊断制剂包括用免疫方法检测LYRM2蛋白的表达。优选所述免疫检测方法检测骨质疏松中LYRM2蛋白表达的为westernblot和/或ELISA和/胶体金检测方法。酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。常用的免疫胶体金检测技术：(1)免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。(2)免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。(3)斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。(4)胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。进一步，所述检测LYRM2蛋白的ELISA法为使用ELISA检测试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的LYRM2单克隆抗体。进一步，所述的试剂盒包括：包被LYRM2单克隆抗体的固相载体，酶标二抗，酶的底物，蛋白标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反应终止液等。进一步，所述检测LYRM2蛋白的胶体金法为使用检测试剂盒，所述的抗体可采用市售的LYRM2单克隆抗体。进一步，所述的胶体金检测试剂盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一步，所述的胶体金检测试剂盒硝酸纤维素膜上的检测区(T)喷点有抗LYRM2单克隆抗体、质控区(C)喷点有免疫球蛋白IgG。本专利技术的目的在于提供一种检测骨质疏松的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒检测基因LYRM2，采用特异的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQIDNO.9，下游引物序列为SEQIDNO.10。进一步，该PCR试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪，灵敏度高，定量快速准确、稳定性好，具有良好的应用前景。进一步，上述荧光定量PCR试剂盒组分包括：特异性引物、内参本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测LYRM2基因和/或LYRM2蛋白的制剂在制备骨质疏松诊断制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测LYRM2基因和/或LYRM2蛋白的制剂在制备骨质疏松诊断制剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，诊断制剂检测外周血中LYRM2基
因和/或LYRM2蛋白的表达。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，骨质疏松的诊断制剂采用荧光定
量PCR方法或基因芯片方法检测LYRM2基因的表达。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，荧光定量PCR方法检测骨质疏松
中LYRM2基因的产品含有一对特异性扩增LYRM2基因的引物；基因芯片包括
与LYRM2基因的核酸序列杂交的探针。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述一对特异性扩增LYRM2基因
的引物上游引物序列为SEQIDNO.9，下游引物序列为SEQIDNO.10。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，骨质疏松的诊断制剂包括用免疫
方法检测LYRM2蛋白的表达。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，免疫方法检测LYRM2蛋白表达的
为...

【专利技术属性】
技术研发人员：林慧芳，杨承刚，任静，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11