一种坦布苏病毒及其疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种坦布苏病毒及其疫苗，属于鹅坦布苏病毒疫苗技术领域。本发明专利技术提供了一种坦布苏病毒(Tembusu virus)GD06P105，由中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC 12670，保藏日期为2016年9月19日。本发明专利技术提供的坦布苏病毒遗传性稳定、安全性好，能够很好地应用于鹅坦布苏病毒弱毒疫苗的制备中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及鹅坦布苏病毒疫苗
，具体涉及一种坦布苏病毒及其疫苗。
技术介绍
鹅坦布苏病毒病是一种新发现的鹅急性病毒性传染病，其主要特征为发热、减食、瘫痪和种鹅产蛋下降。本病于2010年4月份发生于产蛋鸭，并在当年传播至全国主要水禽养殖地区的鸭群和鹅群。目前，在我国华北、华东和华南各省鹅生产区均有流行发生，已成为严重危害养鹅业的传染病之一。鹅坦布苏病毒病为新发传染病，具有高度传染性，且一年四季均可流行，给鹅坦布苏病毒病等防控带来了极大困难，而免疫接种是防治该病的最有效手段，但目前尚无有效的防控措施，没有针对鹅坦布苏病毒的疫苗可用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种坦布苏病毒GD06P105，本专利技术提供的坦布苏病毒遗传性稳定、安全性好，能够很好地应用于鹅坦布苏病毒弱毒疫苗的制备中。本专利技术提供了一种坦布苏病毒GD06P105，由中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC12670，保藏日期为2016年9月19日。本专利技术还提供了一种鹅坦布苏病毒弱毒疫苗，包括坦布苏病毒GD06P105和药学上可接受的载体和/或辅料。优选的是，所述疫苗中病毒的滴度在10-7.65/0.1mL以上。本专利技术还提供了上述技术方案所述疫苗的制备方法，包含以下步骤：将上述技术方案所述坦布苏病毒GD06P105接种至Vero细胞进行培养，当细胞病变达到80％时，将培养物进行冻融处理，得到病毒悬液；将所述病毒悬浮液离心，将所述离心得到的上清液与药学上可接受的载体和/或辅料混合，冻干得到鹅坦布苏病毒弱毒疫苗。本专利技术还提供了上述技术方案所述坦布苏病毒GD06P105在制备预防或治疗鹅坦布苏病毒药物中的应用。本专利技术提供了一种坦布苏病毒GD06P105，由坦布苏病毒制备得到的鹅坦布苏病毒弱毒疫苗遗传性稳定、安全性好，免疫次数少，避免蛋鹅出现减蛋和产蛋异常现象。试验效果表明，坦布苏病毒GD06P105制备得到的疫苗安全性良好，免疫后中和抗体滴度高，疫苗中病毒的滴度在10-7.65/0.1mL以上。生物保藏说明坦布苏病毒(Tembusuvirus)。本病毒保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.12670，保藏时间为2016年9月19日。具体实施方式本专利技术提供了一种坦布苏病毒GD06P105，由中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC12670，保藏日期为2016年9月19日。本专利技术所述坦布苏病毒GD06P105是坦布苏病毒GD06经传代获得的，本专利技术将坦布苏病毒GD06接种至原代细胞上进行原代培养，随后对原代培养得到的病毒接种至传代细胞上进行培养，得到坦布苏病毒GD06P105。本专利技术对所述坦布苏病毒GD06的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的坦布苏病毒GD06的市售产品即可。本专利技术所述原代细胞优选包括鸭胚成纤维细胞、鸭肾原代细胞，采用所述鸭胚成纤维细胞培养坦布苏病毒，能够提高其病毒滴度。本专利技术所述传代细胞优选包括Vero细胞或BHK-21，更优选将在鸭胚成纤维细胞上培养的病毒转到Vero细胞进行培养，所述Vero细胞的使用能够降低坦布苏病毒的毒力，提高病毒滴度并保留其免疫生物活性。本专利技术对所述原代培养和传代培养的条件没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的传代培养条件即可。本专利技术还提供了一种鹅坦布苏病毒弱毒疫苗，包括坦布苏病毒GD06P105和药学上可接受的载体和/或辅料。在本专利技术中，所述疫苗中病毒的滴度优选在10-7.65/0.1mL以上。本专利技术对所述药学上可接受的载体和/或辅料没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的药学上可接受的载体和/或辅料即可。如稀释剂、赋形剂和水等；填充剂如淀粉、蔗糖，乳糖、微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐和聚乙烯吡咯烷酮；冻存保护剂如明胶等；润湿剂如甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠，羟丙纤维素，交联羧甲基纤维素，琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇，十二烷基硫酸钠；吸附载体如高龄土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。本专利技术还提供了上述技术方案所述鹅坦布苏病毒弱毒疫苗的制备方法，包含以下步骤：将上述技术方案所述坦布苏病毒GD06P105接种至Vero细胞进行培养，当细胞病变达到80％时，将培养物进行冻融处理，得到病毒悬液；将所述病毒悬浮液离心，将所述离心得到的上清液与药学上可接受的载体和/或辅料混合，冻干得到鹅坦布苏病毒弱毒疫苗。本专利技术将坦布苏病毒GD06P105接种至Vero细胞进行培养，所述坦布苏病毒GD06P105是由中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心保藏的毒株。本专利技术对所述坦布苏病毒GD06P105的培养方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的弱毒疫苗的培养方法即可。在本专利技术中，当培养至细胞病变达到80％时，本专利技术将得到的培养物进行冻融处理，得到病毒悬液。本专利技术对所述细胞病变鉴定方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的细胞病变鉴定方法即可。在本专利技术中，所述反复进行冻融优选处理2～3次，本专利技术对所述冻存温度和时间没有特殊的限定，采用常规细胞冻存条件即可。具体的，在本专利技术的实施例中，优选把细胞培养瓶转入-80℃冰箱反复冻融2～3次，收集病毒悬液。得到病毒悬液后，本专利技术将所述病毒悬液进行离心，在所述离心前优选进行无菌检验，病毒悬液达标后，进行离心，得到上清液。在本专利技术中，所述离心的转速优选为10000～15000rpm，更优选为12000rpm；所述离心的时间优选为10～20min，更优选为15min。本专利技术对所述无菌检测的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的病毒悬液无菌检验方法即可。得到上清液后，本专利技术将所述上清液与药学上可接受的载体和/或辅料混合，冻干后得到鹅坦布苏病毒弱毒疫苗。将所述上清液和药学上可接受的载体和/或辅料混匀后。本专利技术将得到的混合料液进行冻干处理，得到鹅坦布苏病毒弱毒疫苗。在本专利技术中，所述冻干处理优选为在-20℃～-30℃的条件下冻存过夜后，真空冷冻干燥20～24h，所述真空冷冻干燥的时间更优选为22h。本专利技术对所述真空冷冻干燥使用的设备没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的真空冷冻干燥机即可。本专利技术还提供了上述技术方案所述坦布苏病毒GD06P105在制备预防或治疗鹅坦布苏病毒药物中的应用。所述药物可制备成多种制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、滴丸、口服液、注射剂等。下面结合具体实施例对本专利技术提供的坦布苏病毒及其疫苗做进一步详细的介绍，本专利技术的技术方案包括但不限于以下实施例。实施例1坦布苏病毒GD06P105的制备及检测坦布苏病毒GD06致弱(1)鸭胚成纤维细胞上传代培养：取无坦布苏病毒母源抗体的鸭胚成纤维细胞，用6％V/V小牛血清稀释成105/mL的细胞密度后，移至T25(5mL)细胞培养瓶内，于37℃，5％CO2细胞培养箱培养，次日用于接种坦布苏病毒GD06株。按1/10的培养基体积感染的病毒液，病毒的感染复数为1～5PFU/细胞，在病毒吸附细胞1h后，补加1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种坦布苏病毒(Tembusu virus)GD06P105，由中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC 12670，保藏日期为2016年9月19日。

【技术特征摘要】
1.一种坦布苏病毒(Tembusuvirus)GD06P105，由中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC12670，保藏日期为2016年9月19日。2.一种鹅坦布苏病毒弱毒疫苗，包括权利要求1所述坦布苏病毒GD06P105和药学上可接受的载体和/或辅料。3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中病毒的滴度在10-7.65/0.1mL以上。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：傅秋玲，傅光华，黄瑜，陈红梅，程龙飞，施少华，万春和，刘荣昌，林建生，
申请(专利权)人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35