【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术与诊断检测，更具体地，涉及一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。
技术介绍
1、鹅腺病毒(goose adenovirus)于1967年由csontos等首次从匈牙利鹅群中发现(csontos，1967)，随后该病毒在匈牙利及其周边地区蔓延。zsa等从匈牙利某2-4周龄发病雏鹅的肝脏和肠道中分离到7株goadv，并根据其限制性内切酶切割模式将其分为三种基因型(goadv-1、goadv-2和goadv-3)(zsa，1984)。kajan等对20世纪70年代自匈牙利某死亡雏鹅中分离的鹅腺病毒p29株进行全基因组序列测定，并根据病毒全基因组特征将其命名为鹅腺病毒4型(goadv-4)，国际病分类委员会将该毒株归类为腺病毒科、禽腺病毒属的鹅腺病毒a种(http://ictv.global/report/adenoviridae)。
2、2022年4月，本申请的专利技术人团队于国内首次从病死雏鹅中分离获得goadv-4，同时通过分子生物学手段获取了国内第一株goadv-4的全基因组序列(ch-fjzz-202201株，登录号：or842729)。goadv-4感染鹅的发病死亡率高达10％～30％不等，感染宿主和日龄有不断扩大趋势，给我国养鹅业造成了较大威胁。因此建立一种准确、快速、灵敏的检测方法对其进行流行动态监测，保障养鹅业健康发展迫在眉睫。
3、目前对goadv-4的检测方法主要有传统的病毒分离、电镜观察等。传统方法对病毒样本浓度与纯度要求均较高且步骤繁琐成本高昂，不适用
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测引物组，所述引物组由一对外引物goadv-4-f3和goadv-4-b3、一对内引物goadv-4-fip和goadv-4-bip以及环引物goadv-4-lb组成，上述引物的序列如下：
4、goadv-4-f3：cgggagtacctttcggaaga；
5、goadv-4-b3：gcgtgttggtcgtgtcatc；
6、goadv-4-fip：ggccaccgtctgcctaaacttattcagcagtttatgtctgccactt；
7、goadv-4-bip：ccgacacgcaatgtgactaccgcgtctgaatagggtaataccgg；
8、goadv-4-lb：gaaagcgcagagactgca。
9、一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测试剂盒，所述试剂盒包含所述的环介导等温扩增检测引物组。
10、一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测方法，所述检测方法使用所述的引物组，lamp反应体系如下：2×反应缓冲液12.5μl，40μmol/l goadv-4-fip和goadv-4-bip各1μl，10μmol/l goadv-4-f3和goadv-4-b3各0.5μl，10μmol/l goadv-4-lb 2μl，bst dna聚合酶1μl，待检样品cdna模板2μl，荧光目视检测试剂1μl，用超纯水补足至25μl，反应条件为64℃，反应时间为40min。
11、结果判定：
12、反应结束后若待测样本紫外线照射呈现白色亮光或自然光(肉眼观察)下可见绿色荧光，则判定为鹅腺病毒4型阳性；若待测样本紫外线照射呈现灰白色或自然光(肉眼观察)下未见绿色荧光，则判定为鹅腺病毒4型阴性。
13、本专利技术首次建立了特异性检测goadv-4的环介导等温扩增检测引物组及试剂盒，根据所述引物组建立一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测方法。该方法特异强，最低检测限为6.2×101拷贝/μl。采用本专利技术的引物组及检测方法可以特异性的检测鹅腺病毒4型，为基层和现场提供一种简便、快捷的检测鹅腺病毒4型的方法，本专利技术可填补相关研究领域空白，为新发鹅腺病毒4型感染的诊断提供依据，具有很好的应用前景。
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1.一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测引物组，其特征在于，所述引物组由一对外引物GoAdV-4-F3和GoAdV-4-B3、一对内引物GoAdV-4-FIP和GoAdV-4-BIP以及环引物GoAdV-4-LB组成，上述引物的序列如下：
2.一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的环介导等温扩增检测引物组。
3.一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述检测方法使用权利要求1所述的引物组。
4.根据权利要求3所述的一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，LAMP反应体系如下：2×反应缓冲液 12.5μL，40 μmol/L GoAdV-4- FIP和GoAdV-4-BIP 各1μL，10 μmol/L GoAdV-4-F3和GoAdV-4-B3各0.5μL，10μmol/L GoAdV-4-LB 2 μL，Bst DNA聚合酶1μL，待检样品cDNA模板2μL，荧光目视检测试剂1μL，用超纯水补足至25μL。
5.根据权利要求3所述的一种鹅腺病毒4型的环介
6.根据权利要求3所述的一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，结果判定标准为：反应结束后，若待测样本紫外线照射呈现白色亮光或自然光下可见绿色荧光，则判定为鹅腺病毒4型阳性；若待测样本紫外线照射呈现灰白色或自然光下未见绿色荧光，则判定为鹅腺病毒4型阴性。
...【技术特征摘要】
1.一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测引物组，其特征在于，所述引物组由一对外引物goadv-4-f3和goadv-4-b3、一对内引物goadv-4-fip和goadv-4-bip以及环引物goadv-4-lb组成，上述引物的序列如下：
2.一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的环介导等温扩增检测引物组。
3.一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述检测方法使用权利要求1所述的引物组。
4.根据权利要求3所述的一种鹅腺病毒4型的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，lamp反应体系如下：2×反应缓冲液 12.5μl，40 μmol/l goadv-4- fip和goa...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘荣昌，黄瑜，梁齐章，程龙飞，傅光华，陈红梅，万春和，傅秋玲，江南松，
申请(专利权)人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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