一种鸭坦布苏病毒的半灌流式培养方法技术

本发明专利技术公开一种鸭坦布苏病毒的半灌流式培养方法；包括步骤：1)采用细胞培养装置进行病毒增殖：将装有载体的细胞培养装置进行高压灭菌，加入培养液；无菌接入非洲绿猴肾细胞；2)更换培养液：每天测定培养液中葡萄糖含量以及pH值，进行培养液更换；3)病毒接种：接入含鸭坦布苏病毒的尿囊液，进行病毒扩增培养；4)补充培养液：收集粗制病毒液，然后补入等量的新鲜培养液继续培养；5)保存：将步骤4)收获的粗制病毒液于‑100～‑20℃，反复冻融1～5次，冻融后离心取细胞碎片、过滤，得到病毒液，‑20℃保存；本发明专利技术提高病毒生产效率，每培养一批细胞可以连续收获多次粗制病毒液。

【技术实现步骤摘要】
201610395175

【技术保护点】
一种鸭坦布苏病毒的半灌流式培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)采用细胞培养装置进行病毒增殖：将装有载体的细胞培养装置进行高压灭菌，加入培养液，在4～25℃的条件下培养12～36h后置于37℃水浴中20～30min；无菌接入非洲绿猴肾细胞，进行细胞扩增培养；2)更换培养液：每天测定培养液中葡萄糖含量以及pH值，当糖分为1～10mmol时，pH值为6.5～7.5时，进行培养液更换；3)病毒接种：当非洲绿猴肾细胞数量达到108～1010个时，接入含鸭坦布苏病毒的尿囊液，在37℃，5％CO2的条件下进行病毒扩增培养；4)补充培养液：接毒后每天进行葡萄糖含量以及pH值监测，当培养液中糖分为1～10mmol，pH值为6.5～7.5时，收集10～90％的粗制病毒液，然后补入等量的新鲜培养液继续培养；5)保存：将步骤4)收获的粗制病毒液于‑100～‑20℃，反复冻融1～5次，冻融后离心取细胞碎片、过滤，得到病毒液，‑20℃保存。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王伟，冯晓声，罗梦萍，王贵平，龚凤平，
申请(专利权)人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44