一种鉴别猪瘟病毒2.1亚型强毒株及其抗体的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种鉴别猪瘟病毒2.1亚型强毒株及其抗体的单克隆抗体。该单克隆抗体可以与猪瘟病毒2.1亚型强毒株特异性结合，但不与猪瘟病毒疫苗株结合，可用于检测猪瘟病毒2.1亚型强毒株E2蛋白、检测猪瘟病毒2.1亚型强毒株和鉴别猪瘟病毒2.1亚型强毒株和C株疫苗株，也可用于鉴别分别针对猪瘟病毒2.1亚型强毒株和C株疫苗株的抗体。猪瘟病毒2.1亚型强毒株和C株疫苗株的抗体。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别猪瘟病毒2.1亚型强毒株及其抗体的单克隆抗体


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种鉴别猪瘟病毒2.1亚型强毒株及其抗体的单克隆抗体。

技术介绍

[0002]猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病，在世界上许多养猪国家都有不同程度的流行，在我国被列为一类传染病，世界动物卫生组织(OIE)将其规定为必须申报的动物传染病之一。猪瘟病毒只有一个血清型，根据编码病毒的基因可分为多个亚型。我国目前流行的亚型多为2.1亚型和2.2亚型，其中2.1亚型又可细分为2.1a、2.1b、2.1c、和2.1d等四个型。我国在20世纪分离的猪瘟病毒强毒株命名为石门株，属于1.1亚型。将石门株在兔体上连续传代以致弱其毒力，获得了目前广泛使用的疫苗株，也称为猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(或C株疫苗株)。C株疫苗株与石门株及其他亚型的强毒株在血清学上存在高度交叉反应，现有的技术，比如检测猪群抗体水平的ELISA方法等在临床上无法区分猪群的阳性猪瘟病毒抗体是来源于强毒株感染(在我国强毒株通常为猪瘟病毒石门株)，还是来自于免疫的疫苗毒C株。此外，我国的猪群广泛使用C株疫苗，使猪瘟抗体始终处于较高水平，因而为猪瘟强毒的净化造成了极大的困扰。然而，根据病毒的保守序列差异性设计引物，用荧光定量PCR来直接鉴定猪瘟病毒的基因型，只适用于检测猪群正处于病毒活动期，或者正在排毒的时候，对于感染后期或隐性带毒的猪群无法识别。因此，研制可以区分猪瘟病毒2.1亚型强毒株和C株疫苗株及其抗体的检测方法对养猪业具有重要的意义。

技术实现思路

[0003]本专利技术第一方面的目的，在于提供一种鉴别猪瘟病毒2.1亚型强毒株与C株疫苗株和/或猪瘟病毒2.1亚型强毒株抗体与C株疫苗株抗体的单克隆抗体。
[0004]本专利技术第二方面的目的，在于提供编码本专利技术第一方面的单克隆抗体的核酸分子。
[0005]本专利技术第三方面的目的，在于提供包含本专利技术第二方面的核酸分子的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞。
[0006]本专利技术第四方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的单克隆抗体、本专利技术第二方面的核酸分子、或本专利技术第三方面的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞的应用。
[0007]本专利技术第五方面的目的，在于提供杂交瘤细胞株。
[0008]本专利技术第六方面的目的，在于提供一种包含本专利技术第一方面的单克隆抗体和/或本专利技术第五方面的杂交瘤细胞株的试剂盒。
[0009]本专利技术第七方面的目的，在于提供一种非诊断目的体外方法。
[0010]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0011]本专利技术的第一个方面，提供一种鉴别猪瘟病毒2.1亚型强毒株与C株疫苗株和/或
猪瘟病毒2.1亚型强毒株抗体与C株疫苗株抗体的单克隆抗体，为MM1或MM5；
[0012]所述MM1与猪瘟病毒2.1亚型强毒株E2蛋白的第30～39位氨基酸序列组成的表位特异性结合；
[0013]所述MM5与猪瘟病毒2.1亚型强毒株E2蛋白的第19～23位氨基酸序列组成的表位特异性结合；
[0014]所述猪瘟病毒2.1亚型强毒株E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0015]优选地，所述MM1与猪瘟病毒2.1亚型强毒株E2蛋白的第30、35、39位氨基酸组成的表位特异性结合；
[0016]所述MM5与猪瘟病毒2.1亚型强毒株E2蛋白的第19、23位氨基酸组成的表位特异性结合。
[0017]优选地，所述MM1包含重链可变区和轻链可变区；
[0018]所述重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
[0019]所述重链可变区CDR1的氨基酸序列为：
[0020]a)GYTFSRYW(SEQ ID NO.47)；或
[0021]b)SEQ ID NO.47所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0022]所述重链可变区CDR2的氨基酸序列为：
[0023]a)ILPGSGSTN(SEQ ID NO.48)；或
[0024]b)SEQ ID NO.48所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0025]所述重链可变区CDR3的氨基酸序列为：
[0026]a)ASITTKAWFAY(SEQ ID NO.49)；或
[0027]b)SEQ ID NO.49所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0028]所述轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
[0029]所述轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：
[0030]a)KSVSTS(SEQ ID NO.50)；或
[0031]b)SEQ ID NO.50所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0032]所述轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：
[0033]a)LVS(SEQ ID NO.51)；或
[0034]b)SEQ ID NO.51所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0035]所述轻链可变区CDR3的氨基酸序列为：
[0036]a)QHIRELTRS(SEQ ID NO.52)；或
[0037]b)SEQ ID NO.52所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列。
[0038]优选地，所述MM5包含重链可变区和轻链可变区；
[0039]所述重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
[0040]所述重链可变区CDR1的氨基酸序列为：
[0041]a)GYTFTSYW(SEQ ID NO.53)；或
[0042]b)SEQ ID NO.53所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0043]所述重链可变区CDR2的氨基酸序列为：
[0044]a)IDPSDSYTR(SEQ ID NO.54)；或
[0045]b)SEQ ID NO.54所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0046]所述重链可变区CDR3的氨基酸序列为：
[0047]a)TREVVTPFDY(SEQ ID NO.55)；或
[0048]b)SEQ ID NO.55所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0049]所述轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体为MM1或MM5；所述MM1包含MM1重链可变区和MM1轻链可变区；所述MM1重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述MM1重链可变区CDR1的氨基酸序列为：a)GYTFSRYW(SEQ ID NO.47)；或b)SEQ ID NO.47所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM1重链可变区CDR2的氨基酸序列为：a)ILPGSGSTN(SEQ ID NO.48)；或b)SEQ ID NO.48所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM1重链可变区CDR3的氨基酸序列为：a)ASITTKAWFAY(SEQ ID NO.49)；或b)SEQ ID NO.49所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM1轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述MM1轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：a)KSVSTS(SEQ ID NO.50)；或b)SEQ ID NO.50所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM1轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：a)LVS(SEQ ID NO.51)；或b)SEQ ID NO.51所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM1轻链可变区CDR3的氨基酸序列为：a)QHIRELTRS(SEQ ID NO.52)；或b)SEQ ID NO.52所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM5包含MM5重链可变区和MM5轻链可变区；所述MM5重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述MM5重链可变区CDR1的氨基酸序列为：a)GYTFTSYW(SEQ ID NO.53)；或b)SEQ ID NO.53所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM5重链可变区CDR2的氨基酸序列为：a)IDPSDSYTR(SEQ ID NO.54)；或b)SEQ ID NO.54所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM5重链可变区CDR3的氨基酸序列为：
a)TREVVTPFDY(SEQ ID NO.55)；或b)SEQ ID NO.55所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM5轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述MM5轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：a)KSVSTS(SEQ ID NO.56)；或b)SEQ ID NO.56所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM5轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：a)LVS(SEQ ID NO.57)；或b)SEQ ID NO.57所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM5轻链可变区CDR3的氨基酸序列为：a)QHIRELTRS(SEQ ID NO.58)；或b)SEQ ID NO.58所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述MM1包含重链可变区和轻链可变区；所述MM1重链可变区的氨基酸序列为：a)如SEQ ID NO.43所示的氨基酸序列；或b)SEQ ID NO.43所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；所述MM1轻链可变区的氨基酸序列为：a)如SEQ ID NO.44所示的氨基酸序列；或b)SEQ ID NO.44所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘春根，黄攀，张俊，赵玉林，王宁，
申请(专利权)人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：