犬细小病毒纳米抗体CPV-VHH-E3及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种犬细小病毒纳米抗体CPV

【技术实现步骤摘要】
犬细小病毒纳米抗体CPV
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VHH
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E3及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫学领域，特别是涉及一种犬细小病毒纳米抗体CPV
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VHH
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E3及其应用。

技术介绍

[0002]犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)属于细小病毒科、细小病毒属。CPV是一种DNA病毒，但它的变异速度非常快，几乎接近一些RNA病毒。该病毒中最广为人知的病毒是犬细小病毒2型(CPV
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2)，1978年CPV
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2在美国爆发并被报道，从那之后CPV以极快的速度席卷全球，相继出现了CPV
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2a、CPV
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2b、CPV
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2c变异毒株。与最开始的CPV
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2型相比，新突变型毒株的致病性和传播性更强，不仅犬类对其更加易感，宿主范围还变的更广，猫也可以感染并发病，尤其CPV
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2c型突变株更是呈现出了毒力更强、致病力更高和死亡率更快等特点，这也使得CPV的防治工作更加困难。
[0003]疫苗接种是目前防控CPV最有效的手段，尤其是在适当的时间为幼犬进行接种。目前，使用最多和效果最好的疫苗是弱毒活疫苗，它可以有效保护易感的犬类免受CPV的感染。弱毒疫苗使用的毒株多是由CPV
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2弱化所得，具有很好的免疫原性，并且免疫持续期长。但是，随着野毒株的不断变异，异源病毒之间的交叉保护反应较弱，免疫失败的案例时有发生。同时，活疫苗还存在着散毒和毒力返强等生物安全风险，因此虽然弱毒活疫苗是目前使用率最高且免疫保护效果最好的疫苗，但是它并不是预防CPV的最佳选择，随着疫苗研究技术的不断发展，活疫苗必将逐渐被淘汰。
[0004]纳米抗体是衍生于HCAbs的抗体，HCAbs是一种仅存在于驼科动物和鲨鱼体内的一种天然缺失轻链、仅由重链组成的抗体。这些重链抗体(HCAbs)的抗原结合位点仅由单个结构域形成，即重链抗体的可变区(Variable domain of heavy chain of heavy chain antibody,VHH)，克隆此结构所形成的的抗体是天然形成的最小抗体片段，因此也被称为纳米抗体(Nanobodies,Nab)。纳米抗体在骆驼科动物中被命名为VHH。近年来，纳米抗体应用在动物疫病领域的相关研究也越来越多。例如：杨利(2017)等利用重组的抗PCV2纳米抗体作为捕获抗体，构建了一种定量检测PCV2的ELISA方法。在该方法中，纳米抗体的应用有效降低了检测时的交叉反应，为猪圆环病毒疫苗的生产提供了一种更好的病毒含量测定方法。杨艳(2021)等通过噬菌体展示技术构建了针对牛病毒性腹泻(BVDV)病毒的纳米抗体文库，并筛选出一个与BVDV
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NS3蛋白反应良好的纳米抗体序列，为BVDV的预防和控制及纳米抗体应用开发奠定了一定的基础。而目前，还没有用于防控和治疗犬细小病毒的纳米抗体报道过。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种犬细小病毒纳米抗体CPV
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VHH
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E3及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过噬菌体展示技术构建了犬细小病毒的纳米抗体免疫文库，通过筛选获得特异性抗CPV纳米抗体CPV
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VHH
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E3，通过试验验证该纳米抗体可以特异性结合
CPV。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种犬细小病毒纳米抗体CPV
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VHH
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E3，其重链可变区序列由如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列组成。
[0008]SEQ ID NO:1如下：
[0009]QLQLVESGGGSVQPGGSLRLSCAASGFTLDFYRVGWFRQAPGKERQGVACIGSAGDRTFYVDSVKGRFTISKDNTKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAAVLSPRITSVQAMCTHHGEGFDYWGQGTQVTVSSEPKTPKPQ
[0010]本专利技术还提供一种编码所述的纳米抗体CPV
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VPP
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E3的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0011]SEQ ID NO：2如下：
[0012]CAGTTGCAGCTCGTGGAGTCGGGTGGAGGCTCGGTGCAACCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTGGATTTTTATCGCGTAGGCTGGTTCCGCCAGGCCCCAGGGAAGGAGCGTCAGGGGGTCGCATGTATTGGTAGTGCTGGTGATAGGACCTTCTATGTGGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAAAGACAACACCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACAGCCGTTTATTACTGTGCAGCAGTTCTTAGTCCTCGGATTACTAGTGTTCAGGCTATGTGTACCCATCATGGCGAAGGGTTTGACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCAGAACCCAAGACACCAAAACCACAA
[0013]本专利技术还提供一种含有所述的基因的表达载体。
[0014]优选的是，所述表达载体为pcDNA3.1。
[0015]本专利技术还提供一种含有所述的表达载体的宿主细胞。
[0016]优选的是，所述宿主细胞为HEK293F细胞。
[0017]本专利技术还提供一种所述的纳米抗体CPV
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VHH
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E3在制备抗犬细小病毒药物或者疫苗中的应用。
[0018]本专利技术还提供一种抗犬细小病毒的组合物，所述组合物包括所述的纳米抗体CPV
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CHH
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E3。
[0019]本专利技术公开了以下技术效果：
[0020]本专利技术通过噬菌体展示技术成功构建了纳米抗体的CPV免疫文库，初始文库容量为2
×
106CFU/mL，文库多样性良好。通过三轮特异性淘选，成功筛选出特异性的纳米抗体序列CPV
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VHH
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E3。然后再利用基因重组技术，通过哺乳动物细胞表达系统成功表达出重组的纳米抗体CPV
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VHH
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E3，并且经ELISA、IFA鉴定表明该纳米抗体能特异性结合CPV。因此，本专利技术有望开发出可用于CPV的临床诊断和治疗的纳米抗体新型制剂，为纳米抗体应用于兽用生物制品领域提供一定的理论储备。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种犬细小病毒纳米抗体CPV
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VHH
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E3，其特征在于，其重链可变区序列由如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列组成。2.一种编码权利要求1所述的纳米抗体CPV
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VPP
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E3的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。3.一种含有权利要求2所述的基因的表达载体。4.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为pcDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾红，鑫婷，朱鸿飞，冯倩倩，袁维峰，侯绍华，郭晓宇，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：