非洲猪瘟病毒P22蛋白的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及非洲猪瘟病毒P22蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明专利技术提供的单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.2所示，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.4所示。根据本发明专利技术提供的单克隆抗体的可变区序列能特异性、保守性地结合非洲猪瘟病毒P22蛋白，并且可高效价地用于多个组织的免疫组化检测且背景干净，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
非洲猪瘟病毒P22蛋白的单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术属于病毒疫病诊断技术和动物检疫领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒P22蛋白的单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触的烈性传染性疾病，以高热、食欲废绝、皮肤和内脏器官出血为临床特征(与猪瘟表现相似)，病程短、发病率高、病死率高(可高达100％)，特别地传染源多、传播途径多、传播方式多，一旦发生损失惨重。ASF于1921年在肯尼亚首次被发现，随后在非洲南部和东部的许多国家均发现ASFV的存在。自2018年8月3日中国确诊首例发生于辽宁省沈阳市沈北新区的非洲猪瘟疫情以来，非洲猪瘟迅速在国内各省市蔓延，疫情持续扩大，一旦确诊就要采取封锁、扑杀、无害化处理、消毒等处置措施，对整个行业的影响是地震级的。ASF为世界动物卫生组织(OIE)的法定报告动物疫病，为我国规定的动物一类疾病，受到世界各国的高度重视。
[0003]ASFV是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员，是目前已知的唯一一种DNA虫媒病毒，是一种有囊膜的单分子线状双链DNA病毒，其基因组长约170kb-193kb，是动物病毒中基因组最大的病毒之一，其基因组是口蹄疫病毒的24倍、猪瘟病毒的15倍。非洲猪瘟病毒P22蛋白(ASFV P22蛋白)又称KP177R，是由ORF KP177R基因编码的一大小为22kD的蛋白，是ASFV主要的结构蛋白，具体功能不是很清楚。ASFV主要感染猪和野猪，可同时在脊椎动物和无脊椎动物中复制。目前缺乏有效疫苗和特异性治疗手段，使ASF成为目前危害养猪业的最严重疫病之一。对ASF的控制目前只能依赖快速诊断、对发病动物的捕杀，以及采取有效的检疫措施和严格的卫生措施。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种特异性结合非洲猪瘟病毒P22蛋白的单克隆抗体及其应用。
[0005]本专利技术的第一方面提供了一种特异性结合非洲猪瘟病毒P22蛋白的抗体或抗体片段的可变区序列，所述可变区序列包括SEQ.ID No.2所示的氨基酸序列或其保守性变异体和SEQ.ID No.4所示的氨基酸序列或其保守性变异体。
[0006]根据本专利技术，氨基酸序列的保守性变异体可以经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得。
[0007]根据本专利技术，所述可变区序列能够特异性结合非洲猪瘟病毒P22蛋白。
[0008]根据本专利技术的一些实施方式，所述抗体为单克隆抗体或基因工程抗体。
[0009]根据本专利技术的优选实施方式，所述抗体为单克隆抗体。
[0010]根据本专利技术的一些实施方式，所述抗体为单链抗体，所述单链抗体的重链可变区为SEQ.ID No.3所示序列或其简并序列编码，轻链可变区为SEQ.ID No.5所示序列或其简并
序列编码。
[0011]根据本专利技术的一些实施方式，所述基因工程抗体包括选自单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体和猪源单克隆抗体中的一种或多种。
[0012]本专利技术的第二方面提供了一种特异性结合非洲猪瘟病毒P22蛋白的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段包括SEQ.ID No.2所示的氨基酸序列或其保守性变异体的重链可变区和SEQ.ID No.4所示的氨基酸序列或其保守性变异体的轻链可变区。
[0013]根据本专利技术，氨基酸序列的保守性变异体可以经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得。
[0014]根据本专利技术，所述抗体或所述抗体的片段仍保持特异性结合非洲猪瘟病毒P22蛋白的能力。
[0015]根据本专利技术的一些实施方式，所述抗体为单克隆抗体或基因工程抗体。
[0016]根据本专利技术的优选实施方式，所述抗体为单克隆抗体。
[0017]根据本专利技术的一些实施方式，所述抗体为单链抗体，所述单链抗体的重链可变区为SEQ.ID No.3所示序列或其简并序列编码，轻链可变区为SEQ.ID No.5所示序列或其简并序列编码。
[0018]根据本专利技术的一些实施方式，所述基因工程抗体包括选自单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体和猪源单克隆抗体中的一种或多种。
[0019]本专利技术的第三方面提供了一种杂交瘤细胞，其产生根据第二方面所述的抗体或抗体片段。
[0020]根据本专利技术的一些实施方式，所述杂交瘤细胞分泌本专利技术的特异性结合非洲猪瘟病毒P22蛋白的抗体。
[0021]本专利技术的第四方面提供了一种单克隆抗体，其中，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.2所示，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.4所示。
[0022]根据本专利技术的一些实施方式，所述单克隆抗体与非洲猪瘟病毒P22蛋白特异性结合。
[0023]根据本专利技术的一些实施方式，所述单克隆抗体对ASFV P22蛋白的ELISA效价为1∶1024000，具有良好的反应性，还可用于免疫组化对不同组织的检测。
[0024]根据本专利技术的一些实施方式，所述重链可变区的氨基酸序列由SEQ ID No.3所示的碱基序列或其简并序列编码。
[0025]根据本专利技术的一些实施方式，所述轻链可变区的氨基酸序列由SEQ ID No.5所示的碱基序列或其简并序列编码。
[0026]本专利技术的第五方面提供了一种杂交瘤细胞，其产生根据第四方面所述的单克隆抗体。
[0027]根据本专利技术的一些实施方式，所述杂交瘤细胞分泌所述单克隆抗体。所述杂交瘤细胞能有效分泌单克隆抗体，且分泌的单克隆抗体纯度较高。
[0028]本专利技术的第六方面提供了一种试剂盒，其包括根据第四方面所述的单克隆抗体。
[0029]本专利技术的第七方面提供了一种根据第四方面所述单克隆抗体或根据第六方面所述的试剂盒在制备预防或治疗非洲猪瘟的药物中的应用。
[0030]根据本专利技术提供的单克隆抗体对于非洲猪瘟病毒ASFV P22蛋白的特异性良好，并
且可高效价地用于多个组织的免疫组化检测且背景干净，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
[0031]以下，对本专利技术的实施方式进行说明。
[0032]术语“非洲猪瘟病毒”(African swine fever virus,ASFV)是目前已知的唯一DNA虫媒病毒，是一种有囊膜的单分子线状双链DNA病毒，其基因组长约170kb-193kb。
[0033]术语“非洲猪瘟”(African swine fever,ASF)由ASFV引发猪的一种急性、热性、高度接触的烈性传染病，以高热、食欲废绝、皮肤和内脏器官出血为临床特征，且病程短、病死率高(可高达100％)。ASF的临床症状与猪瘟非常相似，自然感染的潜伏期为3-5天，也可延长至19天，个别可长达28天。根据病毒毒力和感染途径不同，其表现可分为最急性、急性、亚急性和慢性4种类型本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合非洲猪瘟病毒P22蛋白的抗体或抗体片段的可变区序列，所述可变区序列包括SEQ.ID No.2所示的氨基酸序列或其保守性变异体和SEQ.ID No.4所示的氨基酸序列或其保守性变异体。2.一种特异性结合非洲猪瘟病毒P22蛋白的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段包括SEQ.ID No.2所示的氨基酸序列或其保守性变异体的重链可变区和SEQ.ID No.4所示的氨基酸序列或其保守性变异体的轻链可变区。3.根据权利要求2所述的抗体或抗体片段，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体或基因工程抗体；优选地，所述基因工程抗体包括选自单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体和猪源单克隆抗体中的一种或多种。4.一种杂交瘤细胞，其产生根据权利要求2或3所述的抗体或抗体片段。5.一种单克隆抗体，其中，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，颜世君，黄甜，
申请(专利权)人：洛阳普泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：