特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体及其产品与应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体及其产品与应用。本发明专利技术的抗体含有氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的轻链可变区。该抗体识别的抗原表位位于非洲猪瘟病毒CD2v蛋白，与非洲猪瘟病毒反应呈阳性，可高效价地用于多个组织的免疫组化检测。组化检测。

【技术实现步骤摘要】
特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体及其产品与应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别地涉及一种特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体及其产品与应用。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触的烈性传染性疾病，临床上以高热、皮肤发绀、淋巴结及脏器广泛出血为主要特征，病程短，病死率可高达100％。临床症状和病理变化均类似于急性猪瘟，在诊断时极易误诊，表现高热、皮肤充血发绀、流产、水肿及脏器出血。该病在我国被列为一类动物疫病，属于世界动物卫生组织(OIE)的法定报告的动物疫病。
[0003]ASFV是非洲猪瘟相关病毒科(Asfarviridae)、非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的唯一成员，也是唯一已知的DNA虫媒病毒。ASFV是一种大而复杂的二十面体、有双层囊膜的双股线状DNA病毒(170～194kb)，病毒粒子直径约为260nm，含有151～167个开放阅读框，至少编码160多种蛋白质。ASFV主要感染巨噬细胞，通过内吞和巨饱饮等作用完成病毒入侵，其DNA复制、病毒组装和释放均在巨噬细胞中进行。
[0004]ASFV CD2v是ASFV外层囊膜的糖蛋白，属于I型跨膜蛋白。ASFV CD2v是由EP402R基因编码，其由N端信号肽(Signal peptide，SP)、胞外的2个免疫球蛋白样结构域(Immunoglobulin/>‑
like domain，IG)、跨膜区(Transmembrane domain，TM)及C端胞内结构域组装而成的糖蛋白，其胞外区免疫球蛋白样结构域的氨基酸序列与宿主的CD2蛋白相似，可在T细胞和NK细胞中表达；胞内区部分与宿主的CD2蛋白没有明显的相似性。
[0005]CD2v的生物学功能主要包括以下几种：(1)介导ASFV血细胞吸附，由于猪红细胞表面具有CD2配体，CD2v可以介导ASFV对血细胞吸附，并且CD2v胞外结构域是导致血细胞吸附的关键蛋白。ASFV感染细胞可通过吸附在红细胞表面，随着血液的流动有助于病毒在宿主体内的扩散传播。(2)免疫逃逸，CD2v的表达是抑制淋巴细胞增殖所必需的，且参与免疫逃逸。(3)参与免疫保护。(4)增强ASFV在软蜱体内复制。由此可见，基于CD2v蛋白的研究意义重大。然而，作为ASFV主要外膜蛋白和重要抗原蛋白，CD2v分子结构仍未被解析。
[0006]因此，其单克隆抗体的制备，可为ASFV检测及其CD2v蛋白的结构解析提供重要工具。
[0007]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0008]本专利技术的第一目的在于提供一种特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体。
[0009]本专利技术的第二目的在于提供与上述抗体相关的生物材料。
[0010]本专利技术的第三目的在于提供上述抗体的制备方法。
[0011]本专利技术的第四目的在于提供上述抗体或生物材料的应用。
[0012]本专利技术的第五目的在于提供一种非洲猪瘟病毒CD2v阻断ELISA抗体检测试剂盒。
[0013]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0014]一种特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体，抗体含有氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的轻链可变区。
[0015]YDHDYAKLGTELGSTSNGRQCAGIALTSRMKLWLNWVKQSHGKSLEWIGVIDPNNGGTTYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMEVRSLTSEYSAVYYCARYGKGIGLDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO.4)。
[0016]DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAVDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO.6)。
[0017]抗体的重链和轻链中，其N端均含有氨基酸组成和排列变化很大的可变区，其中，含有能与抗原表位互补结合的抗原结合部位，其决定着抗体与相应抗原表位结合的特异性，负责识别及结合抗原，从而发挥免疫效应。本专利技术中的抗体含有氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的轻链可变区，其可以特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白，抗体阻断率＞80％。
[0018]在优选的实施方式中，所述抗体可以为单克隆抗体或基因工程抗体，其中，基因工程抗体包括嵌合抗体、改型抗体或小分子抗体，小分子抗体例如可以为Fab(由完整的轻链和Fd构成)、Fv(由VH和VL构成)或ScFv(单链抗体，VH和VL之间由一连接肽连接而成)。
[0019]在优选的实施方式中，所述抗体为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，优选为IgG，进一步优选的，抗体为本专利技术实施例筛选得到的单克隆抗体5G8，重链亚类为IgG2a，轻链亚类为kappa，或抗体为本专利技术构建的单链抗体5G8。
[0020]本专利技术中的抗体可以为人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。例如利用与上述抗体相关的生物材料进行生物表达得到抗体，优选地，生物材料为如下任一种：
[0021](a)核酸分子，含有编码所述抗体可变区的序列；
[0022](b)表达盒，含有(a)中核酸分子；
[0023](c)重组载体，含有(a)中核酸分子或(b)中表达盒；
[0024](d)重组真核细胞，含有(a)中核酸分子、(b)中表达盒或(c)中重组载体；
[0025](e)重组原核细胞，含有(a)中核酸分子、(b)中表达盒或(c)中重组载体；
[0026](f)抗原，所述抗原用于免疫产生所述抗体或用于检测所述抗体。
[0027]“核酸分子”可以是DNA，如cDNA或重组DNA，也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。
[0028]“表达盒”包含多核苷酸序列，多核苷酸序列编码待表达的多肽(抗体)和控制其表达的序列如启动子、信号肽序列以及任选地增强子序列，包括顺式作用转录性控制单元的任何组合。控制基因表达(即其转录和转录产物翻译)的序列常称作调节单元。调节单元的大多数部分位于基因的编码序列上游并与之有效连接。表达盒也可以含有包含多聚腺苷化位点的下游3'非翻译区。
[0029]“重组载体”的载体骨架可以为质粒、噬菌体或病毒。
[0030]“重组真核细胞”的宿主细胞可以为酵母或哺乳动物细胞等。
[0031]“重组原核细胞”的宿主细胞可以为细菌或藻等。
[0032]在优选的实施方式中，编码抗体重链可变区的核酸序列如SEQ ID NO.5所示，或者，上述DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或，进行一个或几个碱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体含有氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的轻链可变区。2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体或基因工程抗体，其中，基因工程抗体包括嵌合抗体、改型抗体或小分子抗体；优选地，所述抗体为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。3.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体或单链抗体。4.与权利要求1至3中任一项所述的抗体相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料为如下任一种：(a)核酸分子，含有编码所述抗体可变区的序列；(b)表达盒，含有(a)中核酸分子；(c)重组载体，含有(a)中核酸分子或(b)中表达盒；(d)重组真核细胞，含有(a)中核酸分子、(b)中表达盒或(c)中重组载体；(e)重组原核细胞，含有(a)中核酸分子、(b)中表达盒或(c)中重组载体；(f)抗原，所述抗原用于免疫产生所述抗体或用于检测所述抗体。5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，编码抗体重链可变区的核酸序列为(i)或(ii)：(i)核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；(ii)与SEQ ID NO.5具有75％以上同一性，且编码所述抗体重链可变区的DNA；优选地，编码抗体轻链可变区的核酸序列为(iii)或(iv)：(iii)核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；(iv)与SEQ ID NO.7具有75％以上同一性，且编码所述抗体轻链可变区的DNA；优选地，所述重组真核细胞为杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞生产所述抗体；优选地，所述杂交瘤细胞由融合蛋白CD2v
‑
mFc作为免疫原、融合蛋白gD
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CD2v作为筛选抗原制备得到；优选地，用于免疫产生所述抗体的抗原为融合蛋白CD2v
‑
mFc，编码融合蛋白CD2v
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mFc的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；优选地，用于检测所述抗体的抗原为融合蛋白gD
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CD2v，编码融合蛋白g...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，郝丽影，邓均华，
申请(专利权)人：洛阳普泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：