本发明专利技术提供了特异性结合SEA型O型口蹄疫病毒的单克隆抗体4E3和单克隆抗体4D5，以及以单克隆抗体4E3为包被抗体，以单克隆抗体4D5为酶标抗体的双抗夹心试剂盒，本发明专利技术的试剂盒能定量检测SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒含量，能检测单苗、多价苗、或联苗中SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒的含量；还能定量检测半成品疫苗或成品疫苗中的抗原含量。疫苗中的抗原含量。疫苗中的抗原含量。
【技术实现步骤摘要】
O型口蹄疫病毒单克隆抗体及其应用
[0001]本专利技术涉及O型口蹄疫病毒单克隆抗体，具体为SEA型O型口蹄疫病毒单克隆抗体，分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞，以及含单克隆抗体对的双抗体夹心检测试剂盒和应用，属于生物
技术介绍
[0002]口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄动物易患的一种热性、急性、高度接触性传染病。该病传播迅速，发病率高，该病的爆发和流行给全球养殖业带来了巨大的经济损失，世界动物卫生组织(OIE)和联合国粮农组织(FAO)将其列为A类烈性传染病之首，我国将其列为一类传染病第一位。
[0003]口蹄疫病毒有7个血清型(A、O、C、Asia I、SAT1、SAT2和SAT3型)，极易发生变异，且型与型之间无交叉免疫保护作用。其中我国主要流行O型口蹄疫病毒和A型口蹄疫病毒。疫苗免疫是控制此病、保护家畜免受危害的有效措施。目前用于预防口蹄疫的疫苗以全病毒灭活苗和合成肽疫苗为主，但全病毒灭活苗存在生物安全风险。病毒样颗粒(VLPs)是一种在体外和/或体内表达时能够自主包装成病毒外壳结构的类病毒粒子，它们是具有病毒的相似外壳结构但不具有病毒复制能力的假病毒。VLPs疫苗能有效地激发机体产生抗感染，抗肿瘤免疫，基于病毒样颗粒设计的疫苗是一种较为理想的疫苗形式。因此，安全有效的基于病毒样颗粒的亚单位疫苗是目前研究的热点。
[0004]目前口蹄疫O型流行毒株以SEA型和CATHAY型两种拓扑型为主，因此，对口蹄疫O型病毒样颗粒亚单位疫苗的研发也以上述拓扑型为主展开，研发中试、生产时最关键的技术要点是亚单位疫苗半成品、成品检验中如何准确定量蛋白含量，特别是多种蛋白混合后如何鉴别各自的蛋白。
[0005]目前，常用的蛋白定量方法有BCA法、Bradford法或Lowry法，但仅用于蛋白定量，均不能区分多种蛋白混合后不同蛋白的含量。
[0006]因此，亟需一种定量检测口蹄疫O型病毒蛋白含量的方法，其不仅能检测口蹄疫O型病毒蛋白含量，也能从多种蛋白混合物中检测口蹄疫O型病毒蛋白含量；还需要对半成品疫苗和成品疫苗中抗原含量同时进行检测，以满足产品质量检测的需要。
技术实现思路
[0007]基于单克隆抗体技术建立的双抗体夹心ELISA方法可以特异性的检测不同的蛋白，且能准确有效的定量蛋白含量，为病毒亚单位疫苗的研发提供支持。为解决现有技术的不足，本专利技术提供了一对能特异性结合O型口蹄疫病毒的单克隆抗体，以及含单克隆抗体对的双抗体夹心检测试剂盒及其应用。
[0008]本专利技术涉及特异性结合SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒的单克隆抗体。
[0009]本专利技术还涉及高灵敏度、良好特异性、重复性良好地检测SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒的试剂盒。
[0010]本专利技术还涉及长保存期的SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒的检测试剂盒。
[0011]本专利技术还涉及能与SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒具有良好反应特性的单链抗体。
[0012]本专利技术涉及能检测口蹄疫O型病毒蛋白含量的试剂盒。
[0013]本专利技术涉及能从多种蛋白混合物中检测口蹄疫O型病毒蛋白含量的试剂盒。
[0014]本专利技术涉及能检测疫苗半成品和疫苗成品中口蹄疫O型病毒蛋白含量的试剂盒。
附图说明
[0015]图1为本专利技术试剂盒检测SEA型O型病毒样颗粒标准品的标准曲线，显示标准品在3.9μg/ml～500μg/ml范围内，线性关系良好，R2＞0.99；检测灵敏度为3.9μg/ml。
具体实施方式
[0016]定义
[0017]“口蹄疫病毒”属于小RNA病毒科，口疮病毒属，该病毒有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非口蹄疫病毒1、2、3型)和Asia1(亚洲1型)7个血清型，各型之间无交叉保护反应，每个类型内又有多个亚型。在病毒的中心为一条单链的正链RNA，由大约8000个碱基组成，是感染和遗传的基础；周围包裹着的蛋白质决定了病毒的抗原性、免疫性和血清学反应能力；病毒外壳为对称的20面体。口蹄疫病毒是偶蹄类动物高度传染性疾病—口蹄疫的病原，国际兽疫局将口蹄疫列为“A类动物传染病名单”中的首位，中国把它列为“进境动物检疫一类传染病”，我国对口蹄疫的防治，预防主要通过疫苗注射接种，发生口蹄疫的动物则捕杀。
[0018]术语“病毒样颗粒(virus
‑
like particles，VLPs)”是由一种或多种病毒结构蛋白组装成的颗粒，具有与病毒颗粒相似的外部结构和抗原性，但不含病毒基因。
[0019]术语“SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒”是以O型口蹄疫病毒SEA型基因序列编码的结构蛋白组装成的病毒样颗粒，具体制备可参见中国专利CN111840533A，但不限于此。
[0020]术语“单克隆抗体”是指由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，获自基本上同源的抗体群的抗体，即组成该群体的抗体个体都相同，除了可能存在少量可能的自发突变。因此，修饰语“单克隆”是指该抗体的性质不是离散抗体的混合物。优选地，所述单克隆抗体包括单价的或是单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。抗体为涵盖具有所需特异性的结合结构域的任意特异性结合因子，因而，这个术语涵盖了与之同源的抗体片段、衍生物、人源化抗体以及抗体的功能等同物和同源物，也包括含有抗原结合结构域的任何多肽，无论是天然的还是合成产生的。抗体的实例是免疫球蛋白亚型(如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亚型亚类；也可以是包含抗原结合结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd；和双链抗体(diabodies)。融合至另一多肽的、包含抗原结合结构域的嵌合体分子或者等同物也包括在其中。嵌合抗体的克隆与表达在EP.A.0120694和EP.A.0125023中描述。抗体可以通过许多方式修饰，可用DNA重组技术来产生保留原来抗体特异性的其它抗体或嵌合分子。这种技术可以包括将编码抗体的免疫球蛋白可变区或互补性决定区(CDRs)的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区，参见EP.A.184187、GB2188638A或EP.A.239400。还可以对杂交瘤细胞或产生抗体的其它细胞进行遗传突变或其它改变，这可以改变或者不改变所产生抗体的结合特异性。用于本专利技术的
“
单克隆抗体”也可用杂交瘤方法制得，因为编码本专利技术鼠源化抗体的DNA序列可用本领域技术人员熟知的常规手段，如根据本专利技术公开的氨基酸序列人工合成核苷酸序列或用PCR法扩增得到，因而也可用重组DNA方法，可用本领域熟知的各种方法将该序列连入合适的表达载体中。最后，在适合本专利技术抗体表达的条件下，培养转化所得的宿主细胞，然后本领域技术人员应用熟知的常规分离纯化手段纯化得到本专利技术的单克隆抗体。抗体包含通过二硫桥连接在一起的多肽链几何体，称为轻链和重链的两条多肽主链构成抗体的所有主要结构类别(同型物)。重链和轻链都进一步可分为称作可变区和恒定区本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种特异性结合SEA型O型口蹄疫病毒的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段的重链可变区为SEQ.ID No.1或其简并序列所编码，所述抗体或抗体片段的轻链可变区为SEQ.ID No.2或其简并序列所编码；所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体；所述抗体或所述抗体片段特异性结合SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒。2.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中，所述抗体为单克隆抗体4E3，所述单克隆抗体4E3的重链可变区为SEQ.ID No.1或其简并序列所编码，其轻链可变区为SEQ.ID No.2或其简并序列所示编码。3.杂交瘤细胞4E3株，其分泌权利要求2所述的单克隆抗体4E3。4.一种特异性结合SEA型O型口蹄疫病毒的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段的重链可变区为SEQ.ID No.3或其简并序列所编码，所述抗体或抗体片段的轻链可变区为SEQ.ID No.4或其简并序列所编码；所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体；所述抗体或所述抗体片段特异性结合SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒。5.根据权利要求4所述的抗体或抗体片段，其中，所述抗体为单克隆抗体4D5，其中，所述单克隆抗体4D5的重链可变区为SEQ.ID No.3或其简并序列所编码，其轻链可变区为SEQ.ID No.4或其简并序列所编码。6.杂交瘤细胞4D5株，其分泌权利要求5所述的单克隆抗体4D5。7.一种检测SEA型O型口蹄疫病毒抗原的试剂盒，其中，所述试剂盒包括：包被了权利要求2所述的单克隆抗体4E3的支持介质，所述支持介质在包被了所述单克隆抗体4E3后用封闭液封闭，酶标记的权利要求5所述的单克隆抗体4D5；或包被了所述的单克隆抗体4D5的支持介质，所述支持介质在包被了所述单克隆抗体4D5后用封闭液封闭，酶标记的单克隆抗体4E3；或包被了单克隆抗体2A7的支持介质，所述支持介质在包被了所述单克隆抗体2A7后用封闭液封闭，酶标记的单克隆抗体4E3；或包被了单克隆抗体2A7的支持介质，所述支持介质在包被了所述单克隆抗体2A7后用封闭液封闭，酶标记的所述的单克隆抗体4D5；20
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浓缩洗涤液，所述20
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浓缩洗涤液为含10％v/v的吐温20 的pH 7.4的0.1M PBS溶液；标准品，所述标准品为SEA型O型口蹄疫病毒样颗粒；显色液，所述显色液包括显色液A、显色液B，显...
【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，燕贺，张云静，肖燕，邓均华，
申请(专利权)人：洛阳普泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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