本发明专利技术提供了一种非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试剂盒，该试剂盒包含试纸条，其包括底板，底板上依次有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，金标垫上吸附有胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白；硝酸纤维素膜上包括检测线和质控线，检测线上固定化有重组非洲猪瘟病毒P30蛋白，质控线上固定化有非洲猪瘟病毒P30蛋白多克隆抗体，重组非洲猪瘟病毒P30蛋白如SEQ.ID No.3所示。该试剂盒能实现感染早期的检测，且检测灵敏度高于现有技术中试剂盒的灵敏度，便于临床及时准确、便捷的监测预警。便捷的监测预警。
【技术实现步骤摘要】
非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试剂盒及其制备方法
[0001]本专利技术属于免疫测定法领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
[0002]非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触的烈性传染性疾病。其特征为病程短、发病率高、病死率高(可高达100％)，临床症状和病理变化均类似于急性猪瘟，在诊断时极易误诊，表现高热、皮肤充血发绀、流产、水肿及脏器出血。
[0003]该病在我国被列为一类动物疫病，属于世界动物卫生组织(OIE)的法定报告动物疫病。我国于2018年报告了首例非洲猪瘟病例，并迅速传播到各个省区。中国的生猪数量占全球的50％，ASFV在中国的传播严重威胁着世界养殖业。迄今为止，非洲猪瘟主要的诊断是在病毒基因检测的基础上，通过RT
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PCR和部分基因组序列分析进行的，耗时长，不能及时给出是否感染的准确判断。因此，临床上亟需研制出快速准确有效地检测抗体的胶体金试纸条，以便完成猪场的实时检测、避免检测样品运输等因素引起不必要的传播。
[0004]同时，现有技术中亟需一种具有高灵敏度和高特异性，能对非洲猪瘟早期感染进行检测的试剂盒，能对临床及时准确、便捷的监测预警以及对疫苗早期免疫效果进行监测。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供了一种非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试剂盒，其中，所述试剂盒包含非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试纸条，其中，所述非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试纸条包括底板，所述底板上依次有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上吸附有胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白；所述硝酸纤维素膜上包括检测线和质控线，所述检测线上固定化有重组非洲猪瘟病毒P30蛋白，所述质控线上固定化有非洲猪瘟病毒P30蛋白多克隆抗体，其中，所述重组非洲猪瘟病毒P30蛋白如SEQ ID No.3所示。
[0006]本专利技术的非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试剂盒，使用重组非洲猪瘟病毒P30蛋白作为抗原，以双抗原夹心法检测样品中的非洲猪瘟病毒抗体，具有高灵敏度和高特异性，可以在感染早期进行监测预警。
[0007]本专利技术非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试剂盒中的非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试纸条中胶体金标记抗原蛋白、检测线上固定化抗原蛋白的制备可用不同分子生物学表达方式实现，也可用同一种分子生物学表达方式，所述分子生物学表达方式包括但不限于原核表达系统、哺乳动物细胞表达系统、昆虫细胞表达系统、酵母表达系统，或者直接合成；更优选地，所述原核表达系统为E.Coli表达系统，所述哺乳动物细胞表达系统为CHO细胞表达系统，所述昆虫细胞表达系统为杆状病毒表达系统。
[0008]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述试剂盒中，所述胶体金标记的重组非洲
猪瘟病毒P30蛋白和所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白分别为不同表达系统表达或制备方法所得；所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白和所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白分别为选自以下表达系统表达的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白或者直接合成：原核表达系统、哺乳动物细胞表达系统、昆虫细胞表达系统、酵母表达系统。
[0009]一对不同表达系统表达所得的本专利技术的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白，当作为双抗原进行夹心法检测抗体时，能保证更好的检测灵敏度。
[0010]作为本专利技术的一种更优选实施方式，所述原核表达系统为E.Coli表达系统，所述哺乳动物细胞表达系统为CHO细胞表达系统，所述昆虫细胞表达系统为杆状病毒表达系统。
[0011]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述试剂盒中，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白、和所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为杆状病毒表达系统表达或CHO细胞表达系统表达。
[0012]本专利技术使用由杆状病毒表达系统、CHO细胞表达系统表达的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白作为双抗原夹心检测非洲猪瘟病毒抗体，能实现高灵敏度的临床检测，能早期检测感染情况。
[0013]作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术所述试剂盒中，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为杆状病毒表达系统表达，所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为CHO细胞表达系统表达，或所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为CHO细胞表达系统表达，所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为杆状病毒表达系统表达。
[0014]本专利技术使用分别由杆状病毒表达系统、CHO细胞表达系统表达的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白作为双抗原夹心检测非洲猪瘟病毒抗体，能实现高灵敏度的临床检测，远高于现有技术中的试剂盒，能检测早期感染情况以及监测免疫初期状态。
[0015]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述试剂盒中，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白标记浓度为5μg/ml～20μg/ml，所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白浓度为0.05mg/ml～0.25mg/ml，所述非洲猪瘟病毒P30蛋白多克隆抗体的浓度为1mg/ml～2mg/ml。
[0016]本专利技术的一些实施方式，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白标记浓度的浓度可以为5μg/ml、6μg/ml、7μg/ml、8μg/ml、9μg/ml、10μg/ml、11μg/ml、12μg/ml、13μg/ml、14μg/ml、15μg/ml、16μg/ml、17μg/ml、18μg/ml、19μg/ml、20μg/ml。
[0017]本专利技术的一些实施方式，所述固定化有重组非洲猪瘟病毒P30蛋白的浓度可以为0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml、0.08mg/ml、0.09mg/ml、0.10mg/ml、0.11mg/ml、0.12mg/ml、0.13mg/ml、0.14mg/ml、0.15mg/ml、0.16mg/ml、0.17mg/ml、0.18mg/ml、0.19mg/ml、0.20mg/ml、0.21mg/ml、0.22mg/ml、0.23mg/ml、0.24mg/ml、0.25mg/ml。
[0018]本专利技术的一些实施方式，所述固定化有非洲猪瘟病毒P30蛋白多克隆抗体的浓度可以为1mg/ml、1.1mg/ml、1.2mg/ml、1.3mg/ml、1.4mg/ml、1.5mg/ml、1.6mg/ml、1.7mg/ml、1.8mg/ml、1.9mg/ml、2mg/ml。
[0019]作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术所述试剂盒中，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白标记浓度为12μg/ml，所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白浓度为0.2mg/ml，所述非洲猪瘟病毒P30蛋白多克隆抗体的浓度为2mg/ml。
[0020]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述试本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试剂盒，其中，所述试剂盒包含非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试纸条，其中，所述非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试纸条包括底板，所述底板上依次有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上吸附有胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白，所述硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，所述检测线上固定化有重组非洲猪瘟病毒P30蛋白，所述质控线上固定化有非洲猪瘟病毒P30蛋白多克隆抗体；其中，所述重组非洲猪瘟病毒P30蛋白如SEQ ID No.3所示。2.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白和所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白分别为不同表达系统表达或制备方法所得，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白和所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白分别为选自以下表达系统表达的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白或者直接合成：原核表达系统、真核细胞表达系统，所述真核细胞表达系统包括哺乳动物细胞表达系统、昆虫细胞表达系统、和酵母表达系统；优选地，所述原核表达系统为E.Coli表达系统，所述哺乳动物细胞表达系统为CHO细胞表达系统，所述昆虫细胞表达系统为杆状病毒表达系统；更优选地，所述所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白和所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白分别为不同真核表达系统表达所得。3.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白和所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为杆状病毒表达系统表达或CHO细胞表达系统表达；优选地，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为杆状病毒表达系统表达，所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为CHO细胞表达系统表达，或所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为CHO细胞表达系统表达，所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白为杆状病毒表达系统表达。4.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白标记浓度为5μg/ml～20μg/ml，所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白浓度为0.05mg/ml～0.25mg/ml，所述非洲猪瘟病毒P30蛋白多克隆抗体的浓度为1mg/ml～2mg/ml；优选地，所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白标记浓度为12μg/ml，所述检测线上固定的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白浓度为0.2mg/ml，所述非洲猪瘟病毒P30蛋白多克隆抗体的浓度为2mg/ml。5.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述非洲猪瘟病毒双抗原夹心抗体检测试纸条包括底板，所述底板具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向上依次有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜与金标垫接触或与样品垫、金标垫接触，使得非洲猪瘟病毒P30抗体与所述胶体金标记的重组非洲猪瘟病毒P30蛋白的结合体能在...
【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，颜世君，周兵强，邓均华，
申请(专利权)人：洛阳普泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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