一种禽呼肠孤病毒检测传感器中抗体固定的方法技术

本发明专利技术公开了一种增强禽呼肠孤病毒检测传感器中抗体固定的方法。本发明专利技术提供了用于检测呼肠孤病毒电化学免疫传感器的制备方法，包括如下步骤：(1)处理电极；(2)纳米复合物修饰电极；(3)抗体固定前的预处理；(4)抗体固定；(5)工作电极与检测，所述纳米复合物为金铂纳米复合物，所述预处理为用半胱胺盐酸盐溶液进行孵育。本发明专利技术的经实验证明该传感器检测线性范围为0～10

【技术实现步骤摘要】
一种禽呼肠孤病毒检测传感器中抗体固定的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是一种禽呼肠孤病毒检测传感器，特别涉及到禽呼肠孤病毒检测传感器中增强抗体固定性能的方法。

技术介绍

[0002]禽呼肠孤病毒(Avian reovirus，ARV)是呼肠孤病毒科、正呼肠孤病毒属的成员，可感染鸡、火鸡、鸭、鹅及其它野鸟，引起病毒性关节炎、呼吸道疾病、肠道疾病、中枢神经症状和免疫抑制等多种疾病。目前检测ARV的主要方法有 ELISA、RT
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PCR、半套式RT
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PCR、核酸探针技术。CN103235123A公开了一种用于检测呼肠孤病毒电化学免疫传感器的工作电极的制备方法，采用了先固定待测样品中目标物质的探针的技术方案，目的是延长探针保存的有效时间，为了保证传感器的灵敏度和特异性，样本的前处理时间比较长，因此牺牲了检测时间上能够快速检测的优势。
[0003]电化学免疫传感器是将电化学分析方法和免疫分析方法相结合的一种新型检测技术，原理是：通过物理化学方法，将能够识别目标物的敏感元件(eg抗体) 固定到本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种电化学免疫传感器的制备方法，所述传感器用于检测禽呼肠孤病毒，其中，传感器工作电极的制备包括抗体固定前的预处理步骤，所述方法按以下步骤制备：(1)处理电极：包括抛光、水洗、超声清洗、浸泡、用循环伏安进行扫描至稳定后N2吹干；(2)纳米复合物修饰电极：将由贵金属制得的纳米复合物滴加在所述电极的表面，4℃下自然晾干，所述贵金属为金、铂或金+铂；(3)抗体固定前的预处理：在纳米复合物修饰电极的表面滴加10μL孵育溶液，孵育后用PBS洗液冲洗至少3次；(4)抗体固定：再滴加禽呼肠孤病毒的单克隆抗体ARV/MAb，在密闭条件下，4℃下固定反应8h；(5)封闭与检测：抗体固定反应后，依次用PBS洗液冲洗、BSA溶液封闭、PBS洗液再次冲洗后得到工作电极，直接滴加待测样品，用电化学扫描检测。2.根据权利要求1所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述电极为玻碳电极，步骤(2)中所述纳米复合物为石墨烯
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甲壳胺
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金铂纳米粒子G
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Chi
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Au/Pt纳米复合物，该复合物的制备方法包括：1)石墨烯G：将石墨粉依次高温氧化、超声、硼氢化钠高温还原、洗涤后得到石墨烯G；2)甲壳胺溶液Chi：将甲壳胺溶于醋酸溶液中，25℃磁力搅拌1h混匀，得到甲壳胺溶液Chi；其中，所述醋酸溶液为冰醋酸和水体积比为1.0％的混合溶液，得到甲壳胺溶液的浓度为0.1wt％；3)石墨烯
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甲壳胺悬浊液G
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Chi：将石墨烯与上述甲壳胺溶液混匀，超声，得到石墨烯
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甲壳胺悬浊液G
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Chi；其中，所述超声的功率为250W、连续超声2h，石墨烯G与甲壳胺溶液Chi的投料配比为1mg：1mL；4)纳米复合物：将四氯金酸溶液与四氯铂酸钾溶液加入上述石墨烯
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甲壳胺悬浊液G
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Chi中，室温搅拌3h，然后80℃水浴继续反应1h，得到石墨烯
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甲壳胺
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金铂纳米复合物G
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Chi
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Au/Pt，即金铂纳米复合物，所述四氯金酸溶液与所述四氯铂酸钾溶液的浓度均为10mmol/L、用量均为1mL，所述石墨烯
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甲壳胺悬浊液G
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Chi的用量...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，黄娇玲，谢丽基，罗思思，曾婷婷，张艳芳，张民秀，王盛，李孟，韦悠，范晴，谢志勤，邓显文，李丹，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：