本发明专利技术提供了一种用于针对轮状病毒免疫受试者的疫苗组合物和免疫方法。所述疫苗包含轮状病毒株CDC‑9和CDC‑66、其片段、其同源物或它们的结合物。本发明专利技术的疫苗可包含CDC‑9、CDC‑66的片段、其同源物、或其结合物。本发明专利技术还提供了通过给予本发明专利技术的疫苗诱导免疫反应的方法。
【技术实现步骤摘要】
本申请为分案申请，其原申请的申请日为2010年7月12日，申请号为201080031412.1，名称为“新的人轮状病毒株和疫苗”。政府资助本专利技术由美国政府部门疾病控制和预防中心(CentersforDiseaseControlandPrevention)完成。相关申请的交叉引用本申请要求2009年5月12日提交的美国临时申请No.61/177,393的优先权，所述申请以引用的方式全文纳入本文。
本专利技术主要涉及病毒疫苗株及其相关疫苗组合物和方法。更具体地，本专利技术涉及引起受试者体内对轮状病毒A的免疫反应的人轮状病毒A疫苗株、疫苗组合物和使用方法。
技术介绍
在多种引起儿童严重腹泻的肠道病原性病毒中，轮状病毒是最常见的，它导致每年平均611,000例死亡。几乎所有儿童在5岁前都会被轮状病毒感染。所述病毒被认为是高度传染性的，并被描述为“平等”病毒，因为其感染的影响没有特别的社会经济或地理群的差异。尽管大部分儿童能够得到足够的支持性和缓解性医疗护理，挺过感染而不出现明显的长期后果，然而与严重腹泻、呕吐、脱水和休克有关的死亡数目是不能接受的，并且在可能的情况下需要预防性干预。轮状病毒A是一种具有特有辐射状形态的呼肠孤病毒科(reoviridae)的二十面体病毒。具体轮状病毒根据病衣壳蛋白的特征按群(group)、亚群(subgroup)和血清型分类。轮状病毒颗粒含有围绕病毒基因组的3个蛋白层，所述病毒基因组由11段双链RNA组成，每段编码一个蛋白。所述病毒蛋白包括称为VP的结构蛋白和称为NSP的非结构蛋白。若干结构蛋白对引发宿主体内的免疫反应特别重要，因为这些蛋白位于所述病毒颗粒的最外层上。具体而言，蛋白VP7和VP4均在很大程度上参与宿主免疫反应，并因此还在轮状病毒疫苗的开发中起中心作用。VP7和VP4结构蛋白的变体可表征不同的轮状病毒A血清型。具体而言，人VP7的变体被确定为“G”血清型，至少包括血清型G1、G2、G3、G4以及较少见的G5、G6、G8、G9、G10、G11、G12、G13和G14。VP4结构蛋白的变体被确定为“P”血清型，包括P1A、P1B、P2A、P3、P4、P5、P6和P8。由于完整的轮状病毒同时为VP7蛋白和VP4蛋白所表征，因此各个病毒血清型根据具体病毒中包含的这两种蛋白的变体特性而命名。例如，常见的轮状病毒A同时包含G1和P[8]变体，它们分别是VP7和VP4的变体。轮状病毒A的G1,P[8]血清型是在全世界引起疾病的最常见病毒形式之一。轮状病毒A的G1血清型是在全世界与人疾病有关的最常见血清型。已经开发出若干使用轮状病毒AG1株的疫苗，目的是在宿主中形成对轮状病毒AG1株以及具有其他血清型的轮状病毒A株的免疫性。然而，此方法受到G1和G2血清型之间重大不同的限制。具体而言，轮状病毒AG2株来源于与大多数其他轮状病毒株不同的世系。这被核酸杂交实验证明，所述实验显示被称为DS-1遗传组的G2株的11个基因区段的标记转录物不与包括G1、G3、G4和G9的被称为Wa遗传组的轮状病毒A株中的相应核酸杂交。这些同源基因无法杂交表明例如外衣壳蛋白VP4和VP7以及内衣壳蛋白VP6的编码蛋白的差异是显著的。这些遗传差别支持以下观点：使用G1株感染或免疫的个体不太可能表现出对Wa遗传组的其他病毒株那样的对G2株的交叉保护。除了常见的G1和G2轮状病毒A株以外，人们逐渐认识到人轮状病毒类型的多样性是造成全世界急性严重腹泻疾病的原因。这种多样性突出了对能够对若干株产生免疫性的强效疫苗的要求。最近，美国食品和药物管理局因其制品中有污染物而暂停了ROTARIX疫苗的使用。因此，当轮状病毒感染仍是一个严重的世界性问题的时候，可用的轮状病毒疫苗的数量却减少了。另一种疫苗对于防止中、高收入国家儿童腹泻似乎是安全和有效的，目前已被授权并推荐用于全世界的婴幼儿。然而，此疫苗在亚非低收入国家的功效降低。因此，仍需要针对常见和不太常见类型的人轮状病毒A的疫苗。附图说明图1A是电子显微照片的复本，示出了完整的分离轮状病毒A病毒粒子，该病毒粒子被确定为具有血清型P[8],G1的病毒株CDC-9。图1B是电子显微照片的复本，示出了完整的分离轮状病毒A病毒粒子，该病毒粒子被确定为具有血清型P[4],G2的病毒株CDC-66。图2是聚丙烯酰胺凝胶图像的副本，示出了从粪便样本(S)和Vero细胞(V)分离的轮状病毒A株CDC-9的RNA谱，并示出了该轮状病毒株的典型长RNA的电泳型。图3是聚丙烯酰胺凝胶图像的复本，示出了从粪便样品(S)和Vero细胞(V)分离的轮状病毒A株CDC-66的RNA谱，并示出了该轮状病毒株的典型短RNA的电泳型。图4A示出了CsCl纯化的轮状病毒A株CDC-9的轮状病毒颗粒的带。图4B示出了轮状病毒A株CDC-9的确定结构病毒蛋白，通过SDS-PAGE分析，与分子量标记对比。图5A是柱形图，示出了对照和接种小鼠中对热灭活的轮状病毒的总抗体滴度。图5B是柱形图，示出了对照和接种小鼠中对热灭活的轮状病毒的中和抗体滴度。图6是柱形图，示出了在对照和接种小鼠中对与Al(OH)3配制的热灭活的轮状病毒的总血清抗体滴度。图7A示出了用无抗原的750微克磷酸铝接种的4只小猪的粪便样品中的病毒脱落。图7B示出了用无佐剂的抗原免疫的小猪的粪便样品中的病毒脱落。图7C示出了用抗原和佐剂免疫的小猪的粪便样品中的病毒脱落。图7D示出了在只用缓冲液免疫的小猪的粪便样品中测得的病毒脱落。图8A是柱形图，示出了在用无抗原的600微克磷酸铝(实心柱)接种的小猪或者用50微克抗原和600微克磷酸铝(阴影柱)接种的小猪的血清中的轮状病毒特异性IgG抗体反应。图8B是柱形图，示出了在用无抗原的600微克磷酸铝接种的小猪或者用50微克抗原和600微克磷酸铝接种的小猪的血清中的中和抗体反应。图9A示出了用无抗原的600微克磷酸铝接种的小猪的粪便样品中的病毒脱落。图9B示出了用50微克抗原和600微克磷酸铝接种的小猪的粪便样品中的病毒脱落。
技术实现思路
本专利技术提供一种疫苗组合物，包括一种或多种分离轮状病毒株例如株CDC-9或CDC-66和可药用载体。本专利技术的疫苗任选包括佐剂。本专利技术疫苗中的CDC-9或CDC-66株任选是减毒活轮状病毒或者灭活轮状病毒。应理解，本专利技术的疫苗任选包括至少两种分离轮状病毒株。所述至少两种分离轮状病毒株各自独立地具有G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9、G10、G11、G12、G13或G14的G群血清型。任选地，所述至少两种分离轮状病毒株各自独立地具有P1A、P1B、P2A、P3、P4、P5、P6、P8、P11或P12的P群血清型。本专利技术的疫苗任选非经肠给药或经口给药。本专利技术还提供分离的轮状病毒株，例如CDC-9或CDC-66株。本专利技术提供了一种疫苗，其包含与可药用载体混合的特征在于具有G1群血清型的分离轮状病毒株和特征在于具有G2群血清型的轮状病毒株。所述G1或G2群血清型病毒株任选各自独立地具有P1A、P1B、P2A、P3、P4、P5、P6、P8、P11或P12的P群血清型。在某些实施方案中，所述特征在于具有G1群血清型的人轮状病毒株是CDC-9，所述特征在于具有G2群血清型的人轮状病本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种免疫原性药物组合物，包含：活的减毒的人轮状病毒或灭活的人轮状病毒，其中所述活的减毒的人轮状病毒或灭活的人轮状病毒的特征在于：与SEQ ID No.2或SEQ ID No.3具有大于95％的同一性的NSP1蛋白；与SEQ ID No.5具有大于95％的同一性的NSP2蛋白；与SEQ ID No.8具有大于95％的同一性的NSP3蛋白；与SEQ ID No.11具有大于95％的同一性的NSP4蛋白；与SEQ ID No.14或SEQ ID No.15具有大于95％的同一性的NSP5蛋白；与SEQ ID No.17具有大于95％的同一性的VP1蛋白；与SEQ ID No.20具有大于95％的同一性的VP2蛋白；与SEQ ID No.23具有大于95％的同一性的VP3蛋白；与SEQ ID No.26或SEQ ID No.27具有大于95％的同一性的VP4蛋白；与SEQ ID No.29或SEQ ID No.30具有大于95％的同一性的VP6蛋白；以及与SEQ ID No.32具有大于95％的同一性的VP7蛋白；或者活的减毒的人轮状病毒或灭活的人轮状病毒，其中所述活的减毒的人轮状病毒或灭活的人轮状病毒的特征在于：与SEQ ID No.71具有大于95％的同一性的NSP1蛋白；与SEQ ID No.77或SEQ ID No.78具有大于95％的同一性的NSP2蛋白；与SEQ ID No.83具有大于95％的同一性的NSP3蛋白；与SEQ ID No.89具有大于95％的同一性的NSP4蛋白；与SEQ ID No.95或SEQ ID No.96具有大于95％的同一性的NSP5蛋白；与SEQ ID No.101或SEQ ID No.102具有大于95％的同一性的VP1蛋白；与SEQ ID No.107具有大于95％的同一性的VP2蛋白；与SEQ ID No.113或SEQ ID No.114具有大于95％的同一性的VP3蛋白；与SEQ ID No.119或SEQ ID No.120具有大于95％的同一性的VP4蛋白；与SEQ ID No.125具有大于95％的同一性的VP6蛋白；以及与SEQ ID No.131具有大于95％的同一性的VP7蛋白。...
【技术特征摘要】
1.一种免疫原性药物组合物，包含：活的减毒的人轮状病毒或灭活的人轮状病毒，其中所述活的减毒的人轮状病毒或灭活的人轮状病毒的特征在于：与SEQIDNo.2或SEQIDNo.3具有大于95％的同一性的NSP1蛋白；与SEQIDNo.5具有大于95％的同一性的NSP2蛋白；与SEQIDNo.8具有大于95％的同一性的NSP3蛋白；与SEQIDNo.11具有大于95％的同一性的NSP4蛋白；与SEQIDNo.14或SEQIDNo.15具有大于95％的同一性的NSP5蛋白；与SEQIDNo.17具有大于95％的同一性的VP1蛋白；与SEQIDNo.20具有大于95％的同一性的VP2蛋白；与SEQIDNo.23具有大于95％的同一性的VP3蛋白；与SEQIDNo.26或SEQIDNo.27具有大于95％的同一性的VP4蛋白；与SEQIDNo.29或SEQIDNo.30具有大于95％的同一性的VP6蛋白；以及与SEQIDNo.32具有大于95％的同一性的VP7蛋白；或者活的减毒的人轮状病毒或灭活的人轮状病毒，其中所述活的减毒的人轮状病毒或灭活的人轮状病毒的特征在于：与SEQIDNo.71具有大于95％的同一性的NSP1蛋白；与SEQIDNo.77或SE...
【专利技术属性】
技术研发人员：江保明，R·I·格拉斯，王玉环，J·根奇，
申请(专利权)人：美国政府由卫生和人类服务部，疾病控制和预防中心的部长所代表，
类型：发明
国别省市：美国;US
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