MiRNA-22在制备MMP14和Snail表达抑制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了miRNA-22、miRNA-22mimics或miRNA-22agomir在制备MMP14和Snail表达抑制剂，或MMP14和Snail过度表达所致肿瘤的治疗药物，或抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移的试剂中的应用，为开发新型肿瘤治疗药物提供了新的思路和方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，涉及miRNA-22在制药上的用途。
技术介绍
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病率居各类肿瘤之首，而且预后较差。每年 约有17万人死于胃癌，几乎接近全部恶性肿瘤死亡人数的1/4。 微小RNA (microRNAs, miRNAs)是一类长度约为20~25nt的内源性非编码RNA分 子，普遍存在于真核生物中。它不编码蛋白质或多肽，而是与靶基因的信使RNA(mRNA)的 3' -非翻译区（3' -UTR)互补结合，诱导靶mRNA的降解或者抑制靶mRNA的翻译，从而实现 转录后基因调控作用。研究表明，大约50%的miRNAs在基因组上定位于肿瘤相关区域或脆 性位点（fragile site)。MiRNAs作为一类新的癌基因或抑癌基因，其表达失衡与多种肿瘤 发生密切相关。MiRNA-22位于染色体17pl3 (1，563, 947bp-l，564, 031bp)，被证实在诸如结 肠癌、肝癌、卵巢癌、肺癌、食道癌等多种肿瘤中表达下调，在肿瘤细胞的生长、分化和转移 方面发挥着重要的调控作用，是一类新的抑癌基因。 肿瘤的侵袭和转移是恶性肿瘤最重要也是最本质的生物学特征，是引起恶性肿瘤 患者预后不良和死亡的主要原因。基质金属蛋白酶MMP14是细胞外基质降解过程中的重要 酶类，对细胞外基质包括基底膜均有降解作用，从而破坏了机体防御肿瘤侵袭与转移的能 力，增强了肿瘤的侵袭性。此外，MMP14还能够促进细胞分泌proMMP2和proMMP9。Snail在 细胞水平调节细胞间的黏附，是上皮型钙粘蛋白（E-cadherin)重要的转录抑制子，其过度 表达会促进细胞迀移以及诱导上皮细胞向间充质细胞转化，从而引起肿瘤的发展、侵袭和 转移。近来研究发现，MMP14和Snail基因在胃癌组织中的表达上调，与胃癌的发生、发展 和转移密切相关。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于对MMP14和Snail基因与miRNA-22之间的关系进行 深入研究，为寻找新型肿瘤治疗药物提供新的思路和方法。 经研究，本专利技术提供如下技术方案： 1. MiRNA-22、miRNA-22mimics 或 miRNA-22agomir 在制备 MMP14 和 Snail 表达抑 制剂中的应用。 MiRNA mimics (又称miRNA模拟物）是针对miRNA的成熟体设计并合成的小片段 双链miRNA，作用与miRNA的成熟体相同，可以上调细胞内相应miRNA的含量，但结构略有不 同。MiRNA agomir是在化学合成的mimics的基础上，经过特殊化学修饰升级的产品，结构 与使用方式与mimics有不同，但作用是一样的，都是使得内源性的miRNA上调。与miRNA mimic相比，miRNA agomir在动物体内具有更高的稳定性和miRNA活性，更易通过细胞膜、 组织间隙而富集于靶细胞，在动物实验中可以用全身或局部注射等方法进行给药，作用效 果持续时间长。 2. MiRNA-22、miRNA-22mimics 或 miRNA-22agomir 在制备 MMP14 和 Snail 过度表 达所致肿瘤的治疗药物中的应用。 进一步，所述肿瘤为胃癌。 进一步，所述治疗药物是抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的药物。 进一步，所述治疗药物是抑制胃癌细胞增殖、腹腔播散和肺转移的药物。 3. MiRNA-22、miRNA-22mimics 或 miRNA-22agomir 在制备抑制胃癌细胞增殖、侵袭 和转移的试剂中的应用。 进一步，所述胃癌细胞为SGC-7901细胞或HGC-27细胞。 本专利技术的有益效果在于：本专利技术对MMP14和Snail基因与miRNA-22之间的关系 进行了深入研究，以胃癌为肿瘤模型。研究结果表明，MMP14和Snail基因为miRNA-22的 靶基因，miRNA-22能够通过抑制MMP14和Snail的表达进而抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和 转移，尤其对胃癌细胞的转移具有良好的抑制作用。因此，miRNA-22、miRNA-22mimics或 miRNA-22agomir不仅可以用于制备MMP14和Snai 1表达抑制剂，以及抑制胃癌细胞增殖、侵 袭和转移的试剂，更重要的是可以用于制备MMP14和Snail过度表达所致肿瘤的治疗药物， 从而为开发新型肿瘤治疗药物提供了新的思路和方法。【附图说明】 为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图： 图1为荧光素酶实验的结果。 图2为细胞转染后免疫印迹实验的结果：1泳道为阴性对照miR-NC组，2泳道为 miR_22mimics 组。 图3为MiR-22和MMP14pcDNA或Snail pcDNA共转染免疫印迹实验的结果：1泳道 为阴性对照 miR-NC 组，2 泳道为 miR-22mimics 组，3 泳道为 miR-22mimics+pcDNA3. 1-MMP14 组或 miR-22mimics+pcDNA3. 1-Snail 组。 图4为miR-22通过抑制MMP14和Snail的表达抑制肿瘤细胞侵袭（左）和转移 (右）的实验结果。 图5为建立裸鼠胃癌模型的实验结果。 图6为体内腹腔播散实验的结果。 图7为体内腹腔播散成瘤后免疫印迹实验的结果：1泳道为阴性对照组，2泳道为 Agomir-22 组。 图8为体内肿瘤转移实验的结果：A为肺组织HE染色，B为Agomir-22组和阴性对 照组中发生和没有发生肿瘤肺部转移的裸鼠数量。【具体实施方式】 下面将结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。优选实施例中未注明具 体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照试剂制造厂商所建议的条件进行。 肿瘤侵袭（ECM550)试剂盒和细胞迀移分析（ECM220)试剂盒购自Millipore公 司；野生型 MMP14-3' UTR，Snail-3' UTR 和突变型 MMP14-3' UTR，Snail-3' UTR 的正、反义 序列由上海生工生物工程有限公司合成；MMP14和Snail -抗购自Abeam公司；GAPDH -抗 购自 Cell signaling 公司；miR_22mimics 和阴性对照 miR-NC、Agomir-22 和 Agomir 阴性 对照购自RIBOBIO公司；CCK8试剂盒购自Beyotime公司；内参质粒pRL-TK和双荧光素酶 报告基因检测系统购自Promega公司；质粒pcDNA3. 1-MMP14和pcDNA3. Ι-Snail购自百恩 维生物科技公司；SGC-7901细胞和HGC-27细胞购自ATCC细胞库。 实施例1荧光素酶实验证实MMP14和Snail基因为miR-22的靶基因 合成野生型（wt)MMP14-3, UTR、Snail-3' UTR 和突变型（mut)MMP14-3, UTR， Snail-3' UTR寡核苷酸序列。具体方法如下： 野生型 MMP14-3' UTR 正义序列：CCTTGCCCAAACTCAGGCAGCTG(SEQ ID No. 1) 野生型 MMP14-3' UTR 反义序列：CAGCTGCCTGAGTTTGGGCAAGG(SEQ ID No. 2) 野生型 Sna本文档来自技高网...

【技术保护点】
MiRNA‑22、miRNA‑22mimics或miRNA‑22agomir在制备MMP14和Snail表达抑制剂中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：左钱飞，邹全明，肖斌，曹力尹，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85