吡啶芳香酯类化合物在制备抗肠道病毒71型药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于抗病毒药物领域。提供了系列新型吡啶芳香酯类化合物在制备抗肠道病毒71型（EV712）药物中的应用。所述吡啶芳香酯类化合物为式WY89,WY94,WY96,WY97所示的化合物。通过系列新型吡啶芳香酯类化合物对于EV71抑制活性研究实验，WY89、WY94、WY96和WY97抑制EV71在宿主细胞RD上产生的细胞病变效应（CPE），增强细胞存活率，降低子代病毒产量，并可抑制EV71感染导致的宿主细胞凋亡，主要作用于EV71在宿主细胞内的复制增殖阶段。表明这些新型吡啶芳香酯类化合物有制备抗EV71病毒药物的潜力，这些化合物合成工艺简单，经济快速，易于大规模生产，具有临床应用前景。

Application of pyridine aromatic ester compound in preparing medicine for resisting enterovirus 71

The invention belongs to the field of antiviral drugs. A series of novel aromatic ester compounds were prepared for the preparation of anti enterovirus 71 (EV712) drugs. The pyridine aromatic ester compounds are compounds shown in formula WY89, WY94, WY96, and WY97. Through a series of novel pyridine aromatic esters for the EV71 inhibitory activity of WY89, WY94, experiment, WY96 and WY97 inhibit the cytopathic effect of EV71 in the host cell RD (CPE), enhanced cell viability, reduced progeny virus production, and can inhibit host cell apoptosis caused by EV71 infection, a major role in EV71 in in a host cell replication stage. It is indicated that these novel aromatic ester compounds have the potential to prepare anti EV71 virus drugs. These compounds are simple, economical, fast and easy to produce on a large scale. These compounds have promising clinical application.

【技术实现步骤摘要】
吡啶芳香酯类化合物在制备抗肠道病毒71型药物中的应用
本专利技术属于抗病毒药物领域，具体涉及吡啶芳香酯类化合物在制备抗肠道病毒71型的药物中的应用。
技术介绍
肠道病毒71型(EV71)是小RNA病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)成员，是引起婴幼儿手足口病的最主要病原体之一，有时伴有严重的中枢神经系统并发症，包括无菌性脑膜炎，脑炎，脊髓灰质炎样麻痹，神经性心肺衰竭等，甚至导致死亡。自1974年首次报道以来，EV71感染性疾病已在世界范围内多次爆发与流行，在亚太地区尤其是我国形势严峻。鉴于手足口病的传播流行给我国人民生命和健康带来的极大危害，我国政府已于2008年将手足口病列为丙类传染病纳入管理，并制定一系列相关法律法规，严控手足口病的流行传播。目前对于由EV71感染的疾病治疗没有特效药物，相关的疫苗于2015年才上市，其预防效果还有待进一步调查。因此开发特异有效的抗EV71药物势在必行。酯类化合物是一类重要的精细化工产品，广泛应用于药物、材料、食品、增塑剂、溶剂等化工行业，芳香酯可广泛用于香料、防腐剂、溶剂、药物、染料、涂料和材料合成等方面。本申请人所在项目组自主合成了具有新型结构的芳香酯化合物，并于2015年在期刊TetrahedronLetters公开了这几种芳香酯化合物的制备方法。未对其生物学活性进行评价。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供吡啶芳香酯类化合物在制备抗肠道病毒71型的药物中的应用，所述的吡啶芳香酯类化合物WY89、WY94、WY96、WY97，其结构式如下式：本专利技术在细胞水平发现WY89，WY94，WY96和WY97可以强烈抑制EV71病毒引起的细胞病变效应，增强感染细胞的存活率，降低子代病毒产量，并且可以抑制病毒感染引起的细胞凋亡，主要作用于EV71在宿主细胞内的复制增殖阶段。进一步地，所述的吡啶芳香酯类化合物优选为式WY94。本专利技术的第二个目的是提供一种抗肠道病毒71型的药物，包含有效剂量的作为活性成份的化合物WY89、WY94、WY96、WY97中的任意一种，或它们的盐，和药学上可以接受的载体。进一步地，所述药物制剂是颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂。由此表明化合物WY89、WY94、WY96、WY97有制备抗EV71感染的特异治疗药物的潜力，具有临床应用前景。本专利技术的系列新型吡啶芳香酯类化合物的制备，参照文献TetrahedronLetters2015，56，6136–6141的方法，具体以过渡金属钯为催化剂，在吡啶的邻位诱导作用下，在芳环的邻位用高价碘苯作用，进行芳酰氧基化，得到最终酯化产物。本专利技术具有以下优点：1、这些化合物合成原料价格低廉，易于购得；合成工艺简单，经济快速，易于大规模生产推广。2、从结构相似的化合物中寻找抗EV71药物，易于通过构效关系探讨确认其作用靶点，为进一步药物开发提供有价值的导向作用。附图说明图1是吡啶芳香酯类化合物对于EV71作用的RD细胞存活率的影响。图2是WY89、WY94、WY96和WY97对于EV71引起的RD细胞CPE的抑制效应。图3是WY94对于EV71子代病毒产量的抑制作用。图4是WY94对于EV71引起的RD细胞凋亡的抑制作用。图5是WY94不同加药方式处理下对于EV71的抑制活性。具体实施方式通过以下详细说明结合附图可以进一步理解本专利技术的特点和优点。所提供的实施例仅是对本专利技术方法的说明，而不以任何方式限制本专利技术揭示的其余内容。在下文中，如果未特别说明，本专利技术所用材料和操作方法是本领域公知的。【实施例1】新型吡啶芳香酯类化合物的合成本专利技术合成了以下6种新型吡啶芳香酯类化合物，参照文献TetrahedronLetters2015，56，6136–6141的方法，具体以过渡金属钯为催化剂，在吡啶的邻位诱导作用下，在芳环的邻位用高价碘苯作用，进行芳酰氧基化，得到最终酯化产物。【实施例2】对6种吡啶芳香酯类化合物抗EV71活性进行评估1、试验方法：1.1化合物对于宿主RD细胞的毒性将RD细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO2培养箱培养长满单层后，弃去细胞培养液，分别加含不同浓度测试化合物的细胞维持液继续培养，48h后显微镜目测并分别记录其细胞毒性，MTT法测定细胞存活率。SPSS11.5软件计算药物对于细胞的半数中毒浓度(Mediancyctoxicconcentration，CC50)。细胞存活率＝(药物组平均OD492值/细胞对照组平均OD492值)×100％。1.2化合物对于EV71的抑制活性将RD细胞铺板96孔板，在37℃，5％CO2培养箱培养长满单层后，弃去培养液，100TCID50的EV71病毒液感染细胞1h，加入不同浓度的测试化合物(利巴韦林作为阳性对照药物)孵育细胞。待继续培养约48h，病毒对照孔出现90％左右的CPE病变时，显微镜下观察细胞病变效应(CPE)。CPE的观察记录方法：无细胞病变记做-，25％以下细胞病变记做+，25％-50％细胞病变记做++，50％-75％细胞病变记做+++，75％以上细胞病变记为++++。CPE观察完毕后，利用MTT方法检测药物对EV71的抑制率。具体步骤为：每孔加入MTT50μL(5mg·mL-1)，孵育3-4h后去掉上清液，加入等体积的DMSO溶解沉淀。用酶标仪在492nm处读取所对应的吸光度(OD492值)。利用如下公式计算药物对EV71的抑制率。用SPSS11.5软件计算药物的半数有效浓度(Concentrationfor50％ofmaximaleffect，EC50)。1.3药物的治疗指数(SI)SI＝CC50/EC50。治疗指数越高，说明抗病毒潜力越大。2、试验结果表1具有新型结构的吡啶芳香酯类化合物细胞毒性及抗EV71活性a”-”：低于50％的抑制效果或者无效化合物细胞毒性及抗EV71活性测试结果如表1所示。浓度依赖的化合物对于EV71作用的RD细胞存活率的影响如图1所示。本专利技术检测到WY89、WY94、WY96和WY97对于EV71均有较好的抑制活性。WY94和和WY97在40μg/mL时均可以完全抑制EV71引起的RD细胞CPE效应，WY89和WY96在40μg/mL时对于EV71引起的RD细胞CPE效应的抑制效应分别为90％和83％。其中WY94具有最强的抑制活性(EC50为11.29)，高的治疗指数(SI为10.15)，优于对照药物利巴韦林。其他测试化合物检测到无或不足50％的抑制EV71细胞病变效应。化合物WY89、WY94、WY96和WY97抑制EV71引起的RD细胞CPE效应如图2所示。未做任何处理的RD细胞生长良好，EV71感染的细胞聚缩死亡，从细胞板壁脱离，40μg/mLWY89、WY94、WY96和WY97处理对于其病变效应有强的抑制作用，可以保护细胞免受EV71感染的侵害。【实施例2】WY94对于EV71子代病毒产量的抑制作用1、试验方法对数生长期的RD细胞铺板24孔板，长满单层后100TCID50EV71感染细胞，37℃孵育1.5h后移去病毒液，PBS洗涤三次，加入含40μg/mLWY94的细胞维持液。48h后收集细胞和上清培养液，-20℃和37℃三次冻融裂解后，TCID50方法测定EV71病本文档来自技高网...

【技术保护点】
吡啶芳香酯类化合物在制备抗肠道病毒71型的药物中的应用，其特征在于，所述吡啶芳香酯类化合物为WY89、WY94、WY96、WY97，其结构式如下式：

【技术特征摘要】
1.吡啶芳香酯类化合物在制备抗肠道病毒71型的药物中的应用，其特征在于，所述吡啶芳香酯类化合物为WY89、WY94、WY96、WY97，其结构式如下式：2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述吡啶芳香酯类化合物为WY94。3.一种抗肠道病毒71型的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏艳红，奚彩丽，李栋，张谦，尧晨光，
申请(专利权)人：湖北工业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42