埃兹蛋白在防治乙型脑炎病毒感染中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医学技术领域，是一种抗乙型脑炎病毒(JEV)感染的新靶点及应用。本发明专利技术以人脑微血管内皮细胞(HBMEC)作为靶细胞，采用RNA干扰技术下调靶细胞宿主蛋白的表达，来寻找可有效抑制JEV感染人脑微血管内皮细胞(HBMEC)的宿主因子，从而保护血脑屏障的功能，预防病毒穿过血脑屏障感染中枢神经系统。本发明专利技术提供了埃兹蛋白在防治乙型脑炎病毒感染中的应用，本发明专利技术通过实验发现埃兹蛋白(Ezrin)在JEV感染HBMEC中发挥着重要的作用，下调Ezrin的表达，能明显抑制JEV的感染。本发明专利技术提供了Ezrin在制备预防或治疗乙型脑炎病毒感染药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学
，是一种抗乙型脑炎病毒感染的新靶点及应用。
技术介绍
乙型脑炎病毒又称日本脑炎病毒（Japaneseencephalitisvirus，JEV)， 属于黄病毒科（Flaviviridae)黄病毒属（Flavivirus)，为有包膜的单正链RNA病毒 。JEV为流行性乙型脑炎的病原体，主要以蚊虫为媒介进行传播， 感染后能够引发脑炎或脑膜炎等严重的急性神经系统症状，对人类健康威胁巨大。乙型 脑炎主要流行于东亚、东南亚以及大洋洲的部分地区，目前主要的控制手段为疫苗预防 以及蚊虫的消除，然而全球每年报告的乙型脑炎病例仍有35, 000-50, 000例，死亡人数 超过 10,000 例，由于诊断和报告机制不完善，实际的感染和死亡病例要超 过这些数字，可见乙型脑炎仍然是危害公众健康的重大问题，因而研究JEV致病机理和预 防手段，寻找新的抗病毒策略，已成为亟待解决的前沿课题。JEV感染具有嗜神经性，易造成严重的中枢神经系统（CNS)疾病及其并发症，这 也是导致乙型脑炎患者发展为重症甚至死亡的主要原因。JEV经血液循环感染CNS需要穿越 血脑屏障，然而病毒如何穿过血脑屏障侵入CNS的机制还不清楚。血脑屏障（BloodBrain Barrier，BBB)是位于循环系统和中枢神经系统之间一道主要的屏障，它限制着不同物质在 两个部位之间的自由运输，对维持CNS的体内平衡以及保护CNS免受外界病原微生物的侵 袭中起着至关重要的作用。血脑屏障是由无窗孔的脑微 血管内皮细胞及其间的紧密连接、星形胶质细胞足突、细胞基膜和周细胞共同组成的一个 细胞复合体。在这个细胞复合体中，最主要的物质结构基础是脑微血管内皮细胞（Brain MicrovascularEndothelialCells，BMECs)及其紧密连接，其严整性的丢失被认为是病毒 感染致脑组织损伤的一个重要原因。因此，探明JEV感染BMECs的机制并以此寻找新的抗 病毒靶点，对于保护血脑屏障的功能，以及防治JEV所导致的中枢神经系统感染至关重要。 为了有效地感染细胞，病毒必须利用宿主细胞的膜分子及其囊泡运输系统完成 对宿主细胞的入侵，才能在细胞内进行复制并释放出有感染性的子代病毒颗粒。因此，作 为病毒感染宿主细胞的首要环节，细胞入侵已成为抗病毒药物筛选的重要靶标。研究表 明，JEV可利用不同的宿主因子和感染途径来侵入靶细胞，如JEV需借助网格蛋白依赖的 内吞途径（clathrin-mediatedendocytosis)感染非洲绿猴肾细胞（Vero细胞），但感染神经细胞并不需要依赖网格蛋 白。JEV可通过其包膜蛋白与热休克蛋白70相互作用来感染白 纹伊蚊细胞（C6/36 细胞） 以及人肝癌细胞（Huh7细胞）。目前，关于JEV感染 BMECs的途径及机制仍不清楚。 病毒侵入靶细胞主要借助了参与宿主细胞自身物质运输的关键分子，这些宿主 细胞膜转运分子在细胞的跨膜物质运输，囊泡的形成、内吞以及分泌中发挥着重要的作 用。如金属蛋白酶调节了细胞粘附，细胞膜分子的降解；网格蛋白（clathrin)主要负 责受体介导的的内吞过程；Flotillin分子能够与脂筏内蛋白分子相互作用并内吞入细 胞内；ADP核糖基化因子6分子参与调解细胞质膜运输和胞内肌动蛋白装配；GTP酶激 活蛋白分子GRAF1在网格蛋白非依赖型的囊泡运输中具有重要的调节作用；白细胞介 素2受体内吞调节了信号通路并影响了细胞增殖；epsin蛋白调节了网格蛋白介导的内 吞囊泡的运输过程等。在这些分子中，网格蛋白被证实参与了JEV感染的过程，而 其它分子在JEV感染中的作用还未有报道。 埃兹蛋白（Ezrin)为膜细胞骨架连接蛋白，是连接细胞膜和细胞骨架之间的 ERM(ezrin-radixin-moesin，埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白）家族成员之一。常与根蛋白、 膜突蛋白共同表达于细胞膜内侧。研究表明，Ezrin介导膜与细胞骨架的连接，是细胞信号 传导和生长过程中胞膜与细胞骨架的重要联系和调节分子。因此，Ezrin在维持细胞极性、 参与细胞运动、黏附、信号转导、调节免疫细胞功能等方面均发挥着作用。近些年研究也发现Ezrin 蛋白也参与了多种病毒的感染与致病过程。如Ezrin蛋白作为正向调节因子参与了免 疫缺陷病毒（HIV-1)的感染过程〇 Ezrin蛋白在丙型肝炎病毒（HCV)的感染过程中能够被HCV包膜E2蛋白诱导磷酸化，磷酸 化的Ezrin蛋白能够调节细胞骨架从而介导了HCV的有效感染。可见Ezrin蛋白在参与病毒感染 与致病过程中的重要作用。目前还没有任何关于埃兹蛋白分子在JEV感染中作用的报道，对于该分子进行深 入研究不仅能够提升对JEV感染与致病机制的认识，也可以为预防与治疗JEV感染提供新 的思路与靶点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗乙型脑炎病毒感染的新靶点。 本专利技术的另一目的在于提供埃兹蛋白（Ezrin)分子的新用途，特别是在抗乙型脑 炎病毒感染中的应用。 本专利技术的第三目的在于提供干扰Ezrin蛋白分子表达的siRNA。 本专利技术的主要技术方案是： 本专利技术，以人脑微血管内皮细胞（HBMEC)作为靶细胞，采用RNA干扰技术下调靶 细胞宿主蛋白的表达，来寻找可有效抑制JEV感染人脑微血管内皮细胞（HBMEC)的宿主因 子，从而保护血脑屏障的功能。本实验选择了一组参与或调节宿主细胞跨膜转运的分子来 进行筛选，这些分子在宿主细胞的跨膜物质运输，囊泡的内吞与分泌以及对细胞骨架的调 节过程中发挥着重要作用，它们往往也是在病毒感染过程中易被病毒"劫持"并利用的分 子。这些分子包括：ADAM金属蛋白酶（ADAM10)、ADP核糖基化因子6(ARF6)、网格蛋白轻 链A(CLTA)、当前第1页1 2 3 本文档来自技高网...

【技术保护点】
埃兹蛋白在制备预防或治疗乙型脑炎病毒感染药物中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐庆强，朱勇喆，戚中田，曹明媚，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31