抗血小板整合素糖蛋白IIIa单克隆抗体5A10及制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种抗血小板整合素糖蛋白IIIa单克隆抗体5A10及其制备方法和应用，本发明专利技术所述抗血小板整合素糖蛋白IIIa单克隆抗体5A10的制备方法是用整合素糖蛋白IIIa肽片段偶联钥孔血蓝蛋白KLH，然后免疫BALB/c小鼠，再用免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，经筛选,亚克隆获得分泌抗血小板整合素糖蛋白IIIa单克隆抗体的杂交瘤细胞株HYD‑5A10。HYD‑5A10经腹水生产，proteinG柱纯化，得到所需的单克隆抗体5A10。本发明专利技术单克隆抗体5A10可以氧化裂解血小板，溶解血小板栓块。本发明专利技术单克隆抗体5A10亦可与人脐静脉血管内皮细胞结合，抑制内皮细胞增殖、迁移及血管形成。因此，本发明专利技术单克隆抗体5A10可同时应用于制备治疗动脉血栓性疾病和抗肿瘤血管新生。

【技术实现步骤摘要】
抗血小板整合素糖蛋白IIIa单克隆抗体5A10及制备方法和应用
本专利技术涉及免疫学及生物医学领域，具体是采用杂交瘤方法生产一种能够快速裂解血小板栓块并抑制血管内皮新生的单克隆抗体5A10及制备方法和应用。
技术介绍
动脉血栓形成是心血管、脑血管和外周动脉疾病共同的病理生理机制。它对人类健康危害极大，可引起相应器官，尤其是心脑等重要脏器出现缺血、缺氧性坏死，危及生命。血小板在动脉血栓形成过程中起着关键性作用。动脉粥样硬化斑块损伤或破裂后可诱发血小板粘附、聚集在受损内皮，形成血栓，堵塞血管。目前临床常用的抗血小板药物：如血栓烷素抑制剂(阿司匹林)，ADP受体抑制剂(氯吡格雷)，血小板膜糖蛋白IIb/IIIa(GPIIb/IIIa)受体抑制剂(阿昔单抗)等都是通过抑制正常血小板的粘附、激活和聚集功能来预防血小板激活及栓块的形成。但对已形成的血小板栓块无作用。因此，发现新的药物作用方式将具有重要临床意义和社会价值。整合素包括a和β两种亚基。血小板上存在有整合素aIIbβ3，而血管内皮细胞上存在整合素avβ3。它们共有的是整合素β3亚基。血小板上的整合素aIIbβ3与血小板的粘附、激活、聚集本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗血小板整合素糖蛋白IIIa单克隆抗体5A10，其特征在于该单克隆抗体5A10是通过用血小板整合素GPIIIa49‑57片段免疫整合素GPIIIa缺陷型BALB/c小鼠，并采用杂交瘤法制备而得，其抗体的重链为IgG1型，轻链为κ型，抗体分子量为150 KDa。

【技术特征摘要】
1.一种抗血小板整合素糖蛋白IIIa单克隆抗体5A10，其特征在于该单克隆抗体5A10是通过用血小板整合素GPIIIa49-57片段免疫整合素GPIIIa缺陷型BALB/c小鼠，并采用杂交瘤法制备而得，其抗体的重链为IgG1型，轻链为κ型，抗体分子量为150KDa。2.一种权利要求1所述抗血小板整合素糖蛋白IIIa单克隆抗体5A10的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：a）将化学合成的血小板整合素GPIIIa49-57小肽即CAPESIEFP片段与钥孔血蓝蛋白即KLH偶联，通过皮下多点免疫的方式免疫整合素GPIIIa缺陷的BALB/c小鼠；抗原用PBS稀释至0.3mg/mL，取1000uL与1000uL弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂混合，乳化，皮下多点免疫；每隔2周免疫一次，共免疫4次；末次免疫后，对小鼠进行眼眶静脉采血，收集血清，用Elisa方法检测小鼠血清效价；选定Elisa检测为阳性的合格小...

【专利技术属性】
技术研发人员：张巍，聂宗英，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：上海,31