一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物、制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物、制备方法及其应用，其特征在于：所述的组合物包含抗肿瘤因子、胶原蛋白、多糖物质和活性因子。可应用于但不限于用于治疗乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、胃癌、肝癌、头、颈部鳞状细胞癌、子宫颈癌、肾细胞癌、甲状腺癌、急性髓性白血病、骨髓瘤、食管鳞状细胞癌和淋巴瘤等的细胞中。

Immune enhancement anti-tumor collagen composition, preparation method and application thereof

The present invention provides an immunity enhancing anti-tumor collagen composition, a preparation method and an application thereof, and is characterized in that the composition comprises an anti-tumor factor, a collagen protein, a polysaccharide substance and an active factor. Can be applied to but not limited to, for the treatment of breast cancer, colorectal cancer, ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, bladder cancer, melanoma, lung cancer, gastric cancer, liver cancer, head and neck squamous cell carcinoma, cervical carcinoma, renal cell carcinoma, thyroid cancer, acute myeloid leukemia, myeloma, esophageal squamous cell carcinoma and lymphoma cells.

【技术实现步骤摘要】
一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物、制备方法及其应用
本专利技术涉及医用生物材料
，具体涉及一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物、制备方法及其应用，该组合物能用于肿瘤预防、肿瘤术后防复发或延长肿瘤患者的生存期。
技术介绍
恶性肿瘤已成为威胁人类健康和生命的“第一杀手”，在人类死亡原因中，因患恶性肿瘤致死的病例已上升到首位。全世界每年大约有870万人患肿瘤，死亡约690万人，仅我国每年就有105万人死于晚期恶性肿瘤。目前治疗恶性肿瘤的方法十分有限，而肿瘤疫苗，是继手术切除、化疗、放疗等手段的另一种免疫治疗方案，包括治疗性和预防性疫苗。肿瘤疫苗包括肿瘤细胞疫苗、病毒疫苗、肿瘤抗原及抗原分子类疫苗、重组病毒、病菌疫苗、DNA疫苗、树突状细胞疫苗、热休克蛋白－多肽复合物疫苗等。肿瘤细胞疫苗是研究、运用最早的肿瘤疫苗，是将整个肿瘤细胞作为抗原导入患者体内，经树突状细胞(DC)提呈免疫细胞，诱导特异性的抗肿瘤免疫应答。由于肿瘤细胞带有肿瘤的全部抗原，无需考虑分离肿瘤特异性抗原，而且由于自体肿瘤细胞具有和正常组织相同的人类白细胞抗原，不会引发机体强烈的免疫排斥反应。但是肿瘤能在人体内发生并持续生长，因其具有多重免疫逃逸机制，如免疫原性低下、缺少刺激粘附分子、抗原呈递效率低下等等。因此，为提高肿瘤细胞免疫效果，应在疫苗中加入免疫增强剂，与抗原合并使用能增强抗原免疫性，提高肿瘤疫苗形成抗体的成功率。目前被FDA批准用于人体免疫的增强剂只有铝盐佐剂，而该佐剂由于材料的高度异质性，生产过程也难以实现统一标准，皮下注射易引起严重反应(如出现红斑、皮下结节、接触性过敏和肉芽肿性炎症)。因此，免疫增强剂还可以从新材料中寻找更安全、更有效的替代品。细胞外基质材料是一种潜在的生物型免疫增强剂材料，因此其本身在动物体内可以起到调控细胞微环境的作用，从而促进细胞相互作用、血管化及免疫反应。免疫原去除小肠粘膜下层(SIS)材料是在临床上广泛应用于腹壁、泌尿道、硬脑膜、血心管修复等软组织缺损修复、加固的生物医用材料。本身基质中除了I型胶原蛋白的主要成分，还含有糖胺聚糖、蛋白聚糖、纤维粘连蛋白、碱性纤维生长因子、血管内皮生长因子等生物因子，具有良好的生物相容性，可以促进缺损组织修复、血管化及功能重建。最为关键的是SIS材料与吞噬树突状细胞(DC)具有高度亲和性，而后者为最有效的抗原提呈细胞(APC)。另外SIS材料植入体内所激发的免疫反应主要为Th2通路，实现材料与宿主组织的整合与重建，而抑制Th1通路介导的促炎症反应。因此，SIS材料可以作为安全、可降解、高效的免疫增强剂，与肿瘤疫苗复合后作为免疫整体，用于肿瘤预防、肿瘤术后防复发或延长肿瘤患者的生存期。
技术实现思路
本专利技术提供一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物，该组合物采用SIS材料作为生物免疫增强剂，增强肿瘤细胞疫苗的免疫反应，用于肿瘤预防、肿瘤术后防复发或延长肿瘤患者的生存期。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述的组合物包含抗肿瘤因子、胶原蛋白、多糖物质和活性因子。所述组合物以动物小肠粘膜下层组织材料制成。所述动物为哺乳动物，优选猪或牛。所述抗肿瘤因子为灭活后肿瘤细胞疫苗。所述肿瘤细胞包括乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、胃癌、肝癌、头、颈部鳞状细胞癌、子宫颈癌、肾细胞癌、甲状腺癌、急性髓性白血病、骨髓瘤、食管鳞状细胞癌、淋巴瘤细胞或它们的组合。所述灭活方式为紫外线法、热灭活法、深冷冻融法、戊二醛法或它们的组合。所述的胶原蛋白为包含I型、III型、IV型和VI型胶原蛋白的组合物。所述的多糖物质为包含硫酸软骨素和透明质酸的组合物。所述的活性因子为包含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、整合素及生长因子的组合物。所述组合物是可体内降解的片状或颗粒状组合物。所述组合物的体内降解时间为1-3个月。所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物片状形态为：长1-10cm，宽1-10cm，厚度0.1-1mm。所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物颗粒状粒径为500μm以下。该颗粒尺寸用于注射。本专利技术还提供一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物的制备方法，其特征在于：采用动物小肠粘膜下层组织作为原料，依次通过组织前置处理、病毒灭活、免疫原消除、冷冻干燥、灭菌解析、肿瘤细胞培养、肿瘤细胞灭活、冷冻干燥、成型和灭菌解析；获得清除动物源病毒风险、细胞成分、DNA成分和α-Gal抗原，保留细胞外基质成分的物质，然后与抗肿瘤因子复合为组合物。本专利技术上述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物的制备方法，具体的步骤包括：(1)组织前置处理：取动物小肠粘膜下层组织材料，清洗并将水滤干；(2)病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡动物小肠粘膜下层组织材料进行病毒灭活，然后进行超声清洗；(3)免疫原去除：免疫原去除液采用加入胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，免疫原去除过程在多频超声装置中进行，然后进行超声清洗；得到动物小肠粘膜下层基质材料；(4)冷冻干燥：将一层或多层动物小肠粘膜下层基质材料固定于模具上，将模具放置于真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥；(5)灭菌解析：采用环氧乙烷进行灭菌，并进行解析；(6)肿瘤细胞培养：取自体或同种异体肿瘤切除组织，在MEM培养基中剪碎，体外培养传代后，分散为单个细胞，配制细胞培养液，向从步骤(4)得到的动物小肠粘膜下层基质材料上滴加细胞培养液；然后在培养箱中培养；(7)肿瘤细胞灭活：肿瘤细胞培养完成后，将动物小肠粘膜下层基材料与肿瘤细胞一同从培养基中取出，得到复合免疫增强剂肿瘤疫苗组合物。进一步地，本专利技术还可以包括以下步骤：将由步骤(7)得到的复合免疫增强剂肿瘤疫苗组合物放入冷冻干燥装置中冻干。得到片状复合免疫增强剂肿瘤疫苗组合物。进一步地，本专利技术还可以包括以下步骤：采用液氮破碎装置将片状复合免疫增强剂肿瘤疫苗组合物研磨破碎；然后进行过筛，得到粉状复合免疫增强剂肿瘤疫苗材料。进一步地，本专利技术还可以包括以下步骤：将由片状组合物或粉状组合物最后灭菌解析。本专利技术步骤(2)的过氧乙酸-乙醇溶液，其中过氧乙酸的体积百分比浓度为0.1％-5％、乙醇的体积百分比浓度为5％-40％，过氧乙酸-乙醇溶液与动物小肠粘膜下层组织材料的体积比为(3-20)︰1，灭活时间2-4小时，温度范围为10-40℃。采用pH6-8中的PBS溶液超声处理，温度10-40℃，溶液与动物小肠粘膜下层组织材料体积比为20：1至40：1之间，每次10-30分钟；清洗2-4次；然后采用纯化水超声清洗，温度范围为10-40℃，纯化水与动物小肠粘膜下层组织材料比例为20：1至40：1之间，检测电导率为10μS/cm以下终止。超声装置频率优选40kHz，功率优选3000W以上。本专利技术步骤(3)中的免疫原去除液包括：胰蛋白酶、EDTA和pH值为6-8的PBS溶液；所述免疫原去除液中胰蛋白酶质量百分比浓度为0.01-0.2％，EDTA的浓度为0.1-1mmol/L；进一步包括：免疫原去除液中胰蛋白酶的质量百分比浓度为0.02-0.05％，EDTA的浓度为0.4-0.8mmol/L，免疫原去除液pH值为7.0-8.0，优选为7.2-7.5；所述免疫原去除液与小肠粘膜下层组织材料体积比为(20-40)︰1；所述超声装置至少本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述的组合物包含抗肿瘤因子、胶原蛋白、多糖物质和活性因子。

【技术特征摘要】
1.一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述的组合物包含抗肿瘤因子、胶原蛋白、多糖物质和活性因子。2.根据权利要求1所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述组合物以动物小肠粘膜下层组织材料制成。3.根据权利要求2所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述动物为哺乳动物，优选猪或牛。4.根据权利要求1所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述抗肿瘤因子为灭活后的肿瘤细胞形成的肿瘤疫苗；所述的肿瘤细胞包括乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、胃癌、肝癌、头、颈部鳞状细胞癌、子宫颈癌、肾细胞癌、甲状腺癌、急性髓性白血病、骨髓瘤、食管鳞状细胞癌、淋巴瘤细胞或它们的组合，所述的灭活具体的方式为紫外线法、热灭活法、深冷冻融法、戊二醛法或它们的组合。5.根据权利要求1所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述的胶原蛋白为包含I型、III型、IV型和VI型胶原蛋白的组合物；所述的多糖物质包含硫酸软骨素和透明质酸；所述的活性因子为包含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、整合素及生长因子的组合物。6.根据权利要求1所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述的组合物为能体内降解的片状或颗粒状组合物；所述的组合物体内降解的时间为1-3个月；所述片状的形态是长1-10cm，宽1-10cm，厚度0.1-1mm；所述颗粒状的形态的粒径为500μm以下。7.一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物的制备方法，其特征在于：采用动物小肠粘膜下层组织作为原料，包括以下步骤：(1)组织前置处理：取动物小肠粘膜下层组织材料，清洗并将水滤干；(2)病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡动物小肠粘膜下层组织材料进行病毒灭活，然后进行超声清洗；(3)免疫原去除：免疫原去除液采用加入胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，免疫原去除过程在多频超声装置中进行，然后进行超声...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵博，夏磊磊，王洪权，赵延瑞，李学军，张晋辉，
申请(专利权)人：北京博辉瑞进生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11