【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域,具体来说,涉及一种用于脑肿瘤免疫治疗的多抗原检测方法。
技术介绍
脑肿瘤是严重威胁人类健康的常见疾病,据统计,恶性脑肿瘤占所有已知癌症患者的2%,占儿童肿瘤发病率的25%-30%,是我国乃至全世界公关的重点疾病之一。近年来,对脑肿瘤的发生发展机制和病理改变都有了越来越多的认识,但临床应用依然以手术治疗、放疗和化疗为脑肿瘤的主要治疗手段,虽然综合了先进的技术,但脑肿瘤由于其存在的特殊性,导致了患者复发几率大,预后差,依然有较高的伤残率和死亡率。对肿瘤发生发展机制的研究表明,经过手术,辅助放、化疗之后机体内残留的肿瘤细胞往往能逃脱出机体的免疫机制而继续生长。机体不能良好的识别和呈递抗原是免疫逃逸的因素之一。近年来发展起来的DC免疫治疗就是针对于肿瘤细胞表明特异性抗原的识别和呈递,来靶向呈递特异性肿瘤抗原,进而促使机体免疫系统杀死表达此抗原的肿瘤细胞。自1974年Ralph Marvin Steinman首次提出树突状细胞的概念,到2007年成功采用肿瘤裂解物负载DC的治疗方法治疗自己的胰腺癌,延长了生存期,也因此获得了2011年诺贝尔生理与医学奖。然而它的非靶向性也在一定程度上限制了它的疗效。近年发展起来的特异性抗原mRNA负载DC的治疗有效的解决了这个问题,但肿瘤抗原的选择和检测也就成了树立在我们面前的最大问题。根据已有的脑肿瘤相关抗原信息,从中筛选了在肿瘤组织较正常组织会有表达差异的基因,如PTPRZ1等64个抗原基因,并设计出特异性的引物对每位患者进行特异性抗原的检测,找出每位患者肿瘤细胞高表达的抗原基因,进而采用高表达的 ...
【技术保护点】
一种用于脑肿瘤免疫治疗的多抗原检测方法,其特征在于,包括以下步骤:S1对脑肿瘤现有抗原进行调研,归纳总结出可以用于靶向免疫治疗的相关抗原,并找到各个抗原的基因序列;S2对相关抗原基因序列进行分析,采用了编写的序列分析程序local blast对各个抗原基因进行逐个碱基扫描,找到基因片段保守性较好的区域;S3针对保守性较好的基因片段设计出各个抗原基因的特异性引物,并用其和人基因组进行比对,防止扩增中非特异产物的产生;S4检测模板的获得,包括以下步骤:S41组织样品RNA的提取:取适量RNAlater保存的组织样品,参照TRIzol裂解法提取组织样品RNA;以及S42获得模板cDNA:以组织样品RNA为模板,oligo dT为引物进行RNA的反转录得到组织样品cDNA;S5抗原基因的检测:采用qRT‑PCR的方法,特异性检测各个抗原基因的表达情况,探知各相关肿瘤抗原在表达水平的变化,包括以下步骤:S51以步骤S4获得的cDNA为模板,以水为阴性对照,设置空白对照,进行qRT‑PCR扩增;以及S52根据仪器扩增情况,直接观测各抗原特异性引物扩增情况,并根据脑组织中GAPDH的表达情况,得出各 ...
【技术特征摘要】
1.一种用于脑肿瘤免疫治疗的多抗原检测方法,其特征在于,包括以下步骤:S1对脑肿瘤现有抗原进行调研,归纳总结出可以用于靶向免疫治疗的相关抗原,并找到各个抗原的基因序列;S2对相关抗原基因序列进行分析,采用了编写的序列分析程序local blast对各个抗原基因进行逐个碱基扫描,找到基因片段保守性较好的区域;S3针对保守性较好的基因片段设计出各个抗原基因的特异性引物,并用其和人基因组进行比对,防止扩增中非特异产物的产生;S4检测模板的获得,包括以下步骤:S41组织样品RNA的提取:取适量RNAlater保存的组织样品,参照TRIzol裂解法提取组织样品RNA;以及S42获得模板cDNA:以组织样品RNA为模板,oligo dT为引物进行RNA的反转录得到组织样品cDNA;S5抗原基因的检测:采用qRT-PCR的方法,特异性检测各个抗原基因的表达情况,探知各相关肿瘤抗原在表达水平的变化,包括以下步骤:S51以步骤S4获得的cDNA为模板,以水为阴性对照,设置空白对照,进行qRT-PCR扩增;以及S52根据仪器扩增情况,直接观测各抗原特异性引物扩增情况,并根据脑组织中GAPDH的表达情况,得出各个抗原相对的表达情况;S6检测结果的测序验证:qRT-PCR的产物直接测序验证qRT-PCR的检测结果。2.根据权利要求1所述的用于脑肿瘤免疫治疗的多抗原检测方法,其特征在于,在步骤S1中,相关抗原的基因包括:GAPDH、AIM2、Art-4、BCAN、BSG、CD133、CHI3L2、COX-1、COX-2、CSPG4、EphA2、Ezh2、FABP7、Fosl1、FOXP3、Glast、GnT-V、gp100、HB-EGF、HNRPL、HO-1、IDO1、IDO2、IGF2BP3、IL13-Rα2、IQGAP1、ITGAV、KIF1C、KIF21B、KIFC3、Lck、Mart-1、MELK、MRP3、NLGN4X、NrCAM、NY-ESO-1、OFA/iLRP、PCNA、PDL-1、PDL-2、PGE2、PIK3R1、Prame、PTH-rP、PTPRZ1、Sart-1、Sart-2、Sart-3、SEC61G、Sox10、Sox11、Sox-2、SPANX-B、STAT3、Survivin、TDO2...
【专利技术属性】
技术研发人员:李军旗,肖云鹏,袁晓辉,王茜婷,何有文,廖化新,
申请(专利权)人:暨南大学,广州泰诺迪生物科技有限公司,珠海泰诺麦博生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:广东;44
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