CD44的分离的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供CD44的分离的多肽。因此，提供由选自SEQ ID NOs:1‑3的氨基酸序列组成的分离的多肽。还提供一种包含选自SEQ ID NOs:1‑3的氨基酸序列的分离的封端修饰的多肽，其中修饰的多肽具有抗炎活性。还提供物质组合物、融合蛋白和药用组合物和它们在治疗炎性疾病中的用途。

Polypeptides isolated from CD44 and uses thereof

The present invention provides isolated polypeptides of CD44. Therefore, the polypeptide separated by ID from SEQ provided NOs:1 consisting of 3 amino acid sequence. Also provides an isolated polypeptide containing ID NOs:1 selected from SEQ 3 amino acid sequence of the sealing end modified, the modified peptide with anti-inflammatory activity. Substance compositions, fusion proteins, and pharmaceutical compositions and their use in the treatment of inflammatory diseases are also provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD44的分离的多肽及其应用专利
和背景本专利技术，在其一些实施方案中，涉及CD44的分离的多肽，且更特别地，但不排外地，涉及CD44vRA的分离的多肽及其在治疗炎性疾病中的用途。CD44是一种细胞表面粘附分子，其参与多种细胞功能，包括细胞-细胞和细胞-基质相互作用、细胞迁移、程序性细胞死亡(细胞凋亡)，或相反地，细胞存活和增殖。CD44是对于透明质酸(HA)的主要细胞表面受体，但它也已显示结合蛋白例如胶原蛋白、纤连蛋白、纤维蛋白原、层粘连蛋白、粘膜血管地址素和骨桥蛋白。CD44对于将循环淋巴细胞募集到炎症部位是必要的，并且CD44(和有时透明质酸)的显著积聚，在密集细胞迁移和细胞增殖的区域被检测到，如在创伤愈合、组织重塑、炎症、形态发生和癌发生中。小鼠和人CD44的基因组序列包含在5'末端的5个恒定外显子，和在3'端的5个恒定外显子。小鼠CD44基因包含在分子中间的10个变体外显子，称为V1-V10，导致总共20个外显子。人CD44基因仅包含这10个变体外显子中的9个(V2-V10)，因此包含总共19个外显子。不同的V2-V10选择性剪接产生CD44的许多同种型，其表达变体外显子(称为外显子Vx，x=1-10)的各种组合，其被插入近膜结构域中并构成分子的可变区。这些分子被称为CD44变体(CD44v)。到目前为止已知有几十个CD44同种型。CD44s，其不包含任何变体外显子，是最普遍存在的形式，并被大多数类型的细胞表达[Ponta,H.等人NatRevMolCellBiol.2003Jan;4(1):33-45]。CD44变体蛋白，其中包含10个变体外显子的一个或多个，大多数被报道与癌症，和自身免疫性疾病例如类风湿性关节炎和多发性硬化有关[见例如Naor等Adv.CancerRes.,71,241-319,1997；和Naor等CriticalReviewsinClinicalLaboratorySciences.39,527-579,2002]。患有类风湿性关节炎(RA)的患者的关节炎性细胞显示一个称为CD44vRA的选择性剪接CD44变体的序列。人CD44vRA含有与角化细胞CD44v3-v10同种型的序列相同的序列，其中在变体外显子4和变体外显子5之间的剪接接合处加入额外的丙氨酸，其不干扰阅读框。患有胶原诱导的关节炎(CIA)的小鼠在相同的位点含有也包括丙氨酸的类似的序列。CD44vRA序列在RA患者和银屑病关节炎(PA)患者的关节炎性滑膜细胞上表达，但既不在健康供体的角化细胞也不在外周血白细胞(PBLs)上表达。此外，虽然RA患者的关节炎性细胞表达CD44vRA，但得自同一患者的PBLs和得自骨关节炎患者的滑膜液细胞几乎不能表达这种变体，表明这种同种型的排他性(Nedvetzki等,JClinInvest111:1211-1220,2003;Golan等,JAutoimm28:99-113,2007)。已有报道抗-CD44抗体、CD44蛋白、肽或衍生物的给予可用来治疗各种自身免疫性疾病(如Naor等,Adv.CancerRes.,71,241-319,1997;Naor等,CriticalReviewsinClinicalLaboratorySciences.39,527-579,2002;TurleyEA和NaorD.FrontBiosci.17:1775-1794,2012)。此外，抗-CD44vRA单克隆抗体和CD44vRA-衍生的肽先前已被提出(Golan等,JAutoimm28:99-113,2007,国际申请公布号：WO2010/058396、WO2005/007700；WO2003/014160、WO2000/075312；美国专利号US7,534,605和US8,193,311；和美国专利申请公布号：US20060019340)。专利技术概述根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，在此提供一种由选自SEQIDNOs:1-3的氨基酸序列组成的分离的多肽。根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，在此提供包含选自SEQIDNOs:1-3的氨基酸序列的分离的封端修饰的多肽，其中修饰的多肽具有抗炎活性。根据本专利技术的一些实施方案，所述封端包含N末端封端。根据本专利技术的一些实施方案，所述N末端封端包含乙酰基。根据本专利技术的一些实施方案，所述封端包含C末端封端。根据本专利技术的一些实施方案，所述C末端封端包含酰胺。根据本专利技术的一些实施方案，所述多肽由选自SEQIDNOs:1-3的氨基酸序列组成。根据本专利技术的一些实施方案，所述多肽如在SEQIDNO:1中所示。根据本专利技术的一些实施方案，所述封端修饰的多肽选自SEQIDNOs:4-6。根据本专利技术的一些实施方案，在此提供一种包含分离的多肽和连接于分离的多肽的非蛋白质部分的物质组合物，其中分离的融合多肽具有抗炎活性。根据本专利技术的一些实施方案，在此提供一种包含具有C和/或N末端连接的氨基酸序列的分离的多肽的分离的融合多肽，其中C末端氨基酸序列是具有分离的融合多肽的非连续的CD44vRA氨基酸序列；和其中融合多肽具有抗炎活性。根据本专利技术的一些实施方案，所述连接是共价连接。根据本专利技术的一些实施方案，抗炎活性不依赖于疫苗接种或粘膜耐受性。根据本专利技术的一些实施方案，分离的多肽或物质组合物能够结合选自血清淀粉样蛋白A、甲状腺素运载蛋白和载脂蛋白B的蛋白。根据本专利技术的一些实施方案，在此提供一种包含作为活性剂的分离的多肽或物质组合物；和药学上可接受的载体或稀释剂的药用组合物。根据本专利技术的一些实施方案，在此提供一种在有需要的受试者中治疗炎性疾病的方法，该方法包括给予受试者治疗有效量的分离的多肽、物质组合物或药用组合物，从而治疗受试者的炎性疾病。根据本专利技术的一些实施方案，在此提供分离的多肽、物质组合物或药用组合物在制备用于治疗炎性疾病的药物中的用途。根据本专利技术的一些实施方案，给药包括口服给药。根据本专利技术的一些实施方案，组合物被配制用于口服给药。根据本专利技术的一些实施方案，炎性疾病涉及表达CD44vRA的细胞。根据本专利技术的一些实施方案，炎性疾病选自类风湿性关节炎、银屑病关节炎、阿尔茨海默氏病、癌症和心血管疾病。根据本专利技术的一些实施方案，炎性疾病是类风湿性关节炎。根据本专利技术的一些实施方案，在此提供一种包含编码分离的多肽的核酸序列的分离的多核苷酸。根据本专利技术的一些实施方案，在此提供包含分离的多核苷酸的核酸构建体。根据本专利技术的一些实施方案，在此提供一种确定一批分离的多肽、物质组合物或药用组合物的效力的方法，该方法包括：(a)使一批分离的多肽、物质组合物或药用组合物与从类风湿性关节炎患者的发炎关节获得的成纤维细胞接触；和(b)在预定的培养时间之后确定成纤维细胞的存活，以确定该批的效力。根据本专利技术的一些实施方案，该方法包括在接触前合成具有修饰的分离的多肽、物质组合物或药用组合物。根据本专利技术的一些实施方案，在接触后成纤维细胞的存活减少是该批有效力的指示。根据本专利技术的一些实施方案，该方法前包括比较所述细胞的存活与所述细胞与标准参照批的分离的多肽、物质组合物或药用组合物接触后的存活，以确定所述批的相对效力。根据本专利技术的一些实施方案，该方法在体外或离体实现。除非另外限定，本文使用的全部技术和/或科本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种由选自SEQ ID NOs: 1‑3的氨基酸序列组成的分离的多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.15 US 62/0247191.一种由选自SEQIDNOs:1-3的氨基酸序列组成的分离的多肽。2.一种包含选自SEQIDNOs:1-3的氨基酸序列的分离的封端修饰的多肽，其中所述修饰的多肽具有抗炎活性。3.权利要求2的封端修饰的多肽，其中所述封端包含N末端封端。4.权利要求3的封端修饰的多肽，其中所述N末端封端包含乙酰基。5.权利要求2-4的任一项的封端修饰的多肽，其中所述封端包含C末端封端。6.权利要求5的封端修饰的多肽，其中所述C末端封端包含酰胺。7.权利要求2-6的任一项的封端修饰的多肽，其中所述多肽由选自SEQIDNOs:1-3的氨基酸序列组成。8.权利要求1-6的任一项的分离的肽，其中所述多肽如在SEQIDNO:1中所示。9.权利要求2的封端修饰的多肽，其选自SEQIDNOs:4-6。10.一种包含权利要求1-9的任一项的分离的多肽和连接于所述分离的多肽的非蛋白质部分的物质组合物，其中所述分离的融合多肽具有抗炎活性。11.一种分离的融合多肽，其包含具有C和/或N末端连接的氨基酸序列的权利要求1和8的任一项的分离的多肽，其中所述C末端氨基酸序列是具有所述分离的融合多肽的非连续的CD44vRA氨基酸序列；且其中所述融合多肽具有抗炎活性。12.权利要求10的物质组合物或权利要求11的分离的多肽，其中所述连接是共价连接。13.权利要求2-8和10-12的任一项的分离的多肽或物质组合物，其中所述抗炎活性不依赖于疫苗接种或粘膜耐受性。14.权利要求1-13的任一项的分离的多肽或物质组合物，其能够结合选自血清淀粉样蛋白A、甲状腺素运载蛋白和载脂蛋白B的蛋白。15.一种药用组合物，其包含作为活性剂的、权利要求1-14的任一项的分离的多肽或物质组合物；和药学上可接受的载体或稀释剂。16.一种在有需要的受试者中治疗炎性疾...

【专利技术属性】
技术研发人员：D纳奥，L埃卡塞布班，KO阿马，S科肯，
申请(专利权)人：耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司，
类型：发明
国别省市：以色列,IL