T细胞受体制造技术

本发明专利技术涉及T细胞受体(TCR)，其结合衍生自MAGE‑A10蛋白的HLA‑A*02限制性的肽GLYDGMEHL(SEQ ID NO：1)。本发明专利技术的TCR显示了对于该MAGE表位的优异的特异性谱。还提供了编码TCR的核酸、工程化以提呈TCR的细胞、携带编码TCR的表达载体的细胞以及包含本发明专利技术的TCR、核酸或细胞的药物组合物。

T cell receptor

The present invention relates to T cell receptor (TCR), the combination of derived from MAGE A10 protein HLA A*02 restricted peptide GLYDGMEHL (SEQ ID NO:1). The TCR of the present invention displays excellent spectral specificity for the MAGE epitope. Also provided are nucleic acids encoding TCR, engineered cells for TCR presentation, cells carrying TCR encoding expression vectors, and pharmaceutical compositions comprising the TCR, nucleic acids, or cells of the present invention.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞受体
本专利技术涉及T细胞受体(TCR)，其结合衍生自MAGE-A10蛋白的HLA-A*02限制性的肽GLYDGMEHL(SEQIDNO：1)。本专利技术的TCR显示了对于该MAGE表位的优异的特异性谱。
技术介绍
GLYDGMEHL(SEQIDNo：1)肽对应于已知在许多肿瘤类型中表达的MAGE-A10蛋白的氨基酸残基编号254-262。MAGE-A10是大量序列相关的MAGE癌-睾丸抗原蛋白中最具免疫原性的成员之一。其由常见的实体肿瘤类型(例如，肺、肝和胃转移)范围中的三分之一至三分之二表达。此外，它由几种较不常见的肿瘤类型(例如，各种鳞状细胞癌)表达。正常成人MAGE-A10组织表达局限于胎盘和精子细胞/睾丸的免疫赦免位置。通过质谱分析法，已经确认MAGE-A10T细胞抗原肽GLYDGMEHL由HLA-A2阳性肿瘤细胞系提呈。一些MAGE基因家族蛋白(MAGE-A至MAGE-C家族)仅在生殖细胞和癌症中表达。其它(MAGE-D至MAGE-H)在正常组织中广泛表达。所有这些MAGE蛋白家族具有与MAGE-A10GLYDGMEHL肽的序列紧密匹配的同源区。因此，重要的是选择针对MAGE-A10肽/HLA-A2抗原高度特异性或至少与互补正常组织和肿瘤分布的其它MAGE家族抗原结合的TCR临床候选物。
技术实现思路
在第一方面，本专利技术提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合与HLA-A*02复合的GLYDGMEHL(SEQIDNo：1)的特性，当使用可溶形式的TCR在25℃和pH为7.1-7.5的表面等离子体共振测量时，具有约0.05μM至约10.0μM的解离常数，其中所述TCR包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域，并且其中TCR可变结构域形式至少与GLYDGMEHL(SEQIDNo：1)的残基Y3和E7的接触。在一些实施方案中，TCR的α链可变结构域包含与SEQIDNo：4的氨基酸残基1-111的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，和/或β链可变结构域包含与SEQIDNo：5的氨基酸残基1-111的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。在另一方面，本专利技术提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合与HLA-A*02复合的GLYDGMEHL(SEQIDNo：1)的特性，并且包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域。所述α链可变结构域包含与SEQIDNo：4的氨基酸残基1-111的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，和/或所述β链可变结构域包含与SEQIDNo：5的氨基酸残基1-111的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。GLYDGMEHLHLA-A2复合物提供了本专利技术的TCR可靶向的癌症标志物。本专利技术提供了这样的TCR，其用于将细胞毒性或免疫效应剂递送至癌细胞和/或用于在过继治疗中使用的目的。TCR使用国际免疫遗传学(IMGT)TCR命名法描述，并且链接到TCR序列的IMGT公共数据库。天然α-β异二聚体TCR具有α链和β链。广泛地，每条链包含可变区、连接区和恒定区，β链通常还在可变区和连接区之间含有短的多变区，但是该多变区通常被认为是连接区的一部分。每个可变区包含嵌入框架序列中的三个CDR(互补决定区)，一个是名为CDR3的高变区。有几种类型的α链可变(Vα)区和几种类型的β链可变(Vβ)区，其区别在于它们的框架、CDR1和CDR2序列以及部分限定的CDR3序列。在IMGT命名法中，Vα类型通过唯一的TRAV编号来指代。因此，“TRAV21”定义TCRVα区具有独特框架和CDR1和CDR2序列，以及部分由TCR到TCR间保守的氨基酸序列限定的CDR3序列，但所述CDR3序列还包括在TCR到TCR间变化的氨基酸序列。以相同的方式，“TRBV5-1”定义具有独特框架和CDR1和CDR2序列、但仅具有部分限定的CDR3序列的TCRVβ区。类似地，TCR的连接区由独特的IMGTTRAJ和TRBJ命名法定义，而恒定区由IMGTTRAC和TRBC命名法定义。β链多变区在IMGT命名法中通过缩写TRBD指代，并且如所提及的，连接的TRBD/TRBJ区通常一起被认为是连接区。αβTCR的α和β链一般被认为各自具有两个“结构域”，即可变结构域和恒定结构域。可变结构域由可变区和连接区的连接组成。在本说明书和权利要求书中，术语“TCRα可变结构域”因此是指TRAV和TRAJ区的连接，术语TCRα恒定结构域指细胞外TRAC区或C-末端(C-terminal)截短的TRAC序列。同样，术语“TCRβ可变结构域”是指TRBV和TRBD/TRBJ区的连接，术语TCRβ恒定结构域指细胞外TRBC区或C末端截短的TRBC序列。由IMGT命名法定义的独特序列是众所周知的，并且对于在TCR领域工作的人员是可得到的。例如，它们可以在IMGT公共数据库中找到。“TcellReceptorFactsbook”，(2001)LeFranc和LeFranc，Academic出版社，ISBN0-12-441352-8也公开了由IMGT命名法定义的序列，但由于其公开日期和随后的时滞，其中的信息有时需要通过参考IMGT数据库来确认。根据本专利技术的一种TCR包含SEQIDNo：2所示的α链细胞外结构域和SEQIDNo：3所示的β链细胞外结构域。术语“亲本TCR”、“亲本MAGE-A10TCR”在本文中同义使用，用以指包含分别为SEQIDNO：2和SEQIDNO：3的细胞外α和β链的该TCR。期望提供相对于亲本TCR突变或修饰的TCR，其与亲本TCR相比对肽-HLA复合物具有更高的亲和力和/或更慢的解离速率。为了提供了一种所述突变或修饰的TCR的结合谱与其可以比较的参照TCR，使用根据本专利技术的可溶的TCR是方便的，所述可溶的TCR具有图2a中给出的亲本MAGE-A10TCRα链的细胞外序列(SEQIDNo：4)和图2b中给出的亲本MAGE-A10TCRβ链的细胞外序列(SEQIDNo：5)。该TCR在本文中称为“参照TCR”或“参照MAGE-A10TCR”。注意，SEQIDNo：4是SEQIDNo：2的亲本α链细胞外序列，除了C162已经取代T162(即TRAC的T48)之外。同样，SEQIDNo：5是SEQIDNo：3的亲本β链细胞外序列，除了C169已经取代S169(即TRBC2的S57)，A187已经取代C187并且D201已经取代N201。相对于亲本α和β链细胞外序列的这些半胱氨酸取代使得能够形成链间二硫键，其稳定重折叠的可溶的TCR，即通过重折叠细胞外α和β链形成的TCR。使用稳定的二硫键连接的可溶的TCR作为参照TCR使得能够更方便地评估结合亲和力和结合半衰期。本专利技术的TCR可以包含上述突变。本专利技术的TCR可以是非天然存在的和/或纯化的和/或工程化的。相对于亲本TCR，本专利技术的TCR可以具有在α链可变结构域和/或β链可变结构域中存在的多于一个突变。“工程化TCR”和“突变TCR”在本文中同义使用，并且一般是指相对于亲本TCR，具有引入的一个或多个突变的TCR，尤其是在其α链可变结构域和/或β链可变结构域。这些突变可以改善针对与HLA-A*02复合的GLYDGMEHL(SEQIDNo：1)的结合亲和力。在某些实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种T细胞受体(TCR)，其具有结合与HLA‑A*02复合的GLYDGMEHL(SEQ ID No：1)的特性，当使用可溶形式的TCR在25℃和pH为7.1‑7.5的表面等离子体共振测量时，具有约0.05μM至约10.0μM的解离常数，其中所述TCR包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域，并且其中所述TCR可变结构域形式至少与GLYDGMEHL(SEQ ID No：1)的残基Y3和E7的接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.08 GB 1417803.2;2014.10.08 US 62/061,2481.一种T细胞受体(TCR)，其具有结合与HLA-A*02复合的GLYDGMEHL(SEQIDNo：1)的特性，当使用可溶形式的TCR在25℃和pH为7.1-7.5的表面等离子体共振测量时，具有约0.05μM至约10.0μM的解离常数，其中所述TCR包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域，并且其中所述TCR可变结构域形式至少与GLYDGMEHL(SEQIDNo：1)的残基Y3和E7的接触。2.根据权利要求1所述的TCR，其是α-β异二聚体，具有α链TRAC恒定结构域序列和β链TRBC1或TRBC2恒定结构域序列。3.根据权利要求2所述的TCR，其中α链和β链恒定结构域序列通过截短或取代来修饰，用以缺失TRAC的外显子2的Cys4和TRBC1或TRBC2的外显子2的Cys2之间的天然二硫键。4.根据权利要求2或3所述的TCR，其中α链和β链恒定结构域序列通过半胱氨酸残基取代TRAC的Thr48和TRBC1或TRBC2的Ser57来修饰，所述半胱氨酸在TCR的α和β恒定结构域之间形成二硫键。5.根据权利要求1所述的TCR，其是类型Vα-L-Vβ、Vβ-L-Vα、Vα-Cα-L-Vβ或Vα-L-Vβ-Cβ的单链形式，其中Vα和Vβ分别是TCRα和TCRβ可变区，Cα和Cβ分别是TCRα和TCRβ恒定区，L是接头序列。6.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其与可检测标记、治疗剂或PK修饰部分结合。7.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其中，α链可变结构域包含与SEQIDNo：4的氨基酸残基1-111的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，并且具有以下突变：Q31A或S其中参考SEQIDNo：4中所示的编号，和/或β链可变结构域包含与SEQIDNo：5的氨基酸残基1-111的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，并且具有以下突变中的至少一种：E30DG51S、A或F其中参考SEQIDNo：5中所示的编号。8.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其中α链可变结构域包含SEQIDNO：6或SEQIDNO：12的氨基酸残基1-111的氨基酸序列，或者包含氨基酸序列，其中其氨基酸残基1-26、33-49、55-89和94-111分别与SEQIDNo：6或SEQIDNO：12的氨基酸残基1-26、33-49、55-89和94-111的序列具有至少90％或95％的同一性，以及其中氨基酸残基27-32、50-54和90-93分别与SEQIDNo：6或SEQIDNO：12的氨基酸残基27-32、50-54和90-93的序列具有至少90％或95％的同一性。9.根据权利要求1-7中任一项所述的TCR，其中α链可变结构域包含SEQIDNo：7或SEQIDNo：13的氨基酸残基1-111的氨基酸序列，或者包含氨基酸序列，其中其氨基酸残基1-26、33-49、55-89和94-111分别与SEQIDNo：7或SEQIDNo：13的氨基酸残基1-26、33-49、55-89和94-111的序列具有至少90％或95％的同一性，以及其中氨基酸残基27-32、50-54和90-93分别与SEQIDNo：7或SEQIDNo：13的氨基酸残基27-32、50-54和90-93的序列具有至少90％或95％的同一性。10.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其中在α链可变结构域中，序列为(i)其氨基酸残基1-26具有(a)与SEQIDNo：4的氨基酸残基1-26的序列至少90％的同一性，或(b)相对于(a)的序列，具有一个、两个或三个氨基酸残基的插入或缺失；(ii)氨基酸残基27-32是DRGSQS、DRGSAS或DRGSSS；(iii)其氨基酸残基33-49具有(a)与SEQIDNO：4的氨基酸残基33-49的序列至少90％的同一性，或(b)相对于(a)的序列，具有一个、两个或三个氨基酸残基的插入或缺失；(iv)氨基酸残基50-54是IYSNG；(v)其氨基酸残基55-89具有与SEQIDNo：4的氨基酸残基55-89的序列至少90％的同一性，或者相对于前者具有一个、两个或三个插入、缺失或取代；(vi)氨基酸90-93是AVRG；和(vii)其氨基酸残基94-111具有与SEQIDNo：4的氨基酸残基94-111的序列至少90％的同一性，或者相对于前者具有一个、两个或三个插入、缺失或取代。11.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·海斯，A·沃尔科夫，A·热里，E·博德，E·卡特，
申请(专利权)人：艾达普特免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB