【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及t细胞的产生，例如以在免疫疗法中使用。
技术介绍
1、免疫治疗剂有望改变癌症治疗格局，带来长期存活的希望(mcdermott等人，cancer treat rev.2014年10月；40(9)：1056-64)。对于扩大患者群体和肿瘤类型范围的新的免疫调节药物存在明显未满足的医学需求。此外，需要新的剂来增加抗肿瘤反应的幅度和持续时间。由于在过去二十年中对控制t细胞免疫的基本原理有了深入了解，这些剂的开发已经成为可能(sharma和allison，cell.2015年4月9日；161(2)：205-14)。这通常需要识别由mhc分子呈递的肿瘤相关肽抗原的肿瘤特异性cd4+和cd8+t细胞。不同的接种策略和离体扩增的肿瘤浸润淋巴细胞的过继转移在一些情况下已经证明肿瘤特异性t细胞治疗晚期癌症的能力(rosenberg等人，nat med.2004年9月；10(9)：909-15)。
2、然而，目前的过继t细胞疗法受到合适患者和肿瘤特异性t细胞的缺乏的限制，并且需要治疗上足够的和功能性的抗原特异性t细胞以有效地在免疫疗法中使用。
3、据报道，嘧啶并[4，5-b]吲哚衍生物可增强造血干细胞(hsc)的扩增，但抑制它们的分化(wo2013110198)。
技术实现思路
1、本专利技术人已经认识到某些嘧啶并吲哚化合物，诸如um729和um171，可用于增加造血祖细胞向祖t细胞的分化和/或祖t细胞群的扩增。这可用于例如产生用于免疫疗法的t细胞。
2
3、在嘧啶并吲哚化合物的存在下，将造血祖细胞(hpc)群分化为祖t细胞。
4、嘧啶并吲哚化合物的存在可增加分化为祖t细胞的hpc的比例。
5、第一方面的方法还可以包括扩增祖t细胞群。优选地，通过在嘧啶并吲哚化合物的存在下培养来扩增祖t细胞群。
6、本专利技术的第二方面提供了一种扩增祖t细胞群的方法，该方法包括在嘧啶并吲哚化合物的存在下培养祖t细胞群。
7、嘧啶并吲哚化合物的存在可以增加所述培养后群体中祖t细胞的数量。
8、本专利技术的第三方面提供了一种产生t细胞群的方法，该方法包括：
9、通过第一方面或第二方面的方法产生祖t细胞群，
10、使祖t细胞成熟以产生tcr αβ+t细胞群；以及
11、任选地活化和扩增tcr αβ+t细胞以产生tcr αβ+cd8+t细胞群或tcr αβ+cd4+t细胞群。
12、本专利技术的第四方面提供了一种通过第一方面或第二方面的方法产生的祖t细胞群或通过第三方面的方法产生的tcr αβ+t细胞群。
13、本专利技术的第五方面提供了一种药物组合物，该药物组合物包含第三方面的tcr αβ+t细胞群和药学上可接受的赋形剂。
14、本专利技术的第六方面提供了一种治疗方法，该方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的第三方面的tcr αβ+t细胞群。
15、本专利技术的第七方面提供了嘧啶并吲哚化合物在将hpc分化为祖t细胞中的用途。
16、本专利技术的第八方面提供了嘧啶并吲哚化合物用于扩增祖t细胞群的用途。
17、下面更详细地描述本专利技术的其他方面和实施方案。
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1.一种产生祖T细胞群的方法，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物的存在增加了分化为祖T细胞的HPC的比例。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HPC通过包括在补充有有效量的所述嘧啶并吲哚化合物的淋巴样扩增培养基中培养所述HPC群的方法来分化。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述淋巴样扩增培养基由补充有有效量的SCF、FLT3L、TPO、IL7和所述嘧啶并吲哚化合物的化学成分确定的营养培养基组成。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HPC具有CD34+表型。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HPC通过包括将所述HPC分化为共同淋巴样祖细胞(CLP)以及将所述CLP分化为祖T细胞的方法来分化。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HPC群是在体外由诱导多能干细胞(iPSC)产生的。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述方法包括提供iPSC群以及将所述iPSC分化为HPC群。
9.根据前述权利要求中任
10.一种用于扩增祖T细胞的方法，其包括：
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物的存在增加了群体中所述祖T细胞的增殖。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，其中所述祖T细胞的扩增持续至少21天。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物为取代的嘧啶并[4，5-b]吲哚。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物为4-(3-哌啶-1-基丙基氨基)-9H-嘧啶并[4，5-b]吲哚-7-甲酸甲酯。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物为(1R，4R)-N1-(2-苄基-7-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-9H-嘧啶并[4，5-b]吲哚-4-基)环己烷-1,4-二二胺。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物以小于5μM的浓度存在。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述方法还包括将编码αβTCR的异源核酸引入所述iPSC、HPC或祖T细胞中。
18.根据权利要求17所述的方法，其中编码所述αβ TCR的所述异源核酸包含在表达载体中。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述表达载体是慢病毒载体。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的方法，其中所述αβ TCR是亲和力增强的TCR。
21.根据权利要求17至20中任一项所述的方法，其中所述αβ TCR与展示由细胞表达的靶抗原的肽片段的MHC特异性结合，或者独立于MHC呈递而与由细胞表达的靶抗原或其肽特异性结合。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述αβ TCR与展示由癌细胞表达的肿瘤抗原的肽片段的MHC特异性结合，或者独立于MHC呈递而与由癌细胞表达的肿瘤抗原或其肽片段特异性结合。
23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括进一步分化所述祖T细胞以产生TCR αβ+T细胞。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述祖细胞通过包括在T细胞成熟培养基中培养所述祖T细胞群的方法进一步分化。
25.根据权利要求23或权利要求24所述的方法，其中所述TCR αβ+T细胞具有CD8+CD4+表型。
26.根据权利要求23至25中任一项所述的方法，其包括活化和扩增所述TCR αβ+T细胞以产生具有CD8+单阳性表型或CD4+单阳性表型的T细胞的群。
27.根据权利要求23至26中任一项所述的方法，其中所述TCR αβ+T细胞与表达靶抗原的细胞特异性结合。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述靶抗原是肿瘤抗原。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述TCRαβ+T细胞与表达所述肿瘤抗原的癌细胞特异性结合。
30.根据权利要求23至29中任一项所述的方法，其还包括分离或纯化所述TCR αβ+T细胞。
31.根据权利要求30所述的方法，其中TCR αβ+T细胞通过磁性活化细胞分选来分离。
32.根据权利要求23至31中任一项所述的方法，其还包括浓缩所述TCRαβ+T细胞群。
33.根据权利要求23至32中任一项所述的方法，其包括储存所述TCRαβ+T细胞群。
34.根据权利要求23至33中任一项...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种产生祖t细胞群的方法，其包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物的存在增加了分化为祖t细胞的hpc的比例。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述hpc通过包括在补充有有效量的所述嘧啶并吲哚化合物的淋巴样扩增培养基中培养所述hpc群的方法来分化。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述淋巴样扩增培养基由补充有有效量的scf、flt3l、tpo、il7和所述嘧啶并吲哚化合物的化学成分确定的营养培养基组成。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述hpc具有cd34+表型。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述hpc通过包括将所述hpc分化为共同淋巴样祖细胞(clp)以及将所述clp分化为祖t细胞的方法来分化。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述hpc群是在体外由诱导多能干细胞(ipsc)产生的。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述方法包括提供ipsc群以及将所述ipsc分化为hpc群。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述祖t细胞具有cd5+、cd7+表型。
10.一种用于扩增祖t细胞的方法，其包括：
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物的存在增加了群体中所述祖t细胞的增殖。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，其中所述祖t细胞的扩增持续至少21天。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物为取代的嘧啶并[4，5-b]吲哚。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物为4-(3-哌啶-1-基丙基氨基)-9h-嘧啶并[4，5-b]吲哚-7-甲酸甲酯。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物为(1r，4r)-n1-(2-苄基-7-(2-甲基-2h-四唑-5-基)-9h-嘧啶并[4，5-b]吲哚-4-基)环己烷-1,4-二二胺。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述嘧啶并吲哚化合物以小于5μm的浓度存在。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述方法还包括将编码αβtcr的异源核酸引入所述ipsc、hpc或祖t细胞中。
18.根据权利要求17所述的方法，其中编码所述αβ tcr的所述异源核酸包含在表达载体中。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述表达载体是慢病毒载体。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的方法，其中所述αβ t...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨政道，
申请(专利权)人：艾达普特免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：
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