T细胞受体制造技术

本发明专利技术涉及T细胞受体。本发明专利技术的TCR显示了对于该MAGE表位的优异的特异性谱。还提供了编码TCR的核酸、工程化以提呈TCR的细胞、携带编码TCR的表达载体的细胞以及包含本发明专利技术的TCR、核酸或细胞的药物组合物。核酸或细胞的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
T细胞受体
[0001]本申请是2017年4月10日提交的中国专利申请《T细胞受体》(申请号201780031710.2)的分案申请。


[0002]本专利技术涉及T细胞受体(TCR)，其结合衍生自黑素瘤相关抗原(MAGE)A4蛋白(氨基酸230
‑
239)的HLA
‑
A*0201限制性的十肽GVYDGREHTV。本专利技术的TCR显示了对于该MAGE表位的优异的特异性谱。

技术介绍

[0003]癌症睾丸抗原(CTA)是由约140个基因编码的肿瘤相关抗原(TAA)的亚类。这些抗原的表达限制于免疫豁免部位，如睾丸、胎盘和胎儿卵巢；它们通常不在其它组织中表达。已经在恶性肿瘤中观察到这些基因的表达。CTA的免疫原性导致在许多实体瘤中靶向这些抗原的癌症疫苗的广泛开发。在这一大类TAA中，黑素瘤相关抗原(MAGE)已成为癌症免疫疗法的有希望的候选物。
[0004]作为多基因家族的成员，已经报道了超过30种癌症睾丸(CT)基因，其被组织入染色体X上的基因簇(CT
‑
X抗原)。CT基因簇位于Xq24和Xq28之间，并且包括基因家族如MAGE和NY
‑
ESO
‑
1。I型MAGE基因簇是被最广泛表征的，包括MAGE
‑
A、MAGE
‑
B和MAGE
‑
C家族。MAGE
‑
A蛋白由12种不同的MAGE
‑
A基因家族成员(MAGE
‑
>A1至MAGE
‑
A12)编码，并由保守的165
‑
171个氨基酸碱基定义，其被称为MAGE同源结构域(MHD)。MHD对应于所有MAGE
‑
A家族成员共有氨基酸的唯一区域。
[0005]T细胞识别以及与细胞表面分子和肽的复合物相互作用，所述细胞表面分子称为人白细胞抗原(“HLA”)，或主要组织相容性复合物(“MHC”)。肽衍生自较大的分子，其由还提呈HLA/MHC分子的细胞加工。T细胞和HLA/肽复合物的相互作用受到限制，需要T细胞对HLA分子和肽的特定组合具有特异性。如果不存在特异性的T细胞，即使其伴侣复合体存在，也没有T细胞响应。类似地，如果不存在特异性复合物但存在T细胞，则没有响应。该机制参与免疫系统对感染、自身免疫疾病的响应以及对异常(如肿瘤)的响应。
[0006]一些MAGE基因家族蛋白(MAGE
‑
A至MAGE
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C家族)仅在生殖细胞和癌症中表达。其它(MAGE
‑
D至MAGE
‑
H)在正常组织中广泛表达。所有这些MAGE蛋白家族具有与其它MAGE蛋白的序列紧密匹配的同源区，并且包含在免疫识别中展示为HLA/肽复合物的肽。因此，重要的是选择针对期望的MAGE肽/HLA
‑
A2抗原高度特异性的TCR临床候选物。
[0007]MAGE A4是MAGE A基因家族的CTA成员。虽然认为它可能在胚胎发育中起作用，但功能未知。在肿瘤发病机理中，它似乎参与肿瘤转化或肿瘤进展的方面。MAGE A4涉及大量肿瘤，包括精原细胞瘤、先天性角化不良、黑素瘤、肝细胞癌、肾细胞癌、胰腺癌、肺癌、结直肠癌和乳癌。肽GVYDGREHTV(SEQ ID No：1)对应于已知的MAGE
‑
A4蛋白的氨基酸残基数230
‑
239。
[0008]MAGE B2是MAGE B基因家族的CTA。MAGE B2在睾丸和胎盘中以及在不同组织学类
TRAC和TRBC命名法定义。
[0019]β链多变区在IMGT命名法中通过缩写TRBD指代，并且如所提及的，串联的TRBD/TRBJ区通常一起被认为是连接区。
[0020]αβTCR的α和β链一般被认为各自具有两个“结构域”，即可变结构域和恒定结构域。可变结构域由可变区和连接区的连接组成。在本说明书和权利要求书中，术语“TCRα可变结构域”因此是指TRAV和TRAJ区的串联，术语TCRα恒定结构域指细胞外TRAC区或C
‑
末端截短的TRAC序列。同样，术语“TCRβ可变结构域”是指TRBV和TRBD/TRBJ区的串联，术语TCRβ恒定结构域指细胞外TRBC区或C末端截短的TRBC序列。
[0021]由IMGT命名法定义的独特序列是众所周知的，并且对于在TCR领域工作的人员是可得到的。例如，它们可以在IMGT公共数据库中找到。“T cell Receptor Factsbook”，(2001)LeFranc和LeFranc，Academic出版社，ISBN 0
‑
12
‑
441352
‑
8也公开了由IMGT命名法定义的序列，但由于其公开日期和随后的时滞，其中的信息有时需要通过参考IMGT数据库来确认。
[0022]根据本专利技术的一种TCR包含SEQ ID No：3所示的α链细胞外结构域(TRAV10+TRAC)和SEQ ID No：4所示的β链细胞外结构域(TRBV24
‑
1+TRBC
‑
2)。术语“亲本TCR”、“亲本MAGE
‑
A4 TCR”在本文中同义使用，用以指包含分别为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的细胞外α和β链的该TCR。期望提供相对于亲本TCR而言突变或修饰的TCR，其与亲本TCR相比对肽
‑
HLA复合物具有更高的亲和力和/或更慢的解离速率。
[0023]为了提供了一种所述突变或修饰的TCR的结合谱可以与其进行比较的参照TCR，使用根据本专利技术的可溶的TCR是方便的，所述可溶的TCR具有SEQ ID No：3中给出的亲本MAGE
‑
A4 TCRα链的细胞外序列和SEQ ID No：4中给出的亲本MAGE
‑
A4 TCRβ链的细胞外序列。该TCR在本文中称为“参照TCR”或“参照MAGE
‑
A4 TCR”。注意，SEQ ID No：5包含SEQ ID No：3的亲本α链细胞外序列，并且C162已经取代T162(即TRAC的T48)。同样，SEQ ID No：6是SEQ ID No：4的亲本β链细胞外序列，并且C169已经取代S169(即TRBC2的S57)，A187已经取代C187并且D201已经取代N201。相对于亲本α和β链细胞外序列的这些半胱氨酸取代使得能够形成链间二硫键，其稳定重折叠的可溶TCR，即通过重折叠细胞外α和β链形成的TCR。使用稳定的二硫键连接的可溶TCR作为参照TCR使得能够更方便地评估结合亲和力和结合半衰期。本专利技术的TCR可以包含上述突变。
[0024]本专利技术的TCR可以是非天然存在的和/或纯化的和/或工程化的。相对于亲本TCR，本专利技术的TCR可以具有在α链可变结构域和/或β链可变结构域中存在的多于一个突变。“工程化TCR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种T细胞受体(TCR)，其具有结合与HLA
‑
A*0201复合的GVYDGREHTV(SEQ ID No：1)的特性，当可溶形式的TCR在25℃和pH为7.1
‑
7.5使用表面等离子体共振测量时，具有约0.05μM至约20.0μM的解离常数，并且所述T细胞受体对与HLA
‑
A*0201复合的SEQ ID No：1结合的选择性为与HLA
‑
A*0201复合的GVYDGEEHSV(SEQ ID No 2)结合的至少10倍，其中所述TCR包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域，并且其中所述TCR可变结构域至少与GVYDGREHTV(SEQ ID No：1)的残基V2、Y3和D4构成接触。2.根据权利要求1所述的TCR，其是α
‑
β异二聚体，具有α链TRAV10+TRAC恒定结构域序列和β链TRBV24
‑
1+TRBC
‑
2恒定结构域序列。3.根据权利要求1所述的TCR，其是类型Vα
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L
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Vβ、Vβ
‑
L
‑
Vα、Vα
‑
Cα
‑
L
‑
Vβ或Vα
‑
L
‑
Vβ
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Cβ的单链形式，其中Vα和Vβ分别是TCRα和TCRβ可变区，Cα和Cβ分别是TCRα和TCRβ恒定区，L是接头序列。4.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其与可检测标记、治疗剂或PK修饰部分结合。5.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其中，α链可变结构域包含与SEQ ID No：3的氨基酸残基1
‑
105的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，并且具有以下突变：M4V或L其中参考SEQ ID No：3中所示的编号，和/或β链可变结构域包含与SEQ IDNo：4的氨基酸残基1
‑
105的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，并且具有以下突变中的至少一种：N10E其中参考SEQ ID No：4中所示的编号。6.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其中α链可变结构域包含SEQ IDNO：3或SEQ ID No：5或SEQ ID NO：7至8的氨基酸残基1
‑
105的氨基酸序列，或者包含氨基酸序列，其中其氨基酸残基1
‑
27、34
‑
47和54
‑
90分别与SEQ ID No：3或SEQ ID No：5或SEQ ID NO：7至8的氨基酸残基1
‑
27、34
‑
47和54
‑
90的序列具有至少90％或95％的同一性，以及其中氨基酸残基28
‑
34、48
‑
53和91
‑
105分别与SEQ ID No：3或SEQ ID No：5或SEQ ID NO：7至8的氨基酸残基28
‑
33、48
‑
53和91
‑
105的序列具有至少90％或95％的同一性。7.根据权利要求1
‑
7中任一项所述的TCR，其中α链可变结构域包含SEQ IDNo：7或SEQ ID No：8的氨基酸残基1
‑
105的氨基酸序列，或者包含氨基酸序列，其中其氨基酸残基1
‑
27、34
‑
47和55
‑
89分别与SEQ ID No：7或SEQ ID No：8的氨基酸残基1
‑
27、34
‑
47和55
‑
89的序列具有至少90％或95％的同一性，以及其中氨基酸残基28
‑
33、48
‑
53和91
‑
105分别与SEQ ID No：7或SEQ ID No：8的氨基酸残基28
‑
33、48
‑
53和91
‑
105的序列具有至少90％或95％的同一性。8.根据前述权利要求中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：艾达普特免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：