针对AFP的高亲和力TCR制造技术

本发明专利技术提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合TSSELMAITR

【技术实现步骤摘要】
针对AFP的高亲和力TCR


[0001]本专利技术涉及生物
，更具体地涉及能够识别衍生自AFP蛋白多肽的T细胞受体(T cell receptor,TCR)。本专利技术还涉及所述受体的制备和用途。

技术介绍

[0002]仅仅有两种类型的分子能够以特异性的方式识别抗原。其中一种是免疫球蛋白或抗体；另一种是T细胞受体(TCR)，它是由α链/β链或者γ链/δ链以异二聚体形式存在的细胞膜表面的糖蛋白。免疫系统的TCR总谱的组成是在胸腺中通过V(D)J重组，然后进行阳性和阴性选择而产生的。在外周环境中，TCR介导了T细胞对主组织相容性复合体
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肽复合物(pMHC)的特异性识别，因此其对免疫系统的细胞免疫功能是至关重要的。
[0003]TCR是呈递在主组织相容性复合体(MHC)上的特异性抗原肽的唯一受体，这种外源肽或内源肽可能会是细胞出现异常的唯一迹象。在免疫系统中，通过抗原特异性的TCR与pMHC复合物的结合引发T细胞与抗原呈递细胞(APC)直接的物理接触，然后T细胞及APC两者的其他细胞膜表面分子就发生相互作用，这就引起了一系列后续的细胞信号传递和其他生理反应，从而使得不同抗原特异性的T细胞对其靶细胞发挥免疫效应。
[0004]与TCR相对应的MHC I类和II类分子配体也是免疫球蛋白超家族的蛋白质但对于抗原的呈递具有特异性，不同的个体有不同的MHC，从而能呈递一种蛋白抗原中不同的短肽到各自的APC细胞表面。人类的MHC通常称为HLA基因或HLA复合体。
[0005]AFP(αFetoprotein)也称α胎蛋白，是胚胎发育过程中表达的一种蛋白，是胚胎血清的主要成分。在发育过程中，AFP在卵黄囊及肝脏中有比较高的表达水平，随后被抑制。在肝细胞癌中，AFP的表达被激活(Butterfield et al.JImmunol.,2001,Apr 15；166(8):5300
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8)。AFP在细胞内生成后被降解成小分子多肽，并与MHC(主组织相容性复合体)分子结合形成复合物，被呈递到细胞表面。TSSELMAITR(SEQ ID NO:9)是衍生自AFP抗原的短肽，是AFP相关疾病治疗的一种靶标。
[0006]因此，TSSELMAITR
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HLA A1101复合物提供了一种TCR可靶向肿瘤细胞的标记。能够结合TSSELMAITR
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HLA A1101复合物的TCR对肿瘤的治疗具有很高的应用价值。例如，能够靶向该肿瘤细胞标记的TCR可用于将细胞毒性剂或免疫刺激剂递送到靶细胞，或被转化入T细胞，使表达该TCR的T细胞能够破坏肿瘤细胞，以便在被称为过继免疫治疗的治疗过程中给予患者。对于前一目的，理想的TCR是具有较高的亲和力的，从而使该TCR能够长期驻留在所靶向的细胞上面。对于后一目的，则优选使用中等亲和力的TCR。因此，本领域技术人员致力于开发可用于满足不同目的的靶向肿瘤细胞标记的TCR。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种对TSSELMAITR
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HLA A1101复合物具有较高亲和力的TCR。
[0008]本专利技术的再一目的是提供一种上述类型TCR的制备方法及上述类型TCR的用途。
[0009]本专利技术的第一方面，提供了一种包含了α链可变域和β链可变域的T细胞受体(TCR)，其具有结合TSSELMAITR
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HLA A1101复合物的活性，并且所述TCRα链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列有至少90％的序列同源性和所述TCRβ链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列有至少90％的序列同源性。
[0010]在一优选例中，所述TCRα链可变域的氨基酸序列和所述TCRβ链可变域的氨基酸序列不同时为野生型TCRα链可变域的氨基酸序列和野生型TCRβ链可变域的氨基酸序列。
[0011]在进一步的优选例中，所述TCRα链可变域的氨基酸序列不是SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，和/或所述TCRβ链可变域的氨基酸序列不是SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
[0012]在另一优选例中，所述TCR的α链可变域包含与SEQ ID NO:1所示的序列有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同源性的氨基酸序列，或相对于SEQ ID NO:1所示的序列，有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸残基插入、缺失、替换或其组合。
[0013]在另一优选例中，所述TCR的β链可变域为与SEQ ID NO:2所示的序列有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同源性的氨基酸序列，或相对于SEQ ID NO:2所示的序列，有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸残基插入、缺失、替换或其组合。
[0014]在另一优选例中，所述TCRα链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列有至少95％的序列同源性。
[0015]在另一优选例中，所述TCRα链可变域中CDR1α为：DRGSQS，和CDR2α为IYSNGD。
[0016]在另一优选例中，所述TCRα链可变域的CDR3α选自AVKVGGSSHLT和AVKVGGNSHLT。
[0017]在另一优选例中，所述TCRβ链可变域的3个CDR为：CDR1β：SEHNR；CDR2β：FQNEAQ；和CDR3β：ASSPVGEQY。
[0018]在另一优选例中，所述TCRβ链可变域的氨基酸序列为SEQ ID NO:2。
[0019]在另一优选例中，所述TCRα链可变域的氨基酸突变个数为2
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3个，优选地为2个。
[0020]在另一优选例中，所述TCRα链可变域的氨基酸突变位点为CDR3α的第7位和第9位。
[0021]在另一优选例中，所述TCRα链可变域的3个CDR区(互补决定区)的基准序列如下，
[0022]CDR1α：DRGSQS
[0023]CDR2α：IYSNGD
[0024]CDR3α：AVKVGGYSTLT，并且CDR3α含有至少一个下列突变：
[0025]突变前的残基突变后的残基CDR3α的第7位YS或N或DCDR3α的第9位TH或W
[0026]在另一优选例中，所述CDR3α中氨基酸突变包含：
[0027]突变前的残基突变后的残基CDR3α的第9位TH
[0028]在另一优选例中，所述TCR与TSSELMAITR
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HLA A1101复合物的亲和力是野生型TCR的至少4倍。
[0029]在另一优选例中，所述TCR在SEQ ID NO：1所示的α链可变域中发生突变，所述突变选自V93I、Y96S/N/D、S97T和T98H/W中的一组或几组，其中氨基酸残基编号采用SEQ ID NO:
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种T细胞受体(TCR)，所述T细胞受体包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，其特征在于，其具有结合TSSELMAITR
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HLA A1101复合物的活性，并且所述TCRα链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列有至少90％的序列同源性和所述TCRβ链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列有至少90％的序列同源性。2.一种多价TCR复合物，其特征在于，包含至少两个TCR分子，并且其中的至少一个TCR分子为权利要求1所述的TCR。3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1中所述的TCR的核酸序列或其互补序列。4.一种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求3中所述的核酸分子。5.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞中含有权利要求4中所述的载体或染色体中整合有外源的权利要求3中所述的核酸分子。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：战凯，罗俊峰，刘敏，唐先青，
申请(专利权)人：香雪生命科学技术广东有限公司，
类型：发明
国别省市：