一种识别MAGE-A4抗原的高亲和力TCR及其序列和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种识别MAGE

【技术实现步骤摘要】
一种识别MAGE
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A4抗原的高亲和力TCR及其序列和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，更具体地涉及能够识别衍生自MAGE
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A4蛋白多肽的T细胞受体(T cell receptor，TCR)。本专利技术还涉及所述受体的制备和用途。

技术介绍

[0002]仅仅有两种类型的分子能够以特异性的方式识别抗原。其中一种是免疫球蛋白或抗体；另一种是T细胞受体(TCR)，它是由α链/β链或者γ链/δ链以异二聚体形式存在的细胞膜表面的糖蛋白。免疫系统的TCR总谱的组成是在胸腺中通过V(D)J重组，然后进行阳性和阴性选择而产生的。在外周环境中，TCR介导了T细胞对主组织相容性复合体
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肽复合物(pMHC)的特异性识别，因此其对免疫系统的细胞免疫功能是至关重要的。
[0003]TCR是呈递在主组织相容性复合体(MHC)上的特异性抗原肽的唯一受体，这种外源肽或内源肽可能会是细胞出现异常的唯一迹象。在免疫系统中，通过抗原特异性的TCR与pMHC复合物的结合引发T细胞与抗原呈递细胞(APC)直接的物理接触，然后T细胞及APC两者的其他细胞膜表面分子就发生相互作用，引起了一系列后续的细胞信号传递和其他生理反应，从而使得不同抗原特异性的T细胞对其靶细胞发挥免疫效应。
[0004]与TCR相对应的MHC I类和II类分子配体也是免疫球蛋白超家族的蛋白质但对于抗原的呈递具有特异性，不同的个体有不同的MHC，从而能呈递一种蛋白抗原中不同的短肽到各自的APC细胞表面。人类的MHC通常称为HLA基因或HLA复合体。
[0005]MAGE蛋白家族具有与其他MAGE蛋白的序列紧密匹配的同源区，并且包含在免疫识别中展现为HLA/肽复合物的肽。一些MAGE基因家族蛋白(MAGE
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A至MAGE
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C家族)仅在生殖细胞和癌症中表达；其他(MAGE
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D至MAGE
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H)在正常组织中广泛表达。MAGE
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A4作为一种内源性肿瘤抗原，在细胞内生成后被降解成小分子多肽，并与MHC(主组织相容性复合体)分子结合形成复合物，被呈递到细胞表面。研究显示，GVYDGREHTV是衍生自MAGE
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A4的短肽。MAGE
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A4蛋白在多种肿瘤类型中均有表达，包括黑色素瘤，以及其他固体肿瘤如胃癌、肺癌、食道癌、膀胱癌、头颈部鳞状细胞癌等。GLYDGREHSV是衍生于MAGE
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A8的短肽，与衍生自MAGE
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A4的短肽GVYDGREHTV具有高度同一性。对于上述疾病的治疗，可以采用化疗和放射性治疗等方法，但都会对自身的正常细胞造成损害。
[0006]因此，GVYDGREHTV
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HLA A0201复合物提供了一种TCR可靶向肿瘤细胞的标记。能够结合GVYDGREHTV
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HLA A0201复合物的TCR对肿瘤的治疗具有很高的应用价值。例如，能够靶向该肿瘤细胞标记的TCR可用于将细胞毒性剂或免疫刺激剂递送到靶细胞，或被转化入T细胞，使表达该TCR的T细胞能够破坏肿瘤细胞，以便在被称为过继免疫治疗的治疗过程中给予患者。对于前一目的，理想的TCR是具有较高的亲和力的，从而使该TCR能够长期驻留在所靶向的细胞上面。对于后一目的，则优选使用中等亲和力的TCR。因此，本领域技术人员致力于开发可用于满足不同目的的靶向肿瘤细胞标记的TCR。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种对GVYDGREHTV
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HLA A0201复合物具有较高亲和力的TCR。
[0008]本专利技术的再一目的是提供一种所述TCR的制备方法及所述TCR的用途。
[0009]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0010]本专利技术的第一方面，提供了一种包含了α链可变域和β链可变域的TCR，所述TCR具有结合GVYDGREHTV
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HLA A0201复合物的活性；
[0011]并且所述TCRα链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列有至少90％的序列同一性，和所述TCRβ链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列有至少90％的序列同一性。
[0012]SEQ ID NO.1：
[0013]GEDVEQSLFLSVREGDSSVINCTYTDSSSTYLYWYKQEPGAGLQLLTYIFSNMDMKQDQRLTVLLNKKDKHLSLRIADTQTGDSAIYFCAEQSFGNEKLTFGTGTRLTIIP。
[0014]SEQ ID NO.2：
[0015]NAGVTQTPKFRVLKTGQSMTLLCAQDMNHEYMYWYRQDPGMGLRLIHYSVGEGTTAKGEVPDGYNVSRLKKQNFLLGLESAAPSQTSVYFCASSLGRAYEQYFGPGTRLTVT。
[0016]在一优选例中，所述TCRα链可变域的氨基酸序列和所述TCRβ链可变域的氨基酸序列不同时为野生型TCRα链可变域的氨基酸序列和野生型TCRβ链可变域的氨基酸序列。
[0017]在进一步的优选例中，所述TCRα链可变域的氨基酸序列不是SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
[0018]在另一优选例中，所述TCR的α链可变域包含与SEQ ID NO.1所示的序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，或相对于SEQ ID NO.1所示的序列，有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸残基插入、缺失、替换或其组合。
[0019]在另一优选例中，所述TCR的β链可变域为与SEQ ID NO.2所示的序列有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的氨基酸序列，或相对于SEQ ID NO.2所示的序列，有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸残基插入、缺失、替换或其组合。
[0020]在另一优选例中，所述TCRα链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列有至少95％的序列同一性，和所述TCRβ链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列有至少95％的序列同一性。
[0021]在另一优选例中，所述TCR还具有结合GLYDGREHSV
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HLA A0201复合物的活性。
[0022]在另一优选例中，所述TCRα链可变域中CDR1α为：DSSSTY(SEQ ID NO.37)，和CDR2α为IFSNMDM(SEQ ID NO.38)。
[0023]在另一优选例中，所述TCRα链可变域的CDR3α选自AEHTKQNEKLT(SEQ ID NO.39)、AWSQFGNEKLT(SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TCR，所述TCR包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，其特征在于，所述TCR具有结合GVYDGREHTV
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HLA A0201复合物的活性；并且所述TCRα链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列有至少90％的序列同一性，和所述TCRβ链可变域的氨基酸序列与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列有至少90％的序列同一性。2.一种多价TCR复合物，其特征在于，所述多价TCR复合物包含至少两个的TCR，并且其中的至少一个TCR为权利要求1所述的TCR。3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1所述的TCR的核苷酸序列或权利要求1所述的TCR的核苷酸序列的互补序列。4.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求3所述的核酸分子。5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞中含有权利要求4所述的载体，和/或所述宿主细胞的染色体中整合有外源的权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：战凯，黄金花，郑文静，殷倩霞，唐先青，
申请(专利权)人：香雪生命科学技术广东有限公司，
类型：发明
国别省市：