一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，具体通过将奥利万星关键中间体A82846B从发酵液中分离后，先进行调节pH，然后通过大孔吸附树脂纯化，再通过反相色谱纯化，最后通过结晶，得到高纯度的A82846B。本发明专利技术采用的方法，操作简单，有机溶剂用量少，大大减少了废液的产生；并且克服了现有技术中阳离子大孔吸附树脂吸附效率低，漏吸附导致产品收率降低的缺陷，适合工业化生产。

Method for preparing high-purity star key intermediate A82846B

The present invention provides a method for preparing high purity oritavancin key intermediate A82846B, specified by the oritavancin key intermediate A82846B isolated from fermentation broth, first adjust pH, then by macroporous resin, then purified by reversed-phase chromatography, the crystallization of high purity A82846B. The operation method, the invention has the advantages of simple, less organic solvent consumption, greatly reducing the waste liquid; and overcomes the existing technology of macroporous cation adsorption resin adsorption leads to low efficiency, leakage of defective products reduces the yield, suitable for industrialized production.

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法
本专利技术属于工业微生物
，更具体的涉及一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法。
技术介绍
糖肽抗生素是由微生物产生，或由微生物产生并进行部分修饰的一大类物质。在上世纪九十年代发现的糖肽中，包括称作A82846A（也称作ereomomycin）、A82846B（也称作氯东方霉素chloroorienticinA）、A82846C（也称作东方霉素orienticinC）及东方霉素A。已经对天然存在的糖肽进行了多种修饰，其中一种是对糖肽中的反应性胺的还原烷基化的修饰。奥利万星(Oritavancin)，是在第一代糖肽抗生素万古霉素的基础上开发的第二代糖肽抗生素，其作用机制是通过阻断肽聚糖生物合成时转糖苷作用抑制细菌细胞壁的形成。故该类化合物对细菌细胞具有高度的特异性，能迅速杀灭细菌而对人体正常细胞影响较小，因而疗效好，安全性高。2014年8月，FDA批准奥利万星用于由敏感革兰氏阳性菌导致的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染成人患者的治疗。奥利万星是一种单剂量治疗方案的抗生素，具有良好的市场前景。A82846B，是合成奥利万星的关键中间体，可由东方诺卡菌(Nocardiaorientalis)发酵产生。除A82846B外，东方诺卡菌发酵时还会产生两种主要成分A82846A和A82846C，它们的结构式如下：。由式可知，三种物质结构非常接近，分离纯化工作比较困难。目前，关于奥利万星关键中间体A82846B提取分离的文献报道较少。欧洲专利EP0280570A2及美国专利US4845194公开了三种物质的分离方法，其中A82846B的分离方法为：将发酵液通过阳离子（NH4+）交换树脂进行初步富集，然后通过制备性高效液相色谱柱分离，最后经过HP20ss树脂精制。专利中主要进行了此3步纯化，后面的两个步骤的收率仅为29%，总收率更低。CN87106483A也公开了一种A82846的回收方法，包括将其吸附于阳离子交换树脂上，如DowexXF5-43278，Dowex-50或大网状树脂IR-120；再用合适的溶剂，如稀NH4OH溶液，将活性物质从树脂上洗脱下来，浓缩后将其吸附在一个大网状树脂上，如DiaionHP-20和大网状树脂XAD-4上，然后用合适的溶剂洗脱，得到A82846，并公开了，采用同样的方法步骤分离得到个别组分A82846A,A82846B,A82846C。该方法多次从树脂上洗脱分离，操作方法繁琐，有机溶剂用量大，需要处理大量废液。综上所述，现有技术普遍存在如下缺点：1）总收率低，对工业生产效率产生影响；2）需要多步树脂分离等工艺，增加了操作步骤和生产成本，且需要更多的有机溶剂，对操作人员的身体健康构成威胁，且对环境造成污染，不适合工业化大规模生产；3）现有技术中公开的方法均涉及采用采用阳离子交换树脂进行吸附，专利技术人通过大量多次试验研究发现，阳离子树脂的吸附效率非常低，出现吸附不上去，漏吸附现象，导致收率降低；并且，色素无法除去。因此，本领域急需找到一种高纯度的奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，降低生产成本，简化操作步骤，降低环境污染，提高收率，满足工业化生产的需求。
技术实现思路
为了达到上述目的，本专利技术提供了一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，包括以下步骤：一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，包括以下步骤：1）将发酵液pH为调节至10~11，然后固液分离得到滤液；2）将滤液pH调节至9.0-9.5后导入大孔吸附树脂进行富集；3）将步骤2）的树脂净化，然后用解吸液进行解吸并收集组分，得到A82846B解吸混合液；4）将A82846B解吸混合液进行浓缩后，进行反相填料层析分离，用极性溶剂与盐水的混合液进行解吸；5）将层析分离得到的解吸液浓缩；6）将浓缩液搅拌结晶，过滤并干燥，得到高纯度的奥利万星关键中间体A82846B产品。其中，步骤6）中，先向浓缩液中加入NaCl，然后搅拌，低温结晶；优选所述NaCl用量为20-30%（m/v），所述的低温为2-8℃；更优选所述NaCl用量为24-26%（m/v），所述的低温优选为4-6℃。步骤1）中优选，将发酵液pH调节至10-10.5，步骤2）中将滤液pH调节至9.2~9.5；其中pH调节剂为本领域常规的酸碱调节剂，如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、氨水等。所述的固液分离方法优选为离心、板框压滤、或减压抽滤。步骤2）中所述的大孔吸附树脂独立的选自弱极性或非极性树脂；优选为LX18、XAD1600、HP20、或HZ816，其吸附量为5-10g/L，优选6-8g/L。步骤3）中所述的树脂净化是采用pH为7-9的纯化水净化树脂柱，优选用量为2-4BV。步骤3）中所述的解吸液为0.5%-1.5%（v/v）醋酸水溶液，优选解析液为1%醋酸水溶液，其用量为2-5BV。步骤4）中所述的浓缩方式为纳滤，浓缩至浓度为20-50mg/ml。步骤4）中所述的反相填料为采用聚苯乙烯或聚丙烯酸酯及其衍生物制备的聚合物微球、ODSC18或Fraclite800；所述的解吸液，以解析液总体积计算，盐水为0.5%-1%（w/v）NH4H2PO4；极性溶剂为甲醇或乙腈，其浓度为2-10%（v/v），优选甲醇或乙腈浓度为2-5%（v/v），解吸液用量为3-5BV。上述方法中，步骤6）过滤后得到的固体干燥方法优选为真空干燥，温度控制在30-45℃，干燥时间为4~16h。上述方法中，进一步优选，还包括，将得到奥利万星关键中间体A82846B进行脱盐处理，以方便用于制备奥利万星；所述的脱盐方法包括，将上述方法中纯化得到的奥利万星关键中间体A82846B采用甲醇、乙醇或异丙醇溶液进行结晶，脱去A82846B的盐，以用于后续制备奥利万星；其中所述甲醇、乙醇或异丙醇溶液优选浓度不低于75%的甲醇、乙醇或异丙醇溶液，更优选80%，83%，85%，90%，95%或99%的乙醇；或者，在步骤6）之前，将步骤4）层析分离得到的解吸液导入大孔吸附树脂进行脱盐处理，用树脂净化，用10-40%（v/v）的甲醇或乙腈水溶液进行解吸，将得到的脱盐解析液浓缩；其中，所述大孔吸附树脂选自LX18、XAD1600、HP20和HZ816；所述的树脂净化是采用pH为7-9的纯化水净化树脂柱。相对于现有技术，本专利技术的主要优点在于：1、本专利技术提供了一种成本低廉的纯化奥利万星关键中间体A82846B的新方法；2、本专利技术提供的方法具有纯化条件温和、产品收率高、产品纯度高；工艺步骤简化，溶剂用量大大减少，对环境污染小等特点，在较大程度上简化了工艺操作，并减轻对设备的要求，降低了生产成本；3、本专利技术提供的方法能够得到较稳定的目标产物，有利于终产品的质量控制，适宜于工业化生产；4、本专利技术提供的方法提取的目标产物——关键中间体A82846B，完全可以满足向新型糖肽类化合物奥利万星合成的要求，便于进行规模化合成奥利万星；5、本专利技术提供的技术方案在上大孔吸附树脂前先进行pH调节并采用弱极性或非极性树脂特别是LX18、XAD1600、HP20、或HZ816替代现有技术中阳离子交换树脂，克服了大孔吸附树脂吸附效率低，漏吸附导致产品收率降低的缺本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，包括以下步骤：1）将发酵液pH为调节至10~11，然后固液分离得到滤液；2）将滤液pH调节至9.0‑9.5后导入大孔吸附树脂进行富集；3）将步骤2）的树脂净化，然后用解吸液进行解吸并收集组分，得到A82846B解吸混合液；4）将A82846B解吸混合液进行浓缩后，进行反相填料层析分离，用极性溶剂与盐水的混合液进行解吸；5）将层析分离得到的解吸液浓缩；6）将浓缩液搅拌结晶，过滤并干燥，得到高纯度的奥利万星关键中间体A82846B产品。

【技术特征摘要】
1.一种高纯度奥利万星关键中间体A82846B的制备方法，包括以下步骤：1）将发酵液pH为调节至10~11，然后固液分离得到滤液；2）将滤液pH调节至9.0-9.5后导入大孔吸附树脂进行富集；3）将步骤2）的树脂净化，然后用解吸液进行解吸并收集组分，得到A82846B解吸混合液；4）将A82846B解吸混合液进行浓缩后，进行反相填料层析分离，用极性溶剂与盐水的混合液进行解吸；5）将层析分离得到的解吸液浓缩；6）将浓缩液搅拌结晶，过滤并干燥，得到高纯度的奥利万星关键中间体A82846B产品。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤6）中，先向浓缩液中加入NaCl，然后搅拌，低温结晶。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）中将发酵液pH调节至10-10.5，步骤2）中将滤液pH调节至9.2~9.5。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）中所述的固液分离方法为离心、板框压滤、或减压抽滤。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2）中所述的大孔吸附树脂独立的选自LX18、XAD1600、HP20或HZ816。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3）中所述的树脂净化是采用pH为7-9的纯化水净化树脂柱。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨久林，郭明，刘省伟，张宏福，唐恒，肖红亮，徐星灿，袁建栋，
申请(专利权)人：重庆乾泰生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50