高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法技术

本发明专利技术涉及一种高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法，包括将鸡胸肌组织剪成肉糜，用I型胶原酶消化后离心；吸取上层成熟肌内脂肪细胞，接种于培养瓶，去分化处理，最终获得鸡前体肌内脂肪细胞；将离心后下层细胞沉淀重悬，差速贴壁纯化细胞，得到高纯度的肌卫星细胞，将前体肌内脂肪细胞和肌卫星细胞分别接种于transwell小室或配套的培养板，构建共培养体系。该发明专利技术方法突破了一直以来无法单独分离纯化鸡前体肌内脂肪细胞的技术瓶颈，可应用于量化模拟鸡肌肉组织，体外精准研究鸡肌内脂肪细胞与肌细胞之间的相互影响关系及分子调控机理，以及相关营养素或药物的筛选研发。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞学领域，具体涉及鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化，并构建鸡前体肌内脂肪细胞和肌卫星细胞共培养体系的方法。
技术介绍
动物脂肪主要分布在内脏周围、皮下和肌肉等组织部位。其中，肌内脂肪(Intramuscularfat,IMF)是指沉积于肌内膜或肌束膜内外的脂质，可以影响肌肉品质(嫩度、口感、风味)。在一定范围内，肌内脂肪的含量越高，肉的品质就越好；然而，鸡腹部脂肪蓄积过多会降低饲料的利用效率，也会额外增加加工费用，并造成一定的环境污染。因此，肌内脂肪和腹脂沉积涉及肉品质与生产效率两个指标，其均衡调控是肉鸡生产中重要科学命题。高肌内脂肪、低腹脂的体脂分布是优质肉鸡胴体性状改良的理想目标之一。与猪、牛、羊等家畜不同，鸡肌内脂肪组织分布不均匀，一般不可见，无法直接采集纯的脂肪组织；另外，由于从肌肉组织分离前体肌内脂肪细胞和肌卫星细胞的密度差异不大，只能获得细胞的混合物。所以一直以来无法有效分离高纯度的前体肌内脂肪细胞。这一技术难题极大地限制了体外开展针对鸡肌内脂肪细胞、鸡肌内脂肪细胞与肌细胞之间的相互影响关系及分子调控机理，以及相关营养素或药物的筛选研发等方面的研究工作。过氧本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌条件下取材鸡胸肌组织，去掉可见血管和筋膜，剪至1mm3大小肉糜，加入含1％双抗的PBS缓冲液静置，待组织样品沉淀后，弃上层液和漂浮组织，加入0.1％I型胶原酶消化后，再加入与反应体系等体积的含10％FBS的DMEM/F12培养基中止消化；(2)将细胞悬液过滤，收集滤液离心后，吸取上层成熟脂肪细胞，接种于细胞培养瓶中，使用含10％FBS的DMEM/F12培养基去分化状态下培养10‑14天；出现前脂肪细胞形态时，更换培养基，继续培养至前脂肪细胞长满培养瓶，得到高纯度的肌内前脂肪细胞；(3...

【技术特征摘要】
1.一种高纯度鸡前体肌内脂肪细胞的分离纯化及构建其与肌卫星细胞共培养体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌条件下取材鸡胸肌组织，去掉可见血管和筋膜，剪至1mm3大小肉糜，加入含1％双抗的PBS缓冲液静置，待组织样品沉淀后，弃上层液和漂浮组织，加入0.1％I型胶原酶消化后，再加入与反应体系等体积的含10％FBS的DMEM/F12培养基中止消化；(2)将细胞悬液过滤，收集滤液离心后，吸取上层成熟脂肪细胞，接种于细胞培养瓶中，使用含10％FBS的DMEM/F12培养基去分化状态下培养10-14天；出现前脂肪细胞形态时，更换培养基，继续培养至前脂肪细胞长满培养瓶，得到高纯度的肌内前脂肪细胞；(3)将步骤(2)离心后所得细胞沉淀用含10％FBS的DMEM/F12培养基重悬，再离心、弃上清，再次重悬细胞并接种于培养皿中，使用含10％FBS的DMEM/F12培养基培养；利用细胞差速贴壁法进一步筛选，得到纯化的肌卫星细胞；(4)将肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞分别接种于transwell小室或配套的培养板中，共同在DMEM/F12培养基中培养，即可获得高纯度的鸡前体脂肪细胞和肌卫星细胞的共培养体系。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)的鸡胸肌组织选自10-21日龄雏鸡。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中0.1％I型胶原酶的加入量为处理后的鸡胸肌组织体积的5-15倍，优选为9倍；和/或，所述消化温度为37-39℃，消化时间为30min-45min；优选地，所述消化温度为37℃、消化时间为30min。4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述细...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔焕先，文杰，赵桂苹，刘冉冉，郑麦青，李庆贺，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11