CDHR3作为肿瘤诊断标志物的应用制造技术

本发明专利技术涉及CDHR3作为肿瘤诊断标志物的应用，更具体的涉及CDHR3作为骨肉瘤诊断标志物、CDHR3激动剂在骨肉瘤治疗中的应用。骨肉瘤由于发病率低，没有被深入研究，目前骨肉瘤的分子标志物并不多。本发明专利技术对骨肉瘤病例样本进行高通量测序，结合生物信息学分析和分子生物学实验，挑选出与骨肉瘤密切相关的基因CDHR3，有望成为骨肉瘤诊断标志物，为其临床诊断提供参考，为骨肉瘤早期诊断提供临床基础。

Application of CDHR3 as a marker for tumor diagnosis

The present invention relates to the use of CDHR3 as a marker for tumor diagnosis, and more specifically to the use of CDHR3 as a diagnostic marker for osteosarcoma and an CDHR3 agonist in the treatment of osteosarcoma. Osteosarcoma is not studied intensively because of its low incidence, and there are not many molecular markers of osteosarcoma. The invention of high throughput sequencing of osteosarcoma samples, combined with bioinformatics analysis and molecular biology experiment, selected CDHR3 gene closely associated with osteosarcoma, is expected to become a diagnostic marker of osteosarcoma, and provide reference for the clinical diagnosis, and provide clinical basis for early diagnosis of osteosarcoma off.

【技术实现步骤摘要】
CDHR3作为肿瘤诊断标志物的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及CDHR3作为肿瘤诊断标志物的应用，更具体的涉及CDHR3作为骨肉瘤诊断标志物、CDHR3激动剂在骨肉瘤治疗中的应用。
技术介绍
CDHR3基因定位于染色体的7q22.3区域，是一种包含六个外钙黏蛋白结构域的跨膜蛋白，其可介导同源性细胞的黏附，参与细胞分化、细胞间相互作用等过程。研究表明其在极早期哮喘形成中起重要作用的基因，但还没有报道表明其与骨肉瘤相关。骨肉瘤是一种起源于骨间叶细胞的原发性恶性骨肿瘤，发病年龄多为8-25岁，社会危害性极大，其血行转移发生早且发生率高，进展迅速，80％的患者在确诊时己有微小转移灶。随着化学治疗、手术技术、骨重建等治疗方法的发展，5年总体生存率得到较大提高。但是，近年来骨肉瘤的治疗遇到瓶颈，尤其是在骨肉瘤早期转移上，即骨肉瘤的早期诊断成为临床亟待解决的问题。肿瘤标志物的研究使得骨肉瘤的早期诊断成为可能。肿瘤标志物的存在或量变可以提示肿瘤的性质，借以了解肿瘤的组织发生、细胞分化、细胞功能，以帮助肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗指导。不过由于骨肉瘤发病率低，约为0.3/万，导致样本收集困难，没有被深入研究，目前骨肉瘤的分子标志物并不多。本专利技术对骨肉瘤病例样本进行高通量测序，结合生物信息学分析和分子生物学实验，挑选出与骨肉瘤密切相关的基因CDHR3，CDHR3有望成为骨肉瘤诊断标志物，为其临床诊断提供参考，为骨肉瘤患者带来希望。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种骨肉瘤诊断制剂，该制剂检测CDHR3基因和/或CDHR3蛋白的表达。本专利技术的目的在于提供检测CDHR3基因或蛋白的制剂在制备骨肉瘤诊断试剂中的应用。进一步，骨肉瘤患病组中CDHR3基因或蛋白的表达水平与正常对照组织或者癌旁组织相比，表达水平低。进一步，检测CDHR3基因或蛋白在生物学样品中的表达水平是通过检测CDHR3部分或全部mRNA和/或检测编码CDHR3蛋白的部分或全部氨基酸序列进行。优选的，生物学样品为来源于患者的生物样品，包括细胞、组织等，可以是血液或者尿液等，优选为外周血。进一步，骨肉瘤诊断制剂采用荧光定量PCR试剂盒、基因芯片方法、测序方法检测骨肉瘤生物学样品中CDHR3基因的表达。优选的，所述的荧光定量PCR试剂盒中含有一对特异性扩增CDHR3基因的引物；所述的基因芯片中包括与CDHR3基因的核酸序列杂交的探针。更优选的，荧光定量PCR试剂盒内含有特异性检测CDHR3基因的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQIDNO.1，下游引物序列为SEQIDNO.2。荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。进一步，骨肉瘤诊断制剂采用免疫方法检测生物学样品中CDHR3蛋白的表达。优选的，免疫方法为ELISA检测和/或胶体金检测。进一步，检测CDHR3蛋白的ELISA法为使用ELISA检测试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的CDHR3单克隆抗体或多克隆抗体。进一步，ELISA检测试剂盒包括：包被CDHR3抗体的固相载体，酶标抗体，酶的底物，蛋白标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反应终止液等。进一步，胶体金检测采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一步，所述的胶体金检测试剂盒硝酸纤维素膜上的检测区(T)喷点有抗CDHR3抗体、质控区(C)喷点有免疫球蛋白IgG。酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。免疫胶体金检测技术：(1)免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。(2)免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。(3)斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。(4)胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。本专利技术的目的在于提供一种治疗骨肉瘤的制剂，所述制剂中含有促进CDHR3基因的转录或表达的试剂或化合物。进一步的，所述的CDHR3基因和/或基因的表达产物在骨肉瘤组织中低表达。本领域人员熟知促进基因及其表达产物的表达通常可以采用下述方法中的一种和/或几种：激活基因的启动子、激活基因表达的蛋白或因子、导入促进基因转录或表达的载体。优选的，治疗骨肉瘤的制剂中含有促进CDHR3基因的转录或表达的载体和/或激活CDHR3基因的启动子和/或激活CDHR3基因表达的蛋白或因子。本专利技术的目的在于提供上述治疗骨肉瘤的制剂在制备骨肉瘤治疗药物或试剂中的应用。本专利技术的药剂学上可接受的载体为在制剂时通常利用的载体，该载体包含乳糖(lactose)、右旋糖(dextrose)、蔗糖(sucrose)、山梨醇(sorbitol)、甘露醇(mannitol)、淀粉、阿拉伯橡胶、磷酸钙、藻酸盐(alginate)、凝胶(gelatin)、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、纤维素(cellulose)、水、糖浆、甲基纤维素(methylcellulose)、羟基苯甲酸甲酯(methylhydroxybenzoate)、丙基羟基苯甲酸丙酯(propylhydroxybenzoate)、滑石、硬脂酸镁(stearicacidmagnesium)及矿物油(mineraloil)等，但并非局限于此。本专利技术的药剂学可接受的载体除了上述成分以外还可以包含润滑剂、湿润剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂等。药剂学上许可的适合的载体和制剂详细记载于雷明登氏药学全书。本专利技术的药剂学组合物能通过口服或非口服进行给药，作为非口服给药时，能通过静脉内注射，鼻腔内注射，局部注射，脑室内注射，脊髓腔注射，皮下注射，腹腔注射，经皮给药等方式进行给本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种骨肉瘤诊断制剂，其特征在于，骨肉瘤诊断制剂检测CDHR3基因和/或蛋白的表达水平。

【技术特征摘要】
1.一种骨肉瘤诊断制剂，其特征在于，骨肉瘤诊断制剂检测CDHR3基因和/或蛋白的表达水平。2.根据权利要求1所述的骨肉瘤诊断制剂，其特征在于，骨肉瘤患病组中CDHR3基因或蛋白的表达水平与正常对照组织或者癌旁组织相比，表达水平低。3.根据权利要求1所述的骨肉瘤诊断制剂，其特征在于，检测CDHR3基因或蛋白在生物学样品中的表达水平是通过检测CDHR3部分或全部mRNA和/或检测编码CDHR3蛋白的部分或全部氨基酸序列进行。4.根据权利要求3所述的骨肉瘤诊断制剂，其特征在于，生物学样品为来源于患者的生物样品，包括细胞、组织，优选为外周血。5.根据权利要求1所述的骨肉瘤诊断制剂，其特征在于，骨肉瘤诊断制剂采用荧光定量PCR试剂盒、基因芯片、高通量测序检测CDHR3基因的表达；或采用ELISA试...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，任静，向常娟，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11