本发明专利技术公开了一种基于rs737865的检测利培酮用药效果的试剂盒；本发明专利技术发现一种分离的含单核苷酸多态性位点的核苷酸，其序列如SEQ ID NO：1所示，所述单核苷酸多态性位点位于第858位，rs737865为A→G。该核苷酸应用于制备检测利培酮用药效果的试剂盒时，以SNP rs737865作为利培酮分子标记物。与现有技术相比，本发明专利技术为研究我国人群中COMT基因多态性与临床用药安全的关系奠定了基础，为临床用药个体化提供理论基础，同时也为基于药物基因组学理念的新药研发提供指导依据。
Reagent kit for detecting the effect of risperidone based on rs737865
The invention discloses a kit for the detection of rs737865 based on the effects of risperidone treatment; the invention finds an isolated containing single nucleotide polymorphism sites of nucleotide sequence, such as SEQ ID NO:1 shows, the single nucleotide polymorphism in 858th rs737865, A, G. The nucleotide kit used in the preparation of risperidone detection effect of drugs, with SNP rs737865 as a molecular marker of risperidone. Compared with the prior art, the invention has laid the foundation for the study of relationship between COMT gene polymorphism in the population of China and the safety of clinical use, providing a theoretical basis for the clinical medication of individual, but also for pharmacogenomic drug development based on the idea to provide guidance.
【技术实现步骤摘要】
基于rs737865的检测利培酮用药效果的试剂盒
本专利技术涉及基因
的核酸及其引物和检测方法，具体涉及一种基于rs737865的检测利培酮用药效果的试剂盒。
技术介绍
利培酮(Risperidone)分子式为C23H27FN4O2。利培酮为苯并异恶唑衍生物，是新一代的抗精神病药。其活性成份利培酮是一种具有独特性质的选择性单胺能拮抗剂，它与5-羟色胺能的5-HT2受体和多巴胺的D2受体有很高的亲和力。利培酮也能与肾上腺素能受体结合，并且以较低的亲和力与H1-组胺能受体和α2-肾上腺素受体结合。利培酮不与胆碱能受体结合。利培酮是强有力的D2拮抗剂，可以改善精神分裂症的阳性症状，但它引起的运动功能抑制，以及强直性昏厥都要比经典的抗精神病药少。对中枢系统的5-羟色胺和多巴胺拮抗作用的平衡可以减少发生锥体外系副作用的可能，并将其治疗作用扩展到精神分裂症的阴性症状和情感症状。研究表明，利培酮的药效和药物副作用有明显的个体差异，原因是其代谢受到遗传因素及环境因素的影响，但遗传因素是最主要的原因。因此开发更多的与利培酮代谢相关的分子标记物从而对患者实现个体化治疗是非常有必要的。COMT(Catechol-O-methyltransferase)基因位于人类第22号染色体q11.21上，在不同的细胞中被翻译成不同长度的蛋白。在大脑的神经细胞中，COMT基因表达为膜结合的儿茶酚-O-甲基转移酶蛋白；大脑中的儿茶酚-O-甲基转移酶蛋白主要分布在前额叶皮质区，它可以保证神经递质如多巴胺等在一个稳定的水平上。在肝、肾及血液等器官中表达为可溶性的儿茶酚-O-甲基转移酶蛋白，它可以催化甲基从S-腺苷甲硫氨酸转移到儿茶酚胺上，此类物质包括神经递质多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素等。COMT基因在代谢治疗高血压、哮喘、帕金森疾病的儿茶酚药物方面起着重要的作用。由于利培酮与多巴胺、5-羟色胺等多种神经递质受体均有相互作用，因此寻找利培酮代谢与COMT基因多态性的关系是现有技术急需解决的难题。对现有文献的检索，未发现有本专利技术的COMT基因SNPrs737865为利培酮分子标记物的相关报道。现有的利培酮分子标记研究多基于欧美人群，不能在中国汉族人群中应用。而且由于精神分裂病人利培酮单药治疗后符合标准的病人较少，样本收集十分困难，现有研究由于样本量小，不具有相应的代表性。而本专利技术通过扩大样本量在中国汉族人群中进行大规模发掘和验证，发现了COMT基因SNPrs737865可以作为利培酮分子标记物，具有明显的经济效益。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种基于rs737865的检测利培酮用药效果的试剂盒；具体地讲是一种分离核酸、一种等位基因特异性的核酸引物和COMT基因SNPrs737865单核苷酸多态性的检测方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：第一方面，本专利技术提供了一种分离的含单核苷酸多态性位点的核苷酸，所述核苷酸的序列如SEQIDNO：1所示，所述单核苷酸多态性位点位于第858位，rs737865为A→G。第二方面，本专利技术提供了一种如前述的核苷酸在制备检测利培酮用药效果的试剂盒中的用途。优选的，SNPrs737865为利培酮分子标记物。第三方面，本专利技术提供了一种分离的核苷酸，所述核苷酸的序列如SEQIDNO：1所示第858位，该位点为A。第四方面，本专利技术提供了一种检测利培酮用药效果的试剂盒，所述试剂盒包括：根据如SEQIDNO：1所示序列的第858位的上下游设计的引物对。作为优选方案，所述引物对为野生型引物对或突变型引物对，其中，所述野生型引物对的序列如SEQIDNO：3、SEQIDNO：4所示：正向引物：5′-acaatAAAAAGCAACAGGACACAAAAAaCC-3′SEQIDNO：3反向引物：5′-TGCTGTGATGAGGGGCTCCAGATAG-3′SEQIDNO：4；所述突变型引物对的序列如SEQIDNO：5、SEQIDNO：4所示：正向引物：5′-AAAAAGCAACAGGACACAAAAAgCC-3′SEQIDNO：5反向引物：5′-TGCTGTGATGAGGGGCTCCAGATAG-3′SEQIDNO：4。第五方面，本专利技术提供了一种如前述的试剂盒的非诊断目的使用方法，其包括如下步骤：S1，提取样品DNA；S2，利用所述引物对进行扩增，得扩增产物；S3，检测样品中是否存在如SEQIDNO：1所示的单核苷酸多态性位点rs737865。作为优选方案，所述步骤S3采用DNA测序、杂交测序、酶促错配切割、异源双链分析、点杂交、寡核苷酸阵列、Mini-sequencing、分子信标中的任意一种方法。作为优选方案，步骤S3包括如下步骤：采用ABI7700荧光定量PCR仪，对所取样品的位点rs737865进行分型，检测第858位否存在单核苷酸多态性。作为优选方案，所述引物对的长度为15-50bp。作为优选方案，步骤S2中，所述扩增的具体条件如下：反应体系总体积为20μl，其中：100μmol·L-1dNTPs；50mmol·L-1KCL；10mmol·L-1Tris-HCL，pH为8.3；1.5mmol·L-1MgCl2：0.5UTaqDNA聚合酶；20-50ng模板DNA；0.5μl10pMSEQIDNo.3；0.5μl10pMSEQIDNo.4；双蒸水补足至20ul；PCR反应条件：95℃2mins；30×(94℃30s；58℃30s，72℃30s)72℃5mins。第六方面，本专利技术提供了一种用于检测如前述的核苷酸的SNP位点的野生型引物对，所述引物对的序列如SEQIDNO：3、SEQIDNO：4所示：正向引物：5′-acaatAAAAAGCAACAGGACACAAAAAaCC-3′SEQIDNO：3反向引物：5′-TGCTGTGATGAGGGGCTCCAGATAG-3′SEQIDNO：4。第七方面，本专利技术提供了一种用于检测如前述的核苷酸的SNP位点的突变型引物对，所述引物对的序列如SEQIDNO：5、SEQIDNO：4所示：正向引物：5′-AAAAAGCAACAGGACACAAAAAgCC-3′SEQIDNO：5反向引物：5′-TGCTGTGATGAGGGGCTCCAGATAG-3′SEQIDNO：4。本专利技术采用的样品来自上海市精神卫生中心的995个精神分裂症患者，年龄18～60岁。全体参与者均由家属在正式的知情同意书上同意签字。在上述的基础上，本专利技术采用片段长度差异等位基因特异性PCR(FLDAS-PCR)分型技术对COMT基因SNPrs737865位点及其频率分布情况进行了检测。已经发现了COMT基因SNPrs737865第858位A→G多态性。与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：本专利技术为研究我国人群中COMT基因多态性与临床用药安全的关系奠定了基础，为临床用药个体化提供理论基础，同时也为基于药物基因组学理念的新药研发提供指导依据。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本专利技术的保护范本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的含单核苷酸多态性位点的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸的序列如SEQ ID NO：1所示，所述单核苷酸多态性位点位于第858位，rs737865为A→G。
【技术特征摘要】
1.一种分离的含单核苷酸多态性位点的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸的序列如SEQIDNO：1所示，所述单核苷酸多态性位点位于第858位，rs737865为A→G。2.一种如权利要求1所述的核苷酸在制备检测利培酮用药效果的试剂盒中的用途，其特征在于，SNPrs737865为利培酮分子标记物。3.一种检测利培酮用药效果的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：根据如SEQIDNO：1所示序列的第858位的上下游设计的引物对。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征是，所述引物对为野生型引物对或突变型引物对，其中，所述野生型引物对的序列如SEQIDNO：3、SEQIDNO：4所示；所述突变型引物对的序列如SEQIDNO：5、SEQIDNO：4所示。5.一种如权利要求3或4所述的试剂盒的非诊断目的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括如下步骤：S1，提取样品DNA；S2，利用所述引物对进行扩增，得扩增产物；S3，检...
【专利技术属性】
技术研发人员：李兴旺，秦胜营，周伟，徐青青，沈陆，贺光，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海,31
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