一种用于合成丙酮酸或L-酪氨酸的菌株制造技术

本发明专利技术涉及一种用于合成丙酮酸或L‑酪氨酸的菌株，是通过在大肠杆菌中引入CRISPR/dCas9干扰系统CRISPRi，抑制丙酮酸脱羧酶复合物E1基因aceE的表达构建而得的菌株；所述CRISPRi由dCas9蛋白和向导RNA组成，所述向导RNA为序列如SEQ ID No.01‑SEQ ID No.14中任意一条所示的向导RNA。获得的菌株SPYR01‑15，可以将葡萄糖、木糖或者葡萄糖‑木糖混合物转化为丙酮酸。进一步改造菌株SPYR13、SPYR15，可以将木质素衍生的酚类化合物(苯酚和对香豆酸)与葡萄糖、木糖或者葡萄糖和木糖混合物转化为L‑酪氨酸。本发明专利技术所得菌株，丙酮酸的产量在2‑35g/L，L‑酪氨酸的产量在1‑21g/L。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，具体涉及一种用于合成丙酮酸或l-酪氨酸的菌株。

技术介绍

1、丙酮酸是糖酵解途径中的关键中间体，是一种广泛用于不同行业的重要平台化合物。丙酮酸的传统合成方法主要包括酒石酸脱水脱羧法和乳酸氧化法，但因成本较高，很难大规模应用。随着生物工程的发展，微生物发酵法展现巨大的应用潜力。微生物发酵法中，最常用的策略是将丙酮酸的下游途径进行阻断以积累丙酮酸，比如敲除基因acee，其表达丙酮酸脱羧酶复合物的e1组分(n.maleki,m.safari,m.a.eiteman,conversion ofglucose-xylose mixtures to pyruvate using a consortium of metabolicallyengineered escherichia coli.eng.life sci.18,40-47(2017)；b.zhang,y.zhu,j.zhang,d.wang,l.sun,j.hong,engineered kluyveromyces marxianus for pyruvateproduction a本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于合成丙酮酸的基因工程菌，其特征在于，是通过在大肠杆菌中引入CRISPR/dCas9干扰系统CRISPRi，抑制丙酮酸脱羧酶复合物E1基因aceE的表达构建而得的菌株，记为菌株SPYR；所述CRISPRi由dCas9蛋白和向导RNA组成，所述向导RNA为序列如SEQ IDNo.01-SEQ ID No.14中任意一条所示的向导RNA。

2.根据权利要求1所述的合成丙酮酸的基因工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌为敲除了ptsG基因、manZ基因、galP基因以及glk基因的大肠杆菌；引入的CRISPRi由dCas9蛋白和向导RNA组成，所述向导RNA为序列如SEQ ID...

【技术特征摘要】

1.一种用于合成丙酮酸的基因工程菌，其特征在于，是通过在大肠杆菌中引入crispr/dcas9干扰系统crispri，抑制丙酮酸脱羧酶复合物e1基因acee的表达构建而得的菌株，记为菌株spyr；所述crispri由dcas9蛋白和向导rna组成，所述向导rna为序列如seq idno.01-seq id no.14中任意一条所示的向导rna。

2.根据权利要求1所述的合成丙酮酸的基因工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌为敲除了ptsg基因、manz基因、galp基因以及glk基因的大肠杆菌；引入的crispri由dcas9蛋白和向导rna组成，所述向导rna为序列如seq id no.13所示的向导rna。

3.根据权利要求1所述的用于合成丙酮酸的基因工程菌，其特征在于，通过如下构建方法得到：

4.根据权利要求3所述的用于合成丙酮酸的基因工程菌，其特征在于，e.coli mg74a3是通过敲除e.coli mg1655中的ptsg基因、manz基因、galp基因以及glk基因获得的。

5.一种如权利要求3所述的基因工程菌合成丙酮酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.一种菌群合成丙酮酸的方法，其特征在于，所述菌群以葡萄糖-木糖为底物发酵得到丙酮酸；所述菌群由如权利要求3所述的基因工程菌中的菌株spy...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖毅，赵明涛，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：