本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及多种RNA及其不同组合的肿瘤标志物及其在制备诊断胃癌试剂中的应用。本发明专利技术为胃癌的诊断提供了一组新RNA分子标志物。该组RNA在胃癌组织中的含量比癌旁组织高，而且在胃癌患者血浆中的含量比健康人血浆中的含量高。本发明专利技术还提供了该组RNA中的一个或不同组合用作胃癌标志物的方法与用途。使用该组RNA分子标志物及含有该组RNA标志物不同组合的诊断方法诊断胃癌，操作简单、取材方便，具有高特异性、高灵敏性和易于大量筛查的特点。该组RNA分子标志物适合应用于胃癌高危人群的筛查和胃癌的辅助诊断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及多种RNA及其不同组合的肿瘤标志物及其在制备诊断胃癌试剂中的应用。
技术介绍
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，因缺乏有效的早期诊断手段,早期筛查发现肿瘤较困难.目前胃癌的主要诊断方式有胃镜、CT或PET/CT等,这些检查手段成本高且有创,无法有效地筛查出早期的胃癌患者。而经典的肿瘤标志物如CEA、CA724、CA19-9等,由于缺乏较强的敏感性及特异性而局限。 越来越多的研究发现多种非编码RNA参与调控肿瘤细胞的增殖、凋亡等生物学过程，直接或间接发挥着癌基因或抑癌基因的功能，在肿瘤的发生、发展中起至关重要作用。长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度大于200个核苷酸左右的非编码RNA分子,其主要通过直接或间接影响相关基因或蛋白质的表达水平或结构等来发挥其肿瘤基因的功能，lncRNA在肿瘤中的表达异常,与肿瘤形成、进展有密切联系,可以作为肿瘤诊断及治疗的靶分子。由于肿瘤标本来源的限制，使得临床上应用组织RNA存在一定局限性，而外周血标本获得方便，如果能在血液中检出癌症特异性的microRNA、lncRNA及mRNA并将其作为癌症的生物学标志，对于癌症的早期诊断具有重要意义。进一步的研究发现RNA分子在外周血中的表达同样具有肿瘤相关性和组织特异性，外周血RNA可能成为理想的肿瘤标志物，并且血浆可以作为一种有效、无创的筛查手段，因此血浆等体液中的RNA分子适合作为诊断早期胃癌的潜在肿瘤标志物。本专利技术提供一组RNA分子,用于胃癌患者的诊断及胃癌的早期诊断,具有高的敏感性及特异性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于对现有胃癌检测标志物的补充，提供胃癌患者血浆中循环RNA标志物及检测分析方法，为临床上胃癌患者的早期发现及诊断治疗提供支持。本专利技术公开了用于通过分析RNA分子标志物来表征表型的方法和组合物。本专利技术提供了一组胃癌RNA标志物，其特征在于，所述RNA分子选自:1)序列表中所示的RNA分子及其组合，AK001058序列如SEQ ID NO.1所示；INHBA-AS1(NR_027118)序列如SEQ ID NO.2所示，MIR4435-2HG(NR_015395)序列如SEQ ID NO.3所示，CEBPA-AS1(NR_026887)序列如SEQ ID NO.4所示。2)序列表中所示与SEQ ID NO.2核酸序列具有同源性的INHBA-AS1(NR_027119)序列 SEQ ID NO.5，与SEQ ID NO.3核酸序列具有同源性的MIR4435-2HG(NR_024373)序列SEQ ID NO.6、MIR4435-2HG(NR_136161)序列SEQ ID NO.7、MIR4435-2HG(NR_136162)序列SEQ ID NO.8、MIR4435-2HG(NR_136163)序列SEQ ID NO.9、MIR4435-2HG(NR_136164)序列SEQ ID NO.10、MIR4435-2HG(NR_136165)序列SEQ ID NO.11、MIR4435-2HG(NR_136166)序列SEQ ID NO.12所示。在染色体上的同一基因由于转录方式以及转录后剪切加工等方式的不同可以生成高度同源的不同长度的RNA分子。本专利技术的的RNA分子SEQ ID NO.5是SEQ ID NO.2的同原序列，SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12是SEQ ID NO.3同源序列。本专利技术所述的RNA分子作为肿瘤标志物的应用，其特征在于，所述肿瘤为胃癌。在研究过程中专利技术人发现，序列表中四种RNA分子SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4在胃癌组织中的表达比癌旁组织的表达高，同时发现这四个基因表达的RNA在胃癌患者血浆中的含量比健康人血浆中的含量高。由此可见，患者在患病期间这四种RNA表达的增加与胃癌存在着密切的相关性。本专利技术首次发现血浆/血清及组织中4个RNA基因，在胃癌临床早期诊断、鉴别诊断的作用，具有重大的理论意义和实用价值。在上述发现的基础上，本专利技术提供了一组胃癌的RNA分子标志物，以及该分子标志物在制备诊断胃癌试剂中的应用。使用该分子标志物及含有该分子标志物的诊断试剂盒诊断胃癌，具有操作简单、取材方便的优点，且具有高特异性、高灵敏性和易于大量筛查的特点。本专利技术提供的RNA分子标志物检测的方法，其包括测定离体样品中一种或多种RNA标志物的含量，其中所述一种或多种RNA标志物包括一种或多种选自序列表中的RNA标志物。在实际检测过程中，可以检测其中任一种RNA分子，也可以检测不同RNA分子的组合，确定胃癌患者样本中RNA分子含量是否相对于对照健康人群有所改变，由此进行胃癌的筛查和诊断。本专利技术RNA分子检测方法所使用的样本可以是组织标本，同样也适用于体液样本，包括血浆、血清和尿液等。针对体液样本的无创诊断方式更具有临床应用价值。本专利技术采用反转录实时定量PCR方法检测样本中的RNA分子。不同样本中RNA的制备均采用常规的RNA制备方法。诊断胃癌的检测RNA分子系统中包括了常规的RNA反转录试剂、实时定量PCR试剂。其中包括了扩增RNA分子标志物的上、下游寡核苷酸引物。PCR扩增引物本领域人员均可以依照引物设计原则进行设计。本专利技术在实施例中优选了表1所示引物用于样本的检测分析，其中18s rRNA是作为内参分子。表1. 实时定量PCR所用的引物序列RNA序列上游引物（5′-3′）下游引物（5′-3′）SEQ ID NO.1CTGCTTTGCCATTTCCCCTTGTTGATGCCACACAGAGGGASEQ ID NO.2CCTACTACACACAGGGGCTCTTCCAGAAGCTCCTCATGGGSEQ ID NO.3AATTTGCCACCACCCTGTGAATGCCGTTTTAGGGGGACAGSEQ ID NO.4TGCGTCCCTCGCATTCTTTAGACAGGAGACACTTGAGGGC18S rRNAGTAACCCGTTGAACCCCATTCCATCCAATCGGTAGTAGCG为使本专利技术更易理解，下面结合具体实施例进一步阐述本专利技术，但下述实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。结合附图说明本专利技术的具体实施方法。附图说明图1. NR_027119(A), NR_015395(B), NR_026887(C)和AK001058(D)在胃癌组织中的相对表达量。纵坐标是lncRNA的相对表达量（-△△Ct值）,横坐标是样本例数。图2.胃癌患者及健康人群血浆中NR_027119(A), NR_015395(B), NR_026887(C)和AK001058(D)的相对表达量。纵坐标是lncRNA的相对表达量（△Ct值）,横坐标是不同类型样本。图3. 4条lncRNA检测数据结果的ROC曲线分析及曲线下面积（AUC）（A），4条lncRNA联合ROC曲线分析及去除任何一条lncRNA后剩余3条lnc本文档来自技高网...
【技术保护点】
一组胃癌RNA标志物，其特征在于，所述RNA分子选自:1)序列表中所示的RNA分子及其组合，AK001058序列如SEQ ID NO.1所示；INHBA‑AS1(NR_027118)序列如SEQ ID NO.2所示，MIR4435‑2HG(NR_015395)序列如SEQ ID NO.3所示，CEBPA‑AS1(NR_026887)序列如SEQ ID NO.4所示；2)序列表中所示与SEQ ID NO.2核酸序列具有同源性的INHBA‑AS1(NR_027119)序列 SEQ ID NO.5，与SEQ ID NO.3核酸序列具有同源性的MIR4435‑2HG(NR_024373)序列SEQ ID NO.6、MIR4435‑2HG(NR_136161)序列SEQ ID NO.7、MIR4435‑2HG(NR_136162)序列SEQ ID NO.8、MIR4435‑2HG(NR_136163)序列SEQ ID NO.9、MIR4435‑2HG(NR_136164)序列SEQ ID NO.10、MIR4435‑2HG(NR_136165)序列SEQ ID NO.11、MIR4435‑2HG(NR_136166)序列SEQ ID NO.12所示。...
【技术特征摘要】
1.一组胃癌RNA标志物，其特征在于，所述RNA分子选自:1)序列表中所示的RNA分子及其组合，AK001058序列如SEQ ID NO.1所示；INHBA-AS1(NR_027118)序列如SEQ ID NO.2所示，MIR4435-2HG(NR_015395)序列如SEQ ID NO.3所示，CEBPA-AS1(NR_026887)序列如SEQ ID NO.4所示；2)序列表中所示与SEQ ID NO.2核酸序列具有同源性的INHBA-AS1(NR_027119)序列 SEQ ID NO.5，与SEQ ID NO.3核酸序列具有同源性的MIR4435-2HG(NR_024373)序列SEQ ID NO.6、MIR4435-2HG(NR_136161)序列SEQ ID NO.7、MIR4435-2HG(NR_136162)序列SEQ ID NO.8、MIR4435-2HG(NR_136163)序列SEQ ID NO.9、MIR4435-2HG(NR_136164)序列SEQ ID NO.10、MIR4435-2HG(NR_136165)序列SEQ ID NO.11、MIR4435-2HG(N...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓飞，付汉江，柯东，房学东，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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