一种肺癌标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种肺癌标志物，为TREM‑2蛋白，该标志物是一种特异性表达于髓系来源的树突状细胞和巨噬单核细胞的膜表面受体，属于免疫球蛋白超家族成员。TREM‑2在肺癌患者和荷瘤小鼠外周血单核细胞的表达明显高于健康对照者和正常小鼠。采用免疫组化法检测证实TREM‑2在肺癌患者巨噬细胞中存在高表达，并且与肺癌进展呈正相关。本发明专利技术可为肺癌诊断和治疗提供分子标志物，用于肺癌诊断和治疗的新肿瘤标志物髓系细胞触发受体‐2(TREM‐2)，具有简便、快捷、创伤小、易复查等优点，容易被患者接受，对肺癌的临床诊断和治疗中具有重要意义。具有广阔的应用前景。

Lung cancer marker and application thereof

The invention provides a lung cancer marker, TREM 2 protein, the membrane surface markers is a receptor specific expression in myeloid dendritic cells and macrophage, which belongs to the immunoglobulin superfamily. The expression of TREM in peripheral blood 2 lung cancer patients and tumor bearing mice and mononuclear cells was significantly higher than that of healthy controls and normal mice. By immunohistochemical method confirmed that TREM 2 in macrophages in lung cancer patients have high expression, and positively correlated with lung cancer progression. The present invention provides for the diagnosis and treatment of lung cancer markers for tumor diagnosis and treatment of lung cancer markers of myeloid cell triggering receptor - 2 (TREM - 2), has the advantages of simple, fast, small trauma, easy to search, easy to be accepted by patients, the clinical diagnosis of lung cancer diagnosis and has important the significance of treatment. Has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学分子生物学领域，涉及一种肺癌标志物TREM-2及其应用。
技术介绍
肺癌是最为常见的恶性肿瘤之一，其死亡率在全球及我国均居首位。且仍呈持续上升的趋势，2012年GLOBOCAN癌症报告显示，全球肺癌的发病人数和死亡人数分别约占当年癌症总病例数与总死亡人数的12.9％和19.4％。2013年美国新增肺癌患者高达22万人，其中死于肺癌的肿瘤患者比例较前明显增加(男性占26％，女性占28％)。近年来，通过采取手术、化疗、放疗以及靶向治疗等相结合的综合治疗措施，肺癌患者的预后有所改善。但由于该类患者早期缺乏特异性症状，大部分就诊时已届晚期。目前，肺癌患者1年总生存率为31-36％，5年总生存率＜15％。早期确诊的肺癌患者，手术治疗的预后较中晚期肺癌明显改善，由此可见，提高肺癌的早期诊断在降低病死率上显得十分重要。然而，肺癌的早期诊断一直是改善肺癌预后中的难点问题，目前影像学诊断、化学诊断及组织细胞学诊断是肿瘤诊断的三大支柱，前者在亚临床诊断上仍存在局限性，后两者均以肿瘤标志物作为观察指标，可以比影像学诊断更早发现肿瘤的存在，具有高效、高灵敏性、便捷、标本易获取及创伤小等优点。因此，寻找新的肿瘤标志物应用于肺癌的早期诊断具有重要的临床意义。目前在临床上应用于肺癌患者的比较有代表性的肿瘤标志物主要由以下几类：(1)胚胎抗原：代表为癌胚抗原CEA；(2)糖蛋白类抗原：包括CA199、CA125、鳞状细胞抗原SCC-Ag等；(3)角蛋白类抗原：包括细胞角蛋白19片段抗原CYFRA21-1；(4)酶类抗原：神经元烯醇化酶NSE、乳酸脱氢酶LDH等。尽管肺癌相关的肿瘤标志物不断地被发现，然而这些指标对肺癌的诊断缺乏特异性，仅具备一定的参考价值。另一方面，由于肺癌组织病理的多样性、同种病理肿瘤细胞的异质性和肿瘤生物学行为的复杂性和多态性，造成单一标志物检测对肺癌的诊断价值有限。因此，寻找一种高灵敏性、高特异性、可实际应用于肺癌临床诊断的生物标志物已成为肺癌研究中亟待解决的问题之一。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种肺癌标志物TREM-2，一种特异性表达于髓系来源的树突状细胞和巨噬单核细胞的膜表面受体，属于免疫球蛋白超家族成员。是一种高灵敏性、高特异性、可实际应用于肺癌临床诊断和治疗的生物标志物。本专利技术提供的一种肺癌标志物TREM-2是一种特异性表达于髓系来源的树突状细胞和巨噬单核细胞的膜表面受体，属于免疫球蛋白超家族成员，在巨噬/单核细胞表面表达。本专利技术的另一个目的是提供所述的标志物TREM-2蛋白在作为肺癌的诊断和治疗用的肿瘤标志物中的应用。肺癌的发病和进展具有十分复杂的机制，在肿瘤微环境中患者体内可表达多种特异性的蛋白分子和受体或配体，在肿瘤发展的不同阶段释放标志物的含量也不同，从外周血检测肺癌特异性分子标志物的变化。采用流式细胞术检测发现，TREM-2在肺癌患者和荷瘤小鼠外周血单核细胞的表达明显高于健康对照者和正常小鼠。采用免疫组化法检测证实TREM-2在肺癌患者巨噬细胞中存在高表达，并且与肺癌进展呈正相关。采用流式细胞术比较肺癌患者手术前后和化疗前后外周血单核细胞TREM-2水平证实有效减轻肿瘤负荷可以降低TREM-2的表达。本专利技术可为肺癌诊断和治疗提供分子标志物，用于肺癌诊断和治疗的新肿瘤标志物髓系细胞触发受体-2(TREM-2)，具有简便、快捷、创伤小、易复查等优点，容易被患者接受，对肺癌的临床诊断和治疗中具有重要意义。具有广阔的应用前景。附图说明图1是流式细胞术检测TREM-2在人和小鼠外周血单核细胞表面的表达水平。图2是免疫组化法分析TREM-2在不同分期肺癌患者和良性肺部疾病患者肺组织巨噬细胞中的表达水平。图3是流式细胞术检测手术前后和化疗前后肺癌患者外周血单核细胞表面TREM-2水平。具体实施方式下面结合说明书附图和具体实例进一步详细说明本专利技术。除非特殊书名，本专利技术采用的试剂、设备为本
常规试剂和设备。另外，实施例中未详细说明的分子生物学方法均为本领域常规的方法，具体操作可参看产品说明书。实施例1取二组外周血各5ml，一组是对照另一组是试验组，破红制备单细胞悬液，调整细胞总量至5×106细胞，在10μl体系中加入PE-TREM-2，混匀后置于暗处，室温下45min后上流式，FCS/SSC设门分析单核细胞分析TREM-2+细胞的比例以及TREM-2的表达丰度。在第28天麻醉荷瘤小鼠进行眼球采血1ml，破红后制备单细胞悬液，调整细胞总量至5×106细胞，在10μl体系中加入PE-CD14和APC-TREM-2，流式细胞术分析TREM-2+CD14+细胞的比例以及其TREM-2的表达丰度。结果如图1所示，两组的外周血单核细胞发现，试验组(肺癌患者)的TREM-2+单核细胞比例及其TREM-2的平均荧光强度(MFI)均较对照组(健康者)显著增高(p<0.01)(图1A)。同样地，3LL荷瘤小鼠外周血CD14+TREM-2+细胞比例和TREM-2的表达丰度也明显高于正常小鼠(图1B)。由此说明，TREM-2在肺癌宿主外周血单核细胞中存在高表达。实施例2选取不同TNM分期肺癌患者手术获得的肺组织标本，其中I期15例，II期15例，III期15例，IV期11例，同时选取21例其他良性疾病患者的肺组织标本作为对照组，通过免疫组化染色(分别标记特异性一抗抗体anti-TREM-2和anti-F4/80)，结果如图2显示，肺癌患者瘤周组织中的巨噬细胞高表达TREM-2，并且TREM-2表达量随着肿瘤进展而增高(图2A，B)。同时，TREM-2表达量与淋巴结转移呈正相关(图2C)。由此说明，TREM-2与肺癌的进展密切相关。实施例3分别比较肺癌患者手术前后和化疗前后外周血单核细胞TREM-2表达的变化。进一步地根据肿瘤负荷的减轻程度将入组的20名患者分成两组，组1包含稳定无变化患者(SD)和肺癌进展患者(PD)，组2包含肺癌部分缓解患者(PR)。结果如图3，有效减轻肿瘤负荷后单核细胞表面TREM-2的表达明显减少。PR患者外周血单核细胞表面TREM-2的表达水平在治疗后明显降低，而SD患者和PD患者的TREM-2并没有发生明显改变，甚者在部分PD患者中出现升高。由此说明TREM-2可能在评估肺癌化疗疗效中具有一定的临床价值。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺癌标志物，其特征在于，所述标志物为TREM‑2蛋白，并在巨噬/单核细胞表面表达。

【技术特征摘要】
1.一种肺癌标志物，其特征在于，所述标志物为TREM-2蛋白，并在巨噬/单核细胞表面表达。...

【专利技术属性】
技术研发人员：周建英，李和权，姚一楠，马文江，陆国华，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33