一种肺癌血清标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种肺癌血清标志物，该标志物为异柠檬酸脱氢酶2。异柠檬酸脱氢酶2在肺癌Ⅰ期病人的血清中含量增加，可以对被检者是否患有肺癌进行初步确定。该肿瘤标志物在肺癌Ⅰ期病人手术后血清含量降低，可以作为肺癌病人手术治疗的候选标志物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种肺癌血清标志物及其应用。
技术介绍
肿瘤标记物是肿瘤细胞产生和释放的某种物质，常以抗原、酶、激素等代谢产物的形式存在于肿瘤细胞内或宿主体液中，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。肿瘤标记物在临床上主要用于对原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断、肿瘤治疗效果的观察和评价以及肿瘤复发和预后的预测等。可通过生物化学反应、放免法、酶免法、电化学发光等方法检测。异柠檬酸脱氢酶2(isocitrate dehydrogenase 2,IDH2)是细胞代谢途径中参与三羧酸循环的酶，位于染色体15q26.1，亚细胞定位于线粒体基质。其生理功能是正向催化异柠檬酸氧化产生α-酮戊二酸，同时还原NADP+产生NADPH。IDH2的逆向反应催化α-酮戊二酸产生异柠檬酸，并消耗NADPH产生NADP+。近期的研究已报道IDH2突变产生致癌代谢物2-羟基戊二酸，能抑制胶质瘤分化和促进肿瘤形成。IDH2基因敲除小鼠体内的移植瘤形成受到明显抑制，肿瘤血管生成标志物明显减少。其同源蛋白IDH3a诱导HIF1α途径的代谢重编程及血管生成促进肿瘤生长。IDH1/2逆向反应时，消耗NADPH，但是其产物苹果酸可转运至胞浆经苹果酸酶产生NADPH，降低细胞的ROS水平，维持细胞氧化还原状态平衡，促进细胞存活。IDH2也可以在低氧条件通过谷氨酰胺代谢经过a-酮戊二酸产生柠檬酸，从而促进细胞增殖和增加细胞活力。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人通过临床大样本数据库的查询，发现IDH2的高表达降低肺癌病人的总生存期和无进展生存期，提示IDH2可能参与肺癌的发生及疾病发展过程。进一步使用酶联免疫吸附分析(ELISA)方法对肺癌Ⅰ期患者的及健康人群血清IDH2含量进行了分析，并比较肺癌切除手术后与手术前患者血清IDH2的含量。发现IDH2在肺癌患者血清中的含量明显增高，且肺癌切除手术后相对手术前的血清IDH2含量降低。因此，血清中的IDH2含量可以用于肺癌的筛查与诊断、手术治疗效果的候选标志物。即，本专利技术提供了一种肺癌血清标志物，该标志物为IDH2。该标志物可用于制备诊断肺癌的药物、治疗
肺癌的药物、诊断肺癌的试剂盒以及肺癌诊断芯片。总之，IDH2在肺癌Ⅰ期病人的血清中含量增加，可以对被检者是否患有肺癌进行初步确定。该肿瘤标志物在肺癌Ⅰ期病人手术后血清含量降低，可以作为肺癌病人手术治疗的候选标志物。附图说明图1为实施例1实验结果图：图1a和1b显示了IDH2表达对应的肺癌病人的总生存期和无进展生存期；图2为实施例2实验结果图：图2a显示了IDH2在肺癌患者确诊后手术治疗前与健康人群血清中IDH2的蛋白含量，图2b显示了肺腺癌、肺鳞癌与健康人群血清中IDH2的蛋白含量，图2c显示了肺癌患者手术切除瘤体前与切除后血清中IDH2的蛋白含量。具体实施方式实施例1.IDH2表达高低与肺癌病人总生存期和无进展生存期具有关联性目前已有包含大量肺癌样本基因表达及其临床信息，如生存期与无进展生存期等的数据库，提供公开的数据供研究者分析。为研究IDH2与肺癌病人的总生存时间与疾病治疗至初次进展时间的关系，申请人调取临床样本数据库中IDH2表达及肺癌病人的总生存期与无进展生存期的数据，进行分析统计。实验方法：通过查询kmplot数据库(包含1928例肺癌样本)中IDH2表达与生存期数据。采用cox函数分析生存期数据，绘制IDH2表达与Kaplan-Meier生存期曲线，并进行统计学分析。实验结果：如图1a所示，IDH2高表达降低肺癌病人的总生存期，风险值为1.27(95％CI＝1.12-1.45)，结果具有统计学差异(P＝0.00023)。如图1b所示，IDH2高表达降低肺癌病人的无进展生存期，风险值为1.37(95％CI＝1.13-1.66)，结果具有统计学差异(P＝0.0014)。实施例2.IDH2在肺癌患者与健康人群血清，肺癌患者术后和术前血清有显著差异。本部分研究对72例健康人及28例肺癌Ⅰ期患者样本外周血血清IDH2含量进行检测，其中28例肺癌包括20例腺癌和8例鳞癌样本。28例肺癌患者均采用手术切除肺癌组织的治疗方式，并在手术治疗前和治疗后约7天采集外周血血清，冻存于-80度。健康人
群外周血样本冻存于-80度。实验方法：USCN公司IDH2酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒测定IDH2在血清中的表达1.准备试剂、样品和标准品；2.添加100微升样品和标准品至反应孔中，37度孵育2小时；3.去除反应孔中液体，加入100微升检测试剂A，37度孵育1小时；4.去除反应孔中液体，漂洗液漂洗3次；5.加入100微升检测试剂B,37度孵育30分钟；6.去除反应孔中液体，漂洗液漂洗5次；7.加入90微升底物，37度孵育10-20分钟；8.加入90微升终止液，立即450nm读取吸光值。实验结果：在健康人群，肺癌患者手术治疗前后血清中检测IDH2蛋白含量发现：1.肺癌病人血清IDH2含量相对健康人群明显升高(图2a)。2.肺癌包括腺癌和鳞癌两大主要类型，IDH2在腺癌和鳞癌血清中的IDH2含量没有明显差异,均相对健康人群升高(图2b)。3.肺癌Ⅰ期病人在手术切除肺癌组织后，血清IDH2含量明显降低(图2c)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺癌血清标志物，其特征在于，所述标志物为异柠檬酸脱氢酶2。

【技术特征摘要】
1.一种肺癌血清标志物，其特征在于，所述标志物为异柠檬酸脱氢酶2。2.如权利要求1所述的标志物在制备诊断肺癌药物中的应用。3.如权利要求1所述的标...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹亚，李江江，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43