石菖蒲中含氮化合物的制备方法技术

本发明专利技术公开了三种石菖蒲中含氮化合物的制备方法，其包含以下步骤：(1)将经水提醇沉的石菖蒲药材提取物的上清液，用大孔吸附树脂吸附，洗脱树脂，得洗脱液，即获得石菖蒲提取物；(2)将所述的石菖蒲提取物经过经硅胶柱层析，梯度洗脱，通过薄层色谱检测，合并相同比移植斑点对应的硅胶柱洗脱液，先后得到5个流分Fr.1～Fr.5；分别得流分Fr.2、Fr3、Fr4，即可；其中薄层色谱检测的条件如下，展开剂为正丁醇、乙酸和水体积比为4∶1∶1的混合溶液；所述的三种石菖蒲中含氮化合物分别为乙酰胺、胍基化合物和半胱氨酸。使用本发明专利技术的制备方法，首次从石菖蒲中分离得到乙酰胺、胍基化合物和半胱氨酸等含氮类化合物。

Process for preparing nitrogen containing compound in Acorus calamus

The invention discloses a method for preparing nitrogen-containing compounds three kinds of Shichangpu, which comprises the following steps: (1) the supernatant by water extraction and alcohol precipitation of Acorus medicinal extract, eluting the resin with macroporous resin, elution solution, namely, calamus extract; (2) the Shichangpu the extract by silica gel column chromatography, gradient elution, detected by thin-layer chromatography, silica gel column with the same ratio of transplant spots corresponding to the eluent flow has been 5 Fr.1 ~ Fr.5 respectively; Fr.2, Fr3, Fr4 flow, which can; TLC spectrum detection reagent for the following conditions, butanol, acetic acid and water volume ratio of 4: 1: 1 mixed solution; three Shichangpu in the nitrogenous compounds were acetamide, guanidine compounds and cysteine. Using the preparation method of the invention, for the first time from Shichangpu isolated acetamide, guanidine compounds and nitrogen containing compounds such as cysteine.

【技术实现步骤摘要】
石菖蒲中含氮化合物的制备方法
本专利技术涉及石菖蒲中含氮化合物的制备方法。
技术介绍
石菖蒲为天南星科菖蒲属植物，是一种常用中药，其根茎入药。《名医别录》记载：“久服聪耳明目，益心智，高智不老”，近年来药理报道，石菖蒲对小鼠学习和记忆有促进作用，对东莨菪碱造成的记忆获得障碍有明显的改善，可望治疗老年痴呆症。我国石菖蒲植物资源丰富，其化学成分除挥发油有较多研究外，其余成分却很少有报道。仅发现授权专利CN1101812C报道了用石菖蒲经乙醇渗漉，渗漉液依次用石油醚、乙酸乙酯及正丁醇萃取，提取物采用硅胶，SephadexLH-20及大孔树脂等不同填充剂作层析分离得到了三个石菖蒲碱。目前，未发现从石菖蒲中提取分离酰胺、胍基、氨基酸类等含氮化合物的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术不能从石菖蒲中分离提取包括乙酰胺、胍基化合物、半胱氨酸的含氮化合物等缺点，而提供了石菖蒲中含氮化合物新的制备方法。本专利技术首次从石菖蒲中分离得到了乙酰胺、胍基化合物、半胱氨酸等含氮化合物，所述的乙酰胺(SCP-H-1)、胍基化合物(SCP-H-5和SCP-H-6)的结构式如下所示：因此，本专利技术的方案之一是提供了一种石菖蒲中含氮化合物的制备方法，其包含以下步骤：(1)将经水提醇沉的石菖蒲药材提取物的上清液，用大孔吸附树脂吸附，洗脱树脂，得洗脱液，即获得石菖蒲提取物；(2)将所述的石菖蒲提取物经过经硅胶柱层析，梯度洗脱，通过薄层色谱(TLC)检测，合并相同比移植(Rf)斑点对应的硅胶柱洗脱液，先后得到5个流分Fr.1～Fr.5；得流分Fr.2，即可；其中TLC检测的条件如下，展开剂为正丁醇、乙酸和水体积比为4∶1∶1～4∶1∶5的混合溶液；所述的含氮化合物为乙酰胺。步骤(1)中，所述的石菖蒲药材为本领域常规用来制备石菖蒲提取物的石菖蒲药材。所述水提醇沉的方法和条件可参照本领域常规提取石菖蒲提取物的方法和条件。较佳地，将石菖蒲药材和水混合提取后，收集提取液；向所述提取液中加醇类溶剂，沉降，收集上清液，即为本专利技术所述的经水提醇沉的石菖蒲药材提取物的上清液。本专利技术特别优选以下条件：在所述水提的过程中，水的用量较佳地为石菖蒲质量的6～10倍，更佳地为6～8倍，最佳地为8倍；所述的水提的提取温度较佳地为90℃～100℃；所述的水提的提取时间较佳地为30～120分钟，更佳地为60～120分钟；所述的水提的提取次数较佳地为1～4次，更佳地为2～3次，最佳地为3次。较佳地，在所述的醇沉之前，将提取液按本领域常规的浓缩方法进行浓缩，如减压浓缩；较佳地，将所述的提取液浓缩至1mL/1g石菖蒲药材～2mL/1g石菖蒲药材为止，更佳地浓缩至1mL/1g石菖蒲药材，收集浓缩液。在所述的醇沉的过程中，所述的醇类溶剂为本领域常规的石菖蒲水提醇沉所用醇类溶剂，较佳地为乙醇；所述的乙醇较佳地为95％乙醇，百分数为体积百分数；所述的醇类溶剂的加入量较佳地为在所述的醇类溶剂与所述的浓缩液的混合溶液中，加入至含有65～80％的醇类溶剂，更佳地为含有65～75％的醇类溶剂，百分数均为体积百分数；所述的沉降的时间较佳地为加入醇类溶剂后沉降8～12小时；所述的上清液的收集方法可参照本领域常规方法，如：离心收集上清液。在步骤(1)所述的石菖蒲提取物的制备方法中，较佳地，将所述的上清液浓缩至干并和水混合溶解后，再用大孔吸附树脂吸附。所述的浓缩可按本领域常规的浓缩方法进行操作，如减压浓缩；所述的水的用量为0.2mL/1g石菖蒲药材～0.5mL/1g石菖蒲药材。所述的用大孔吸附树脂吸附可参照本领域常规的树脂吸附方法，本专利技术特别优选以下条件：所述的大孔吸附树脂较佳地为D101大孔吸附树脂，更佳地为D101大孔吸附树脂柱；所述的D101大孔吸附树脂柱的径高比较佳地为1∶4～1∶12，更佳地为1∶8～1∶12；所述的用大孔吸附树脂吸附的上样流速较佳地为1～2BV/h，更佳地为1～1.5BV/h。所述的大孔吸附树脂的用量较佳地为0.5mL树脂/1g石菖蒲药材～1mL树脂/1g石菖蒲药材，更佳地为0.6mL树脂/1g石菖蒲药材。所述洗脱树脂的方法和条件可参照本领域常规树脂洗脱的方法和条件，较佳地，用树脂洗脱剂洗脱吸附后的大孔吸附树脂，收集树脂洗脱液，即可。本专利技术特别优选以下条件：所述的树脂洗脱剂较佳地为水，所述树脂洗脱剂的用量较佳地为4～6倍树脂体积，更佳地为5倍树脂体积。在步骤(1)所述的石菖蒲提取物的制备方法较佳地还包括活性炭吸附步骤：将所述树脂洗脱液用活性炭吸附，洗脱活性炭，收集活性炭洗脱液，干燥，即可。较佳地，在所述的树脂洗脱液用活性炭吸附之前，将所述的树脂洗脱液按本领域常规的浓缩方法进行浓缩，如减压浓缩。较佳地，将树脂洗脱液浓缩至0.2mL/1g石菖蒲药材～0.5mL/1g石菖蒲药材为止。所述的用活性炭吸附的方法和条件可参照本领域常规活性炭吸附的方法，本专利技术优选以下条件：所述的活性炭较佳地为活性炭柱，径高比较佳地为1∶4～1∶12，更佳地为1∶8～1∶12；所述的活性炭吸附的上样流速较佳地为1～2BV/h，更佳地为1～1.5BV/h。活性炭的用量较佳地为0.5mL活性炭/1g石菖蒲药材～1mL活性炭/1g石菖蒲药材，更佳地为0.6mL活性炭/1g石菖蒲药材。所述的洗脱活性炭的方法和条件可参照本领域常规洗脱活性炭的方法和条件，较佳地，用不同活性炭洗脱剂依次洗脱吸附后的活性炭，收集活性炭洗脱液，即可。本专利技术特别优选以下条件：所述的不同活性炭洗脱剂较佳地为水和乙醇水溶液；所述的乙醇水溶液较佳地为体积分数为30％的乙醇水溶液；所述的洗脱活性炭较佳地用所述的水洗脱活性炭后再用所述的乙醇水溶液洗脱活性炭；所述的水的用量较佳地为3～5倍活性炭体积，更佳地为4倍活性炭体积；所述的乙醇水溶液的用量较佳地为3～5倍活性炭体积，更佳地为4倍活性炭体积；所述的收集活性炭洗脱液较佳地收集30％乙醇水溶液的活性炭洗脱液。所述的干燥可按本领域常规干燥方法操作，较佳地为减压浓缩后干燥。步骤(2)中，所述的硅胶柱层析可参照本领域常规的硅胶柱层析的方法和条件进行。所述的梯度洗脱较佳地以乙酸乙酯的甲醇溶液为洗脱剂，初始梯度较佳地为乙酸乙酯与甲醇的体积比为1∶0；最终梯度较佳地乙酸乙酯与甲醇的体积比为0∶1；所述的混合溶液中，正丁醇、乙酸和水体积比较佳地为4∶1∶1；所述的TLC检测条件还可包括显色剂为茚三酮试剂。本专利技术所述的石菖蒲中含氮化合物的制备方法较佳地还包括步骤(3)：将步骤(2)中获得的Fr.2流分经十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)柱层析，洗脱，得到ODS柱洗脱液，经薄层制备，即可。步骤(3)中，所述的ODS柱层析可参照本领域常规的ODS柱层析的方法和条件进行。所述的洗脱可参照本领域常规的洗脱ODS柱的方法和条件进行，较佳的用水洗脱。所述的薄层制备可参照本领域常规的薄层制备的方法和条件进行，本专利技术优选以下条件：展开剂为正丁醇、乙酸和水的混合溶液，显色剂较佳地为碘；所述的混合溶液中正丁醇、乙酸和水体积比较佳地为4∶1∶1～4∶1∶5，更佳地为4∶1∶1。本专利技术的方案之二是提供了一种石菖蒲中含氮化合物的制备方法，其包含以下步骤：(1)将上述的石菖蒲提取物经过经硅胶柱层析，梯度洗脱，通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种石菖蒲中含氮化合物的制备方法，其特征在于包含以下步骤：(1)将经水提醇沉的石菖蒲药材提取物的上清液，用大孔吸附树脂吸附，洗脱树脂，得洗脱液，即获得石菖蒲提取物；(2)将所述的石菖蒲提取物经过经硅胶柱层析，梯度洗脱，通过薄层色谱检测，合并相同比移植斑点对应的硅胶柱洗脱液，先后得到5个流分Fr.1～Fr.5；得流分Fr.2，即可；其中薄层色谱检测的条件如下，展开剂为正丁醇、乙酸和水体积比为4∶1∶1～4∶1∶5的混合溶液；所述的含氮化合物为乙酰胺。

【技术特征摘要】
1.一种石菖蒲中含氮化合物的制备方法，其特征在于包含以下步骤：(1)将经水提醇沉的石菖蒲药材提取物的上清液，用大孔吸附树脂吸附，洗脱树脂，得洗脱液，即获得石菖蒲提取物；(2)将所述的石菖蒲提取物经过经硅胶柱层析，梯度洗脱，通过薄层色谱检测，合并相同比移植斑点对应的硅胶柱洗脱液，先后得到5个流分Fr.1～Fr.5；得流分Fr.2，即可；其中薄层色谱检测的条件如下，展开剂为正丁醇、乙酸和水体积比为4∶1∶1～4∶1∶5的混合溶液；所述的含氮化合物为乙酰胺。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的水提醇沉的步骤为将石菖蒲药材和水混合提取后，收集提取液；向所述提取液中加醇类溶剂，沉降，收集上清液，即为所述的经水提醇沉的石菖蒲药材提取物的上清液。3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述的水提的步骤中，水的用量为石菖蒲质量的6～10倍，较佳地为6～8倍，更佳地为8倍；和/或，提取的温度为90℃～100℃；和/或，提取时间为30～120分钟，较佳地为60～120分钟；和/或，提取次数为1～4次，较佳地为2～3次，更佳地为3次；和/或，所述的醇沉的步骤中，醇类溶剂为乙醇，较佳地为95％乙醇，百分数为体积百分数；和/或，醇类溶剂的加入量为在所述的醇类溶剂与所述的浓缩液的混合溶液中，加入至含有65～80％的醇类溶剂，较佳地为含有65～75％的醇类溶剂，百分数为体积百分数；和/或，所述的醇沉的时间为加入醇类溶剂后沉降8～12小时；较佳地，在所述的醇沉的步骤之前，将所述的水提的提取液减压浓缩；较佳地，将所述的水提的提取液浓缩至1mL/1g石菖蒲药材～2mL/1g石菖蒲药材为止，更佳地浓缩至1mL/1g石菖蒲药材。4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的用大孔吸附树脂吸附的步骤中，大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂，较佳地为D101大孔吸附树脂柱；和/或，D101大孔吸附树脂柱的径高比为1∶4～1∶12，较佳地为1∶8～1∶12；和/或，用大孔吸附树脂吸附的上样流速为1～2BV/h，较佳地为1～1.5BV/h；和/或，大孔吸附树脂的用量为0.5mL树脂/1g石菖蒲药材～1mL树脂/1g石菖蒲药材，较佳地为0.6mL树脂/1g石菖蒲药材；较佳地，在所述的用大孔吸附树脂吸附的步骤之前，将上清液浓缩至干并和水混合溶解；水的用量较佳地为0.2mL/1g石菖蒲药材～0.5mL/1g石菖蒲药材；所述的浓缩较佳地为减压浓缩。5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)所述的洗脱树脂的步骤中，树脂洗脱剂为水；和/或，树脂洗脱剂的用量为4～6倍树脂体积，较佳地为5倍树脂体积。6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)还包含以下步骤：将树脂洗脱液用活性炭吸附，洗脱活性炭，收集活性炭洗脱液，干燥，即可；较佳地，在所述的树脂洗脱液用活性炭吸附之前，将所述的树脂洗脱液减压浓缩；较佳地，将所述的树脂洗脱液浓缩至0.2mL/1g石菖蒲药材～0.5mL/1g石菖蒲药材为止。7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的活性炭为活性炭柱，径高比为1∶4～1∶12，较佳地为1∶8～1∶12；和/或，所述的活性炭吸附的上样流速为1～2BV/h，较佳地为1～1.5BV/h；和/或，活性炭的用量为0.5mL活性炭/1g石菖蒲药材～1mL活性炭/1g石菖蒲药材，较佳地为0.6mL活性炭/1g石菖蒲药材。8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在所述的洗脱活性炭的步骤中，活性炭洗脱剂为水和乙醇水溶液；所述的洗脱活性炭较佳地用水洗脱活性炭后再用乙醇水溶液洗脱活性炭；和/或，乙醇水溶液较佳地为体积分数为30％的乙醇水溶液；和/或，水的用量为3～5倍活性炭体积，较佳地为4倍活性炭体积；和/或，乙醇水溶液的用量为3～5倍活性炭体积，较佳地为4倍活性炭体积；和/或，所述的收集活性炭洗脱液为收集30％乙醇水溶液的活性炭洗脱液；和/或，所述的干燥为减压浓缩后干燥。9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的梯度洗脱以乙酸乙酯的甲醇溶液为洗脱剂，初始梯度为乙酸乙酯与甲醇的体积比为1∶0；最终梯度乙酸乙酯与甲醇的体积比为0∶1；所述的混合溶液中，正丁醇、乙酸和水体积比为4∶1∶1；所述的薄层色谱检测条件较佳地还包括显色剂为茚三酮试剂。10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的石菖蒲中含氮化合物的制备方法还包括步骤(3)：将步骤(2)中获得的Fr.2流分经十八烷基硅烷键合...

【专利技术属性】
技术研发人员：董文心，顾丰华，陈嘉，刘翔，吴彤，张美璇，李默影，周海凤，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，中国医药工业研究总院，
类型：发明
国别省市：上海,31