制备用于细胞培养基中的泊洛沙姆的方法技术

本文提供制备用于细胞培养基中的泊洛沙姆的方法。本文还提供含有通过本文方法制备的泊洛沙姆的细胞培养基、以及使用该培养基用于细胞培养并从细胞生产多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉参考本申请要求2014年3月25日提交的美国临时申请系列No.61/970,281的优先权权益，将其全部按引用并入本文中。专利
本专利技术涉及制备泊洛沙姆(例如，用于细胞培养基中)的方法、含有按照本文所述制备的泊洛沙姆的细胞培养基、和使用本文中所述的细胞培养基来培养细胞和生产多肽的方法。专利技术背景细胞培养制造技术广泛用于生产基于蛋白质的治疗剂(如，抗体)，用于药物制剂中。基于蛋白质的产品(如，抗体产品)的商业生产需要细胞培养参数的优化，以使细胞产生大量蛋白质产物以满足制造需求。以工业规模制造基于蛋白质的产品时，如蛋白质生产效率和原料(例如，细胞培养基中的组分)成本这样的因素就非常重要。泊洛沙姆是广泛用于工业蛋白质生产的细胞培养基中的组分。将其加入细胞培养基中，以增强所培养细胞的生存力。其许多功能中的一种是作为表面活性剂起作用，降低细胞培养基中的细胞和气泡之间的附着力并且在气泡破裂时保护细胞免受损伤。其还可以强化细胞膜，提高细胞从培养物的泡沫层的排出以及改变起泡频率和速度。不幸地，已经观察到了泊洛沙姆性能在批与批之间的变异性显著。用于细胞培养基中时，性能差的泊洛沙姆批次可以引起降低的细胞生存力和细胞生长速率。降低的细胞生存力导致降低的蛋白质生产。以工业规模进行培养时，这种降低的生产可以导致严重的经济损失。因此，需要一种简单、廉价的技术方案来降低泊洛沙姆的变异性和提高泊洛沙姆的性能，特别是针对性能差的批次。本文中引用的所有出版物、专利和专利申请将其全部按引用并入本文中，用于全部目的。专利技术概述本文中提供的本专利技术尤其公开了用于制备泊洛沙姆(例如，用于细胞培养物中)的方法。还提供了通过本文中所述的方法制备的泊洛沙姆。本文中进一步公开了含有通过本文中所述的方法制备的泊洛沙姆的细胞培养基组合物。本文中进一步公开了，在含有通过本文中所述的方法制备的泊洛沙姆的细胞培养基中培养产生多肽的细胞以在细胞培养物中生产多肽的方法。因此，在一个方面中，本文中提供了制备用于细胞培养基中的泊洛沙姆的方法，包括步骤：(a)将固体泊洛沙姆加热到至少约60℃，形成液体泊洛沙姆；和(b)将液体泊洛沙姆冷却至低于约50℃的温度，形成固体热处理过的泊洛沙姆，其中冷却不在造粒(prilling)或研磨设备中进行，并且其中泊洛沙姆包含环氧乙烷和环氧丙烷的共聚物。在一些实施方案中，与包含步骤(a)之前的泊洛沙姆的细胞培养基中的细胞生存力相比，在包含热处理过的泊洛沙姆的细胞培养基中细胞生存力提高。在一些实施方案中，步骤(a)中将泊洛沙姆加热到约60℃至约185℃。在一些实施方案中，步骤(a)中将泊洛沙姆加热到约157℃至约185℃。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约157℃至约185℃并且至少1分钟。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约157℃至约185℃并且约1分钟至约250分钟。在一些实施方案中，步骤(a)中将泊洛沙姆加热到约134℃至约157℃。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约134℃至约157℃并且至少1分钟。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约134℃至约157℃并且1分钟至约250分钟。在一些实施方案中，步骤(a)中将泊洛沙姆加热到约120℃至约134℃。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约120℃至约134℃并且至少约62分钟。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约120℃至约134℃并且约62分钟至约250分钟。在一些实施方案中，步骤(a)中将泊洛沙姆加热到约100℃至约120℃。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约100℃至约120℃并且至少约98分钟。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约100℃至约120℃并且约98分钟至约250分钟。在一些实施方案中，步骤(a)中将泊洛沙姆加热到约80℃至约100℃。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约80℃至约100℃并且至少约122分钟。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约80℃至约100℃并且约122分钟至约250分钟。在一些实施方案中，步骤(a)中将泊洛沙姆加热到约60℃至约80℃。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约60℃至约80℃并且至少约143分钟。在一些实施方案中，加热泊洛沙姆到约60℃至约80℃并且约143分钟至约250分钟。在一些实施方案中，与包含步骤(a)之前的泊洛沙姆的细胞培养基中的细胞生存力相比，在包含热处理过的泊洛沙姆的细胞培养基中细胞生存力提高至少10％。在一些实施方案中，细胞生存力提高至少约20％。在一些实施方案中，细胞生存力提高至少约30％。在一些实施方案中，在包含步骤(a)之前的泊洛沙姆的细胞培养基中细胞生存力在约3小时的细胞培养后低于约80％。在一些实施方案中，在步骤(b)中，在环境温度，约2℃至约8℃，或低于0℃，冷却液体泊洛沙姆。在一些实施方案中，泊洛沙姆在真空下加热。在一些实施方案中，液体泊洛沙姆冷却至少约20分钟。在一些实施方案中，将步骤(b)中产生的热处理过的泊洛沙姆加入细胞培养基中。在一些实施方案中，在将热处理过的泊洛沙姆加入细胞培养基之前，将步骤(a)和(b)重复至少一次。在一些实施方案中，在步骤(a)之前已经通过造粒工艺(prillingprocess)处理过泊洛沙姆。在一些实施方案中，泊洛沙姆具有分子式HO(C2H4O)n(C3H6O)m(C2H4O)nH，其中n从约60至约150和m从约25至约60。在一些实施方案中，泊洛沙姆具有约55℃的熔化温度。在一些实施方案中，泊洛沙姆具有约6,000至约18,000道尔顿的平均分子量。在一些实施方案中，泊洛沙姆包含具有分子式HO(C2H4O)n(C3H6O)m(C2H4O)nH的共聚物，n具有约80的值，m具有约27的值，并且该泊洛沙姆具有约7680至约9510g/mol的平均分子量。在一些实施方案中，泊洛沙姆是泊洛沙姆188。在一些实施方案中，细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一些实施方案中，细胞是昆虫细胞。在一些实施方案中，细胞产生多肽。在另一个方面中，本文中提供了通过以上和本文中所述的任一种方法制备的泊洛沙姆。在进一步的方面中，本文中提供了包含通过以上和本文中所述的任一种方法制备的泊洛沙姆的细胞培养基。在一些实施方案中，细胞培养基包含约0.1g/L至约10g/L的热处理过的泊洛沙姆。在一些实施方案中，细胞培养基包含约0.1g/L至约3g/L的热处理过的泊洛沙姆。在一些实施方案中，细胞培养基包含约3g/L至约10g/L的热处理过的泊洛沙姆。在再进一步的方面中，本文中提供了在细胞培养物中生产多肽的方法，包括步骤：在适于多肽生产的条件下，在细胞培养基中，培养产生多肽的细胞，其中细胞培养基包含通过以上和本文中所述的任一种方法制备的泊洛沙姆。在一些实施方案中，细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一些实施方案中，细胞是昆虫细胞。在一些实施方案中，细胞培养基包含约0.1g/L至约10g/L的热处理过的泊洛沙姆。在一些实施方案中，细胞培养基包含约0.1g/L至约3g/L的热处理过的泊洛沙姆。在一些实施方案中，细胞培养基包含约3g/L至约10g/L的热处理过的泊洛沙姆。在一些实施方案中，多肽是抗体或其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备用于细胞培养基中的泊洛沙姆的方法，包括步骤：(a)将固体泊洛沙姆加热到至少约60℃，形成液体泊洛沙姆；和(b)将液体泊洛沙姆冷却至低于约50℃的温度，形成固体热处理过的泊洛沙姆，其中冷却不在造粒或研磨设备中进行，并且其中泊洛沙姆包含环氧乙烷和环氧丙烷的共聚物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.03.25 US 61/970,2811.一种制备用于细胞培养基中的泊洛沙姆的方法，包括步骤：(a)将固体泊洛沙姆加热到至少约60℃，形成液体泊洛沙姆；和(b)将液体泊洛沙姆冷却至低于约50℃的温度，形成固体热处理过的泊洛沙姆，其中冷却不在造粒或研磨设备中进行，并且其中泊洛沙姆包含环氧乙烷和环氧丙烷的共聚物。2.权利要求1的方法，其中与包含步骤(a)之前的泊洛沙姆的细胞培养基中的细胞生存力相比，包含热处理过的泊洛沙姆的细胞培养基中的细胞生存力提高。3.权利要求1或2的方法，其中步骤(a)中加热泊洛沙姆到约60℃至约185℃。4.权利要求3的方法，其中步骤(a)中加热泊洛沙姆到约157℃至约185℃。5.权利要求4的方法，其中加热泊洛沙姆到约157℃至约185℃并且至少1分钟。6.权利要求5的方法，其中加热泊洛沙姆到约157℃至约185℃并且1分钟至约250分钟。7.权利要求3的方法，其中步骤(a)中加热泊洛沙姆到约134℃至约157℃。8.权利要求7的方法，其中加热泊洛沙姆到约134℃至约157℃并且至少1分钟。9.权利要求8的方法，其中加热泊洛沙姆到约134℃至约157℃并且1分钟至约250分钟。10.权利要求3的方法，其中步骤(a)中加热泊洛沙姆到约120℃至约134℃。11.权利要求10的方法，其中加热泊洛沙姆到约120℃至约134℃并且至少约62分钟。12.权利要求11的方法，其中加热泊洛沙姆到约120℃至约134℃并且约62分钟至约250分钟。13.权利要求3的方法，其中步骤(a)中加热泊洛沙姆到约100℃至约120℃。14.权利要求13的方法，其中加热泊洛沙姆到约100℃至约120℃并且至少约98分钟。15.权利要求14的方法，其中加热泊洛沙姆到约100℃至约120℃并且约98分钟至约250分钟。16.权利要求3的方法，其中步骤(a)中加热泊洛沙姆到约80℃至约100℃。17.权利要求16的方法，其中加热泊洛沙姆到约80℃至约100℃并且至少约122分钟。18.权利要求17的方法，其中加热泊洛沙姆到约80℃至约100℃并且约122分钟至约250分钟。19.权利要求3的方法，其中步骤(a)中加热泊洛沙姆到约60℃至约80℃。20.权利要求16的方法，其中加热泊洛沙姆到约60℃至约80℃并且至少约143分钟。21.权利要求17的方法，其中加热泊洛沙姆到约60℃至约80℃并且约143分钟至约250分钟。22.权利要求1或权利要求2的方法，其中与包含步骤(a)之前的泊洛沙姆的细胞培养基中的细胞生存力相比，包含热处理过的泊洛沙姆的细胞培养基中的细胞生存力提高至少10％。23.权利要求22的方法，其中细胞生存力提高至少约20％。24.权利要求22的方法，其中细胞生存力提高至少约30％。25.权利要求1-24任一项的方法，其中包含步骤(a)之前的泊洛沙姆的细胞培养基中的细胞生存力在约3小时的细胞培养后低于约80％。26.权利要求1-25任一项的方法，其中步骤(b)中，在环境温度、约2℃至约8℃、或低于0℃，冷却液体泊洛沙姆。27.权利要求1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·P·维瑟维斯瓦兰，R·D·基斯，S·J·迈耶，I·权，K·卡尔霍恩，K·温彻斯特，A·亚当斯，M·格伦，S·凯尼格，A·德泽，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH