一种中国仓鼠卵巢细胞培养基制造技术

本发明专利技术属于细胞培养领域，涉及一种中国仓鼠卵巢细胞培养基。本发明专利技术仓鼠卵巢细胞培养基，包括以下组分：DMEM基础培养基，酵母抽提物，碳酸氢钠，氨基酸，维生素，无机盐，白蛋白，转铁蛋白和亚油酸。本发明专利技术的培养基为CHO细胞生长提供了丰富的营养环境，避免了有血清添加的各种弊端，本发明专利技术培养基各组分共同作用，减少了CHO细胞生长代谢产生的有害代谢物，在不添加补料培养基的条件下，能够促进CHO细胞蛋白的表达。

A Chinese hamster ovary cell culture medium

The invention belongs to the field of cell culture, and relates to a Chinese hamster ovary cell culture medium. The invention relates to a hamster ovary cell culture medium, comprising the following components: DMEM basal medium, yeast extract, sodium bicarbonate, amino acid, vitamin, inorganic salt, albumin, transferrin and linoleic acid. The culture medium for the growth of CHO cells provides rich nutrition environment, avoid the disadvantages of the added serum, the culture medium components together, harmful metabolites reduced CHO cell growth metabolism, without the addition of feeding medium conditions, can promote the expression of CHO protein in cells.

【技术实现步骤摘要】
一种中国仓鼠卵巢细胞培养基
本专利技术属于细胞培养领域。更具体地，本专利技术涉及一种中国仓鼠卵巢细胞培养基。
技术介绍
真核细胞中中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamsterOvary，中国仓鼠卵巢细胞)是目前重组糖基蛋白生产的首选体系，因为与其他表达系统相比，其具有诸多优点。目前已有越来越多的药用蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达，其中许多CHO表达的药物已投放市场，例如EPO、Enbrel等。国际和国内有很多人开发了各种CHO培养基和补料配方，如：国内华东理工大学张立、张元兴等人在中国专利申请200410018258.0中公布的CHO培养基。国际上有商业出售的培养基，如JRHBiosciences公司是专业从事细胞培养基产品(cellculturemedia)的公司，是美国FDA指定生物医药企业专用培养基。Invitrogen公司也出品无血清培养基。但是大规模的进行抗体药物蛋白质表达需要的培养基量很大，费用昂贵，比如JRH基础培养基的价格在每升100元人民币以上，在成本中占很大比例，在我国，蛋白药物厂家也面临着培养基的巨额费用的问题，而且同时蛋白产量低也是一个很大的问题。因此，本领域迫切需要开发新的适合中国仓鼠卵巢细胞培养的、高蛋白产量的无血清培养基。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为解决上述问题，提供一种新的培养中国仓鼠卵巢细胞的培养基，本专利技术培养基是适合中国仓鼠卵巢细胞培养的、高蛋白产量的无血清培养基。本专利技术培养基通过以下技术方案实现的：一种中国仓鼠卵巢细胞培养基包括以下组分：DMEM基础培养基10-50g/L，酵母抽提物1-20g/L，碳酸氢钠0.2-3.4g/L，氨基酸5-50g/L，维生素1.5-10g/L，无机盐2.9-15g/L，白蛋白1-20g/L，转铁蛋白30-50g/L和亚油酸1-30mg/L。优选地，所述氨基酸(g/L)包括：精氨酸0.05-1.59g/L，亮氨酸1.25-2.56g/L，异亮氨酸0.86-3.42g/L，天冬氨酸0.12-1.27g/L，谷氨酸0.21-4.25g/L，赖氨酸0.13-2.47g/L，苏氨酸2.46-5.64g/L，脯氨酸0.19-0.95g/L，甘氨酸0.023-0.45g/L和丙氨酸1.38-5.35g/L。优选地，所述无机盐(g/L)包括：柠檬酸铁2.42-4.87g/L，硫酸锌0.13-1.24g/L，硫酸铜0.98-4.58g/L，亚硒酸钠0.05-3.84g/L，硫酸镁0.0042-0.05g/L和偏钒酸钠0.00047-0.0085g/L。优选地，所述维生素(g/L)包括：维生素B10.10-0.58g/L，维生素B20.25-1.38g/L，维生素B50.02-0.65g/L，维生素B120.001-0.056g/L，维生素C0.13-0.84g/L，维生素E0.23-2.41g/L和维生素D1.0-3.85g/L。优选地，所述中国仓鼠卵巢细胞培养基，由以下成分及其浓度组成：DMEM基础培养基32g/L，酵母抽提物13g/L，碳酸氢钠0.85g/L，白蛋白16g/L，转铁蛋白35g/L和亚油酸21mg/L，精氨酸1.32g/L，亮氨酸1.58g/L，异亮氨酸2.92g/L，天冬氨酸0.73g/L，谷氨酸2.51g/L，赖氨酸1.42g/L，苏氨酸3.65g/L，脯氨酸0.87g/L，甘氨酸0.19g/L，丙氨酸2.13g/L，柠檬酸铁3.29g/L，硫酸锌1.04g/L，硫酸铜2.97g/L，亚硒酸钠1.03g/L，硫酸镁0.03g/L，偏钒酸钠0.0022g/L，维生素B10.36g/L，维生素B20.97g/L，维生素B50.24g/L，维生素B120.031g/L，维生素C0.54g/L，维生素E1.33g/L和维生素D2.67g/L。DMEM基础培养基为细胞的生长提供所需的营养成分，酵母抽提物的加入使培养基营养更加丰富。氨基酸作为最主要的氮源物质，存在于细胞培养基中。氨基酸可合成蛋白质、多肽及其他含氮化合物，其分解产生的能量供细胞生长，本专利技术培养基中加入的氨基酸及其浓度，对中国仓鼠卵巢细胞有良好的促进作用，并且其中的这些氨基酸会影响中国仓鼠卵巢细胞蛋白表达水平。白蛋白是脂类、无机盐等小分子物质的载体，可解决脂类的难溶性及细胞毒性的问题；也可增加培养基黏度，保护悬浮细胞免受剪切力的损伤。本专利技术细胞培养基的制备方法，包括以下步骤：S1.称取上述DMEM培养基干粉，酵母抽提物，氨基酸，可溶性维生素，无机盐，白蛋白，转铁蛋白，加注射用水至总体积的70％-85％，轻微搅拌溶解，并继续加入维生素E、D和亚油酸，并加入0.2％的吐温80，搅拌溶解，得A液；S2.向步骤S1所得A液中加入碳酸氢钠，轻微搅拌溶解，加注射用水至规定体积，得B液；S3.向步骤S2所得B液中用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至7.2-7.4，得C液；S4.将步骤S3所得C液中用0.22μm滤膜正压过滤除菌，即得。本专利技术的培养基，为中国仓鼠卵巢细胞生长提供了丰富的营养环境，避免了有血清添加的各种弊端，本专利技术培养基各组分共同作用，减少了中国仓鼠卵巢细胞生长代谢产生的有害代谢物，在不添加补料培养基的条件下，能够促进中国仓鼠卵巢细胞功能蛋白的表达。本专利技术提供了一种中国仓鼠卵巢细胞培养基，是一种无血清培养基，具有以下优点：1、本专利技术提供的中国仓鼠卵巢细胞的无血清基础培养基，能够促进中国仓鼠卵巢细胞生长，减少有害代谢物。2、本专利技术培养基可以促进中国仓鼠卵巢细胞功能蛋白的表达和积累。具体实施方式下面将结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1一种中国仓鼠卵巢细胞培养基，由以下成分及其浓度组成：DMEM基础培养基10g/L，酵母抽提物1g/L，碳酸氢钠0.2g/L，白蛋白1g/L，转铁蛋白30g/L和1-30mg/L的亚油酸。所需添加氨基酸，如表1所示：表1培养基中所需添加的氨基酸(g/L)所需添加无机盐，如表2所示：表2培养基中所需添加的无机盐(g/L)柠檬酸铁2.42硫酸锌0.13硫酸铜0.98亚硒酸钠0.05硫酸镁0.0042偏钒酸钠0.00047所需添加的维生素，如表3所示：表3培养基所需添加的维生素(g/L)维生素B10.10维生素B20.25维生素B50.02维生素B120.001维生素C0.13维生素E0.23维生素D1.0培养基制备方法：S1.称取上述DMEM培养基干粉，酵母抽提物，氨基酸，可溶性维生素，无机盐，白蛋白，转铁蛋白，加注射用水至总体积的70％-85％，轻微搅拌溶解，并继续加入维生素E、D和亚油酸，并加入0.2％的吐温80，搅拌溶解，得A液；S2.向步骤S1所得A液中加入碳酸氢钠，轻微搅拌溶解，加注射用水至规定体积，得B液；S3.向步骤S2所得B液中用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至7.2-7.4，得C液；S4.将步骤S3所得C液中用0.22μm滤膜正压过滤除菌，即得。实施例2一种中国仓鼠卵巢细胞培养基，由以下成分及其浓度组成：DMEM基础培养基50g/L，酵母抽提物20g/L，碳酸氢钠3.4g/L，白蛋白20g/L，转铁蛋白50g/L和亚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中国仓鼠卵巢细胞培养基，其特征在于，包括以下组分及其浓度：DMEM基础培养基10‑50g/L，酵母抽提物1‑20g/L，碳酸氢钠1.2‑3.4g/L，氨基酸5‑50g/L，维生素1.5‑10g/L，无机盐2.9‑15g/L，白蛋白1‑20g/L，转铁蛋白30‑50g/L和亚油酸1‑30mg/L。

【技术特征摘要】
1.一种中国仓鼠卵巢细胞培养基，其特征在于，包括以下组分及其浓度：DMEM基础培养基10-50g/L，酵母抽提物1-20g/L，碳酸氢钠1.2-3.4g/L，氨基酸5-50g/L，维生素1.5-10g/L，无机盐2.9-15g/L，白蛋白1-20g/L，转铁蛋白30-50g/L和亚油酸1-30mg/L。2.根据权利要求1所述中国仓鼠卵巢细胞培养基，其特征在于，所述的氨基酸包括：精氨酸0.05-1.59g/L，亮氨酸1.25-2.56g/L，异亮氨酸0.86-3.42g/L，天冬氨酸0.12-1.27g/L，谷氨酸0.21-4.25g/L，赖氨酸0.13-2.47g/L，苏氨酸2.46-5.64g/L，脯氨酸0.19-0.95g/L，甘氨酸0.023-0.45g/L和丙氨酸1.38-5.35g/L。3.根据权利要求1所述中国仓鼠卵巢细胞培养基，其特征在于，所述无机盐包括：柠檬酸铁2.42-4.87g/L，硫酸锌0.13-1.24g/L，硫酸铜0.98-4.58g/L，亚硒酸钠0.05-3.84g/L，硫酸镁0.0042-0.05g/L和偏钒酸钠0.00047-0.0085g/L。4.根据权利要求1所述中国仓鼠卵巢细胞培养基，其特征在于，所述的维生素包括：维生素B10.10-0.58g/L，维生素B20.25-1.38g/L，维生素B50.02-0.65g/L，维生素B120.001-0.056g/L，维生素C0.13-0.84g/L，维生素E0.23-2.41g/L和维生素D1.0-3.85g/L。5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：严志海，
申请(专利权)人：严志海，
类型：发明
国别省市：广东,44