一种淋巴细胞培养基制造技术

本发明专利技术属于体外细胞培养技术领域，涉及一种淋巴细胞培养基。本发明专利技术淋巴细胞培养基，包括以下成分：基础培养基干粉，胰岛素，人转铁蛋白，氢化可的松，酪蛋白磷酸肽，表皮生长因子，L‑谷氨酰胺，乙醇胺，大豆多肽，卵磷脂，亚硒酸钠，柠檬酸铁，硫酸锌，维生素E和庆大霉素。本发明专利技术培养基培养的淋巴细胞的扩增能力和杀瘤活性增强，并且有效解决了现有淋巴细胞培养基中存在的传播疾病的风险和同时不同批次质量无法统一的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种淋巴细胞培养基
本专利技术属于体外细胞培养
，涉及一种淋巴细胞培养基。
技术介绍
淋巴细胞是用于细胞免疫治疗的重要载体，而淋巴细胞的体外培养、扩增和活化离不开优良的培养基。培养基为淋巴细胞的生长提供了基本的环境，包括为淋巴细胞存活提供适宜的渗透压，pH值，为淋巴细胞的生长提供了一切所需的营养因子，包括无机盐、氨基酸、功能性的蛋白、维生素等，也是淋巴细胞各种代谢产物的排放场所。传统的培养基为了提供这些营养因子，大多采用动物或人的血清及其组分作为添加物，比较常见的有新生牛血清、胎牛血清、人AB血清、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、人转铁蛋白等。使用动物血清的优点是有足够的量供应，价格便宜，但是使用动物血清的缺点是有潜在传播传染病的风险，以及由于异种蛋白导致过敏症的发生，而且动物血清并不能很好的支持人淋巴细胞的生长。而使用人AB血清的好处是可以很好的支持人淋巴细胞的生长，但是人AB血清来源困难，供应量有限，而且也存在传播传染病的风险。现有商品化淋巴细胞培养基大都添加有人血白蛋白、人转铁蛋白等人源性组分。由于这些组分来源于人的血清，虽然有各种病原体的检测技术和消毒技术，但仍然避免不了传播疾病的风险；由于来源于不同的供者，造成批次间差异，不利于质量的控制。中国专利(CN102352343B)公布了一种淋巴细胞培养基及其使用方法，该淋巴细胞培养基包括基础培养基以及血清替代物，所述血清替代物包括重组人血白蛋白、重组人转铁蛋白以及重组人胰岛素，用以解决现有淋巴细胞培养基大多采用动物或人的血清及其组分作为添加物，增加了传播疾病的风险，同时不同批次，质量无法统一的问题。但是在使用培养基时依旧需要加入2％的淋巴细胞自体血清才能有更好的效果，未能从根本上解决上述问题。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种淋巴细胞培养基。本专利技术培养基培养的淋巴细胞的扩增能力和杀瘤活性增强，并且有效解决了现有淋巴细胞培养基中存在的传播疾病的风险和同时不同批次质量无法统一的问题。本专利技术通过以下技术方案解决上述技术问题：一种淋巴细胞培养基，包括以下组分及其浓度：基础培养基干粉10-20g/L，胰岛素5-7mg/L，人转铁蛋白10-20mg/L，氢化可的松20-30mg/mL，酪蛋白磷酸肽25-35mg/L，表皮生长因子20-40ng/mL，L-谷氨酰胺0.1-1.5g/L，乙醇胺2-4mg/L，大豆多肽10-20g/L，卵磷脂1-3g/L，亚硒酸钠0.1-1mg/L，柠檬酸铁1-5mg/L，硫酸锌1-5mg/L，维生素E1-50mg/L和庆大霉素1-15IU/mL。优选地，所述淋巴细胞培养基由以下组分及其浓度组成：RPMI1640干粉15g/L，胰岛素6.5mg/L，人转铁蛋白13.75mg/L，氢化可的松18.25mg/mL，酪蛋白磷酸肽33.5mg/L，表皮生长因子27.5ng/mL，L-谷氨酰胺1.32g/L，乙醇胺3.8mg/L，大豆多肽15g/L，卵磷脂2.5g/L，亚硒酸钠0.58mg/L，柠檬酸铁4.5mg/L，硫酸锌3.25mg/L，维生素E12.5mg/L和庆大霉素7.5IU/mL。优选地，所述基础培养基为RPMI1640或DMEM培养基。胰岛素能与细胞上的胰岛素受体结合形成复合物，促进RNA、蛋白质和脂肪酸的合成，抑制细胞凋亡，是重要的细胞存活因子。转铁蛋白与Fe3+复合物结合，为细胞提供必需的微量元素铁。氢化可的松是人工合成也是天然存在的糖皮质激素，对细胞生长具有调控作用。酪蛋白磷酸肽(CAS号：691364-49-5)是一类含有磷酸丝氨酰和谷氨酰族的短肽，将抵抗各种酶的水解，有效防止钙离子在中性或偏硷性环境中形成磷酸钙沉淀，从而通过丝裂原最佳浓度的选择，达到增加细胞培养后的分裂增值能力和更多的有丝分裂细胞。表皮生长因子是最早发现的生长因子，对调节细胞生长、增殖和分化起着重要作用。卵磷脂(CAS号：8002-43-5)是一种与蛋白质、维生素并列的营养补充剂，能够控制物质进入细胞，维持细胞的代谢。大豆多肽即肽基大豆蛋白水解物的总称，是大豆蛋白质经酶水解而制成的多种低分子肽混合物，其主要分子量在300-700的范围内，通常由3-6个氨基酸组成，而其氨基酸组成与大豆蛋白质十分相似，必需氨基酸平衡良好，含量丰富，而且具有极佳的生理功能和加工特性。优选地，所述的淋巴细胞培养基的制备方法，分为以下步骤：S1准确称取基础培养基干粉，酪蛋白磷酸肽，L-谷氨酰胺，乙醇胺，亚硒酸钠，柠檬酸铁和硫酸锌，将其溶于40-45℃超纯水中，搅拌均匀，得溶液I；S2将溶液I冷却至15-20℃时，加入相应重量的胰岛素，人转铁蛋白，氢化可的松，表皮生长因子，卵磷脂，维生素A和庆大霉素，搅拌均匀，得溶液II；S3利用2mol/LNa2CO3或HEPES调整溶液IIpH为7.2，过膜除菌即得。本专利技术淋巴细胞培养基与现有淋巴细胞培养基相比，具有以下优点：(1)本专利技术提供的淋巴细胞培养基，有效解决了现有淋巴细胞培养基大多采用动物或人的血清及其组分作为添加物，具有传播疾病的风险，不同批次质量无法统一的问题；(2)实验证明，本专利技术培养基与对比例培养基相比，淋巴细胞的扩增能力和杀瘤活性更强，分别提高了24.4％，36.1％，证明使用本专利技术所述淋巴细胞培养基用于培养人淋巴细胞的效果优于现有的血清替代物的淋巴细胞培养基。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。大豆多肽，产品规格25/1，购于河北发多利生物科技有限公司。实施例1一种淋巴细胞培养基一种淋巴细胞培养基，由以下组分及其浓度组成：基础培养基干粉10g/L，胰岛素5mg/L，人转铁蛋白10mg/L，氢化可的松20mg/mL，酪蛋白磷酸肽25mg/L，表皮生长因子20ng/mL，L-谷氨酰胺0.1g/L，乙醇胺2mg/L，大豆多肽10g/L，卵磷脂1g/L，亚硒酸钠0.1mg/L，柠檬酸铁1mg/L，硫酸锌1mg/L，维生素E1mg/L和庆大霉素1IU/mL。制备方法，分为以下步骤：S1准确称取基础培养基干粉，酪蛋白磷酸肽，L-谷氨酰胺，乙醇胺，亚硒酸钠，柠檬酸铁和硫酸锌，将其溶于40-45℃超纯水中，搅拌均匀，得溶液I；S2将溶液I冷却至15-20℃时，加入相应重量的胰岛素，人转铁蛋白，氢化可的松，表皮生长因子，卵磷脂，维生素A和庆大霉素，搅拌均匀，得溶液II；S3利用2mol/LNa2CO3或HEPES调整溶液IIpH为7.2，过膜除菌即得。实施例2一种淋巴细胞培养基一种淋巴细胞培养基，由以下组分及其浓度组成：基础培养基干粉20g/L，胰岛素7mg/L，人转铁蛋白20mg/L，氢化可的松30mg/mL，酪蛋白磷酸肽35mg/L，表皮生长因子40ng/mL，L-谷氨酰胺1.5g/L，乙醇胺4mg/L，卵磷脂3g/L，大豆多肽20g/L，亚硒酸钠1mg/L，柠檬酸铁5mg/L，硫酸锌5mg/L，维生素E50mg/L和庆大霉素15IU/mL。制备方法与实施例1类似。实施例3一种淋巴细胞培养基一种淋巴细胞培养基，由下组分及其浓度组成：RPMI1640干粉15g本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种淋巴细胞培养基，其特征在于，包括以下组分及其浓度：基础培养基干粉10‑20g/L，胰岛素5‑7mg/L，人转铁蛋白10‑20mg/L，氢化可的松20‑30mg/mL，酪蛋白磷酸肽25‑35mg/L，表皮生长因子20‑40ng/mL，L‑谷氨酰胺0.1‑1.5g/L，乙醇胺2‑4mg/L，大豆多肽10‑20g/L，卵磷脂1‑3g/L，亚硒酸钠0.1‑1mg/L，柠檬酸铁1‑5mg/L，硫酸锌1‑5mg/L，维生素E 1‑50mg/L和庆大霉素1‑15IU/mL。

【技术特征摘要】
1.一种淋巴细胞培养基，其特征在于，包括以下组分及其浓度：基础培养基干粉10-20g/L，胰岛素5-7mg/L，人转铁蛋白10-20mg/L，氢化可的松20-30mg/mL，酪蛋白磷酸肽25-35mg/L，表皮生长因子20-40ng/mL，L-谷氨酰胺0.1-1.5g/L，乙醇胺2-4mg/L，大豆多肽10-20g/L，卵磷脂1-3g/L，亚硒酸钠0.1-1mg/L，柠檬酸铁1-5mg/L，硫酸锌1-5mg/L，维生素E1-50mg/L和庆大霉素1-15IU/mL。2.根据权利要求1所述的淋巴细胞培养基，其特征在于，由下组分及其浓度组成：RPMI1640干粉15g/L，胰岛素6.5mg/L，人转铁蛋白13.75mg/L，氢化可的松18.25mg/mL，酪蛋白磷酸肽33.5mg/L，表皮生长因子27.5ng/mL，L-谷氨酰胺1.32g/L，乙醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶宗耀，
申请(专利权)人：叶宗耀，
类型：发明
国别省市：广东,44