本发明专利技术提供细胞扩增方法。所述方法包括在支持细胞扩增的三维培养条件下培养来自胎盘和脂肪组织的粘附细胞。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】细胞扩增方法和藉此产生的细胞和条件培养基用于治疗的 用途 本申请是2007年3月22日提交的题为"细胞扩增方法和藉此产生的细胞和条件 培养基用于治疗的用途"的中国专利申请200780018851. 7的分案申请。 发巧领域巧发巧背景 本专利技术设及细胞扩增方法、藉此产生的细胞群及其用途。具体地本专利技术设及扩增 来自胎盘或脂肪组织（贯穿于整个PCT中）的粘附细胞（a化erentcell)的方法及其例如 用于造血干细胞移植的治疗用途。 在日益发展的医学界，为了细胞植入和组织工程目的越来越需要大量成人干细 胞。另外，成人干细胞疗法正持续不断地开发用于治疗和治愈各种病症，例如造血功能障 碍、屯、脏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、中风、烧伤、肌肉萎缩症、自身免疫病、糖尿病和 关节炎。 造血干细胞化SC)是祖细胞，其产生髓系和淋己系的所有血细胞类型。移植的服C 的植入和启动造血作用取决于HSC在受者骨髓中的归巢和增生的能力。 普遍公认干细胞在体内与骨髓中离散的食（niche)有密切的联系，所述食提供了 经由细胞间接触或短距离作用共同介导干细胞分化和自我更新的分子信号。运些食是"造 血诱导性微环境"(HIM)的部分，由骨髓细胞即巨隧细胞、成纤维细胞、脂肪细胞和内皮细胞 组成。骨髓细胞通过提供促进细胞间接触的细胞外基质巧CM)蛋白和基底膜组分来保持 HIM功能完整性。它们还提供用于控制造血细胞分化和增殖所需的各种可溶性或常驻性细 胞因子。 需要HSC和基质之间的相互作用W保护HSC生存力并防止其分化。在HSC移植 后，移植的HSC在其增殖和分化之前必须归巢到骨髓度M)微环境并驻留在合适食中。在归 巢过程中，移植的HSC离开血流，并通过随趋化因子梯度穿过BM内皮细胞屏障到达专用食 来转移。然后供者HSC必须归巢到造血食，在那里它们遇到对其分裂更有利的微环境，在那 里HSC与间充质细胞、ECM和分泌的生长因子之间可建立连续统一的物理和化学接触。所 有运些过程设及一系列复杂的分子，例如细胞因子、趋化因子、激素、类固醇、细胞外基质蛋 白、生长因子、细胞间相互作用蛋白、黏附蛋白和基质蛋白。 植入到BM专用食的细胞总数构成HSC移植成功的基础。为了完成植入，移植到血 液循环的供者HSC应该归巢到其产生功能性血细胞生成集落化ematopoiesisfoci)的受 者骨髓中。运些灶的数目可从输注的HSC总数乘W其植入效率的积来推算。HSC移植设及的主要问题之一是运些细胞在接受者系统中存活率低。充分证明 的是，静脉内移植的HSC被从循环中清除并在其灌输后数分钟内在BM中显现。HSC移 植后3-5小时，在受者的外周血中检测不到供者细胞。灌输后不久大量的移 植细胞被破坏。因此，受者骨髓建群有效性低，移植后2-3天在受者BM中检测到的所输 注细胞仅为1-5 % 。 间充质基质细胞（MesenchymalstromalCell) (MSC)为异质细胞群，能够分化为 不同类型的成熟间充质细胞。运些细胞受到各种生物活性因子影响而分化为网状内皮细 胞、成纤维细胞、脂肪细胞和骨祖细胞（osteogenicprecursorcell)。MSC支持HSC植入的用途已为本领域所知。若干出版物已经证明当与间充质干细 胞共同移植时，HSC的植入效率更高。还证明了在人羊植入模型中共同移植人间充质干细胞导致促 进人HSC嵌合BM在动物中的长期植入。发现同时注射HSC和间充质干细胞加速血细胞生 成口hang等2004,StemCells. 22:1256-62]。最近，运些发现扩展到更近缘的动物模型一 雜猴。当共同移植单倍体同一'性化aploidentical)的HSC和间充质干细胞时，证明是促进 了服C植入。 显然，MSC对造血植入的贡献在于：产生帮助介导并平衡所移植服C的归巢、 自我更新和定向潜能的服C支持性细胞因子；复原受损的服C归巢和增殖所需造血微 环境；W及抑制源自供者的T细胞（可引起移植物抗宿主病（Gv皿)），。例站!，在Maitra的研究中发现在NOD-SCID小鼠模型中，人间充质干细胞支持非亲缘供者造血干细胞和受抑 制的T细胞激活，表明非亲缘源自人骨髓的MSC可改进同种异体移植结果。 使用MSC的一个主要障碍是难W分离大量的运些正常存在的细胞群，其从技术上 来说是困难的且耗费大，部分是由于细胞数量有限。MSC最明显的来源是骨髓，但设及获得 骨髓吸出物和活检风险的显著不便之处成为运些方法的缺点。人胚胎和胎儿形成独立生命 运一普遍持有观点使得人胚胎作为干细胞来源有了疑问，在已经存在的逻辑困难之上又增 加了宗教和伦理方面的问题。 近来已在尝试从备选来源中发现可收获的干细胞。运样的备选来源有例如：月旨 肪组织、毛囊、睾丸、人嗅粘膜、胚胎卵黄囊、胎盘、青少年皮肤和血液（例如厮带血甚至月 经血）。然而，从备选来源收获足够量的干细胞用于治疗和研究目的仍受限制且通常是 费事的，其设及例如从供者对象或患者收获细胞或组织、体外培养和/或繁殖细胞、解剖 (dissection)等等。 胎盘被认为是干细胞最有可能的来源之一，不设及任何不便之处或伦理约束。发 现源自胎盘的MSC具有与源自BM的MSC相似的特性。它们能粘附塑料，表达CD105、CD73 和CD90膜标记，且缺乏CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR表面分子的表达。然而，不象 源自81的15(：，经干扰素-丫处理的源自胎盘的15"91曰。6111曰（16'1￥6(1-15。？0-15〇极 低限度地上调HLA-DR。此外，PD-MSC细胞在干扰素-丫存在下显示出提高的免疫抑制特 性。（ChangCJ,化nMUChenYC,ChienCC,HuangHI,BaiCH,YenBL在干扰素-丫存 在下源自胎盘多潜能细胞显示出提高的免疫抑制特性（Placenta-derivedMultipotent Cellsexhibitimmunosuppressivepropertiesth曰tareenh曰needinthepresenceof inte;rfe;ron-gamma).StemCells.200 6N0V;24(II) :2466-77.)。[001引除MSC标记之外，PD-MSC还显示出独特的ESC表面标记SSEA-4、TRA-1-61和TRA-1-80,提示运些可能是极为原始的细胞。灯enB^HuangHI，ChienCC，化iHY，Ko BS，YaoM，aumCT,YenML,LeeMC,ChenYC.从人足月胎盘分离多潜能细胞（Isolation ofmultipotentcellsfromhumantermplacenta).StemCells. 2005 ;23 (I) :3-9)。 此外，PD-MSC(胎儿来源）而非源自BM的MSC对于细胞内人白细胞抗原-G(HLA)为阳性 (ChangCJ,化nMUChenYC,ChienCC,HuangHI，BaiCH，YenBL，在干扰素-丫存在下源 自胎盘多潜能细胞显示出提高的免疫抑制特性（Placenta-derivedMultipotentCells exhibitimmunosuppressivepropertiest本文档来自技高网...
【技术保护点】
制备药物组合物的方法，所述方法包括：‑在含有多个3D载体的生长培养基中引入粘附基质细胞(ASC)，其中所述3D载体包括选自聚酯、聚链烯、聚氟氯乙烯、聚氯乙烯、聚苯乙烯和聚砜的粘附材料，‑在生物反应器中孵育所述含有所述3D载体的生长培养基，以及‑从所述3D载体中取出所述ASC，从而制备药物组合物。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·梅雷茨基，Z·阿伯曼，O·伯格，
申请(专利权)人：普拉里斯坦有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL
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