一种T细胞培养基及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种T细胞培养基，其组分包括：RPMI‑1640培养基、白介素‑2、内皮细胞生长因子、胆固醇、甘油三酯和转铁蛋白。其中白介素‑2的终浓度为2～10μg/L，内皮细胞生长因子的终浓度为0.1～0.5μg/L，胆固醇的终浓度为30～100mg/L，甘油三酯的终浓度为80～200mg/L，转铁蛋白的终浓度为30～100mg/L。本发明专利技术还公开了上述T细胞培养基的制备方法，向RPMI‑1640培养基中依次加入白介素‑2、内皮细胞生长因子、胆固醇、甘油三酯和转铁蛋白，每一组分加入后应完全溶解并静置后再加入下一组分，接着调节pH值，然后滤膜过滤得到T细胞培养基。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及培养基
，尤其涉及一种T细胞培养基及其制备方法。
技术介绍
目前T细胞培养多用RPMI-1640或者DMEM培养基，但由于T细胞自身增殖能力不强，单纯的RPMI-1640或者DMEM培养基无法提高T细胞生长必须的营养成分，因此目前培养T细胞多用含有10～20wt％胎牛血清的RPMI-1640或者DMEM培养基。但是使用胎牛血清培养T细胞存在多种问题，不仅增加了培养基的成本，而且不同品牌的胎牛血清之间差异较大，另外由于胎牛血清中成分复杂，这些成分会严重影响后续实验的准确性和可靠性，培养基可重复性差，培养效率仅为15～20％。而且由于临床所使用的细胞制品严禁残留动物血清蛋白，而常规培养基中存在胎牛血清，工艺上需要增加细胞制成品中牛血清蛋白残余检测，增加了生产难度和成本，促使人们开始进行无血清培养基的开发。因此目前T细胞培养基存在培养效率不高、细胞活性低下、后续实验干扰、动物血清蛋白残留等较大的问题。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种T细胞培养基及其制备方法，提高了T细胞培养效率，增加细胞活性，保证后续实验的可重复性，降低了T细胞培养基的使用成本，而且避免动物血清蛋白的掺入，节省了T细胞培养基的配置工序和成本。本专利技术提出的一种T细胞培养基，其组分包括：RPMI-1640培养基、白介
素-2、内皮细胞生长因子、胆固醇、甘油三酯和转铁蛋白。优选地，白介素-2的终浓度为2～10μg/L，内皮细胞生长因子的终浓度为0.1～0.5μg/L，胆固醇的终浓度为30～100mg/L，甘油三酯的终浓度为80～200mg/L，转铁蛋白的终浓度为30～100mg/L。优选地，所述T细胞培养基的pH值为7.35～7.40。优选地，白介素-2的终浓度为5μg/L，内皮细胞生长因子的终浓度为0.2μg/L，胆固醇的终浓度为50mg/L，甘油三酯的终浓度为100mg/L，转铁蛋白的终浓度为50mg/L。本专利技术还提出的上述T细胞培养基的制备方法，向RPMI-1640培养基中加入白介素-2完全溶解后，静置，再加入内皮细胞生长因子完全溶解后，静置，接着加入胆固醇完全溶解后，静置，继续加入甘油三酯完全溶解后，静置，然后加入转铁蛋白完全溶解后，静置，接着调节pH值，然后滤膜过滤得到T细胞培养基。优选地，静置时间均为4～6min。优选地，采用丙酮酸钠调节pH。优选地，滤膜的孔径为0.1μm，用于去除培养基中的杂质及可能含有的微生物。本专利技术在RPMI-1640培养基的基础之上创新性地加入多种营养物质，包括白介素-2、内皮细胞生长因子、胆固醇、甘油三酯和转铁蛋白，使所得培养基中的各种成分浓度固定，提高了T细胞培养效率，增加细胞活性，保证后续实验的可重复性，降低了T细胞培养基的使用成本，而且避免动物血清蛋白的掺入，节省了T细胞培养基的配置工序和成本。具体实施方式下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1本专利技术提出的一种T细胞培养基，其组分包括：RPMI-1640培养基、白介素-2、内皮细胞生长因子、胆固醇、甘油三酯和转铁蛋白；其中白介素-2的终浓度为2μg/L，内皮细胞生长因子的终浓度为0.5μg/L，胆固醇的终浓度为30mg/L，甘油三酯的终浓度为200mg/L，转铁蛋白的终浓度为30mg/L。本专利技术还提出的上述T细胞培养基的制备方法，向RPMI-1640培养基中加入白介素-2完全溶解后，静置4min，再加入内皮细胞生长因子完全溶解后，静置6min，接着加入胆固醇完全溶解后，静置4min，继续加入甘油三酯完全溶解后，静置6min，然后加入转铁蛋白完全溶解后，静置4min，接着采用丙酮酸钠调节pH值至7.38，然后采用孔径为0.1μm的滤膜过滤得到T细胞培养基。实施例2本专利技术提出的一种T细胞培养基，其组分包括：RPMI-1640培养基、白介素-2、内皮细胞生长因子、胆固醇、甘油三酯和转铁蛋白；其中白介素-2的终浓度为10μg/L，内皮细胞生长因子的终浓度为0.1μg/L，胆固醇的终浓度为100mg/L，甘油三酯的终浓度为80mg/L，转铁蛋白的终浓度为100mg/L。本专利技术还提出的上述T细胞培养基的制备方法，向RPMI-1640培养基中加入白介素-2完全溶解后，静置6min，再加入内皮细胞生长因子完全溶解后，静置4min，接着加入胆固醇完全溶解后，静置6min，继续加入甘油三酯完全溶解后，静置4min，然后加入转铁蛋白完全溶解后，静置6min，接着采用丙酮酸钠调节pH值至7.35，然后滤膜过滤得到T细胞培养基。实施例3本专利技术提出的一种T细胞培养基，其组分包括：RPMI-1640培养基、白介
素-2、内皮细胞生长因子、胆固醇、甘油三酯和转铁蛋白；其中白介素-2的终浓度为5μg/L，内皮细胞生长因子的终浓度为0.2μg/L，胆固醇的终浓度为50mg/L，甘油三酯的终浓度为100mg/L，转铁蛋白的终浓度为50mg/L。本专利技术还提出的上述T细胞培养基的制备方法，在室温为20～25℃、湿度为40～60％、处于常压状态的二级生物安全柜中，向500mLRPMI-1640培养基中加入2.5μg白介素-2完全溶解后，静置5min，再加入0.1μg内皮细胞生长因子完全溶解后，静置5min，接着加入25mg胆固醇完全溶解后，静置5min，继续加入50mg甘油三酯完全溶解后，静置5min，然后加入25mg转铁蛋白完全溶解后，静置5min，接着采用丙酮酸钠调节pH值至7.40，然后采用孔径为0.1μm的滤膜过滤去除所有微生物得到T细胞培养基。实施例3所得T细胞培养基为酚红色液体，澄清无浑浊。取实施例3所得T细胞培养基在37℃、5％CO2条件下空培96h，外观无明显变化，显微镜下未见浑浊物。取实施例3所得T细胞培养基在37℃、5％CO2条件下培养T细胞，48h采用细胞计数及MTS法检测细胞活性，细胞培养效率达50％以上，具有增殖活性的T细胞>90％。以上所述，仅为本专利技术较佳的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围内，根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种T细胞培养基，其特征在于，其组分包括：RPMI‑1640培养基、白介素‑2、内皮细胞生长因子、胆固醇、甘油三酯和转铁蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种T细胞培养基，其特征在于，其组分包括：RPMI-1640培养基、白介素-2、内皮细胞生长因子、胆固醇、甘油三酯和转铁蛋白。2.根据权利要求1所述T细胞培养基，其特征在于，白介素-2的终浓度为2～10μg/L，内皮细胞生长因子的终浓度为0.1～0.5μg/L，胆固醇的终浓度为30～100mg/L，甘油三酯的终浓度为80～200mg/L，转铁蛋白的终浓度为30～100mg/L。3.根据权利要求1或2所述T细胞培养基，其特征在于，所述T细胞培养基的pH值为7.35～7.40。4.根据权利要求1-3任一项所述T细胞培养基，其特征在于，白介素-2的终浓度为5μg/L，内皮细胞生长因子的终浓度为0.2μg/L，胆固醇的终浓度为50mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁贵鹏，冯振卿，许国贞，刘振云，唐奇，朱进，
申请(专利权)人：安徽未名细胞治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34