抑制NEAT1用于治疗实体肿瘤制造技术

本申请涉及癌症领域，特别是实体肿瘤领域。人们发现特定的长非编码RNA(lncRNA)，NEAT1，核旁斑的必要架构组分，对于癌细胞的存活来说是必需的，但是对于正常的，非转化的细胞来说则并非如此。抑制NEAT1降低癌细胞的细胞生存力并且诱导细胞凋亡。这些数据将NEAT1鉴定为用于治疗实体肿瘤的新的治疗靶标。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本申请涉及癌症领域，特别是实体肿瘤领域。人们发现，一种特定的长非编码RNA(lncRNA)，NEAT1，核旁斑的必要架构组分，对于癌细胞的存活来说是必需的，但是对于正常的，非转化的细胞来说则并非如此。抑制NEAT1降低癌细胞的细胞生存力并且诱导凋亡。这些数据将NEAT1鉴定为用于治疗实体肿瘤的新的治疗靶标。背景p53是原型肿瘤抑制基因，然而，关于p53发挥其肿瘤抑制作用的机制，仍然有很多有待了解。已经描述了许多靶基因，直接和间接靶标，转录因子，蛋白质编码基因和非编码基因(例如，miRNA)。然而，尽管人们普遍认为p53是主要的细胞凋亡调节物，p53如何做到从静歇/存活切换至细胞凋亡仍然是未知的。由于在一些情况下p53甚至看起来有助于肿瘤发生，确定p53刺激或防止细胞凋亡(尤其是癌细胞的细胞凋亡)的机制将是有利的。此外，由于癌细胞已经发展了在次优环境中生存的增强的能力，甚至无论存在或不存在野生型p53，鉴定在p53下游调节细胞生存的靶标将是有利的。最优选地，这类靶标将允许选择性调节癌细胞中的途径，以便这些细胞可以被选择性地杀死。概要利用RNAseq和ChIPseq实验，NEAT1被鉴定为p53的直接靶基因。NEAT1是一种丰富的核长非编码RNA，其功能为核旁斑的必要架构组分。虽然旁斑的功能仍不清楚，转染研究表明它们分别通过结合特异性转录因子和/或经编辑的mRNA来调节基因转录和/或mRNA翻译。为了研究旁斑在体内的生理作用，产生了缺乏Neat1的小鼠。Neat1敲除(KO)的小鼠是有生存力的并且没有明显的表型，除了发育期乳腺分枝化形态发生中的缺陷以及降低的怀孕期间小叶肺泡发展和泌乳能力。尽管先前观察到当传代时Neat1表达和旁斑形成增加，本文中表明Neat1缺陷型小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)不显示任何显著生长缺陷，这提示Neat1和旁斑对于正常的，非转化的细胞的增殖和存活来说是可有可无的。相反，培养的癌细胞的存活依赖于NEAT1表达。使用LNA修饰的反义寡核苷酸的敲低NEAT1大幅度降低旁斑的数量、多种癌细胞系的代谢活性和生存力。虽然lncRNA NEAT1在体内在乳腺形态发生过程中起重要作用，总的来说，其表达在成年期是可有可无的。连同如下观察即NEAT1对于癌细胞的存活来说是必需的，但是对于正常的/非转化的细胞来说则并非如此，这些数据将NEAT1鉴定为用于癌症治疗的治疗靶标。本专利技术的目标是提供NETA1基因的功能性表达的抑制剂。这样的抑制剂可以在DNA水平上起作用，或者在RNA(即，基因产物)水平上起作用。由于NEAT1是非编码基因，因此对于该基因来说没有蛋白产物。根据另一个方面，提供NEAT1的功能性表达的抑制剂，用作药物。根据又一些方面，提供NEAT1的功能性表达的抑制剂，用于在癌症的治疗中使用，尤其是用于在实体肿瘤的治疗中使用。在又一些实施方案中，提供抑制剂，用于在上皮癌(carcinoma)(即，源自上皮细胞的癌症)的治疗中使用。根据备选的实施方案，提供抑制剂，用于在以下癌症的治疗中使用，所述癌症选自乳腺癌、皮肤癌、骨肉瘤、结肠直肠癌和神经母细胞瘤的组。根据非常具体的实施方案，所述皮肤癌是非黑色素瘤皮肤癌，通常选自BCC(基底细胞癌)或SCC(鳞状细胞癌)。这等同于说，提供治疗有需要的对象中的实体肿瘤的方法，包括将NEAT1的功能性表达的抑制剂施用给所述对象。同样地，其等同于提供治疗上皮癌的方法，或治疗选自乳腺癌、皮肤癌、骨肉瘤、结肠直肠癌和神经母细胞瘤的组的癌症的方法，其中将NEAT1的功能性表达的抑制剂提供给所述对象。抑制剂的性质对于本专利技术来说不是至关重要的，只要它抑制NEAT1基因的功能性表达即可。根据具体的实施方案，所述抑制剂选自gapmer、shRNA、siRNA、CRISPR、TALEN、锌指核酸酶或小分子。根据具体的实施方案，所述抑制剂被施加至或者被靶向至癌细胞(如，实体肿瘤细胞)。根据备选的(但不是排他的)具体实施方案，抑制剂在癌细胞中选择性地诱导细胞凋亡。这尤其意味着它在癌(例如上皮癌)细胞中诱导细胞凋亡，但是不在正常的(非转化的)类似细胞(例如上皮细胞)中诱导细胞凋亡。根据另外的具体实施方案，抑制剂诱导细胞凋亡不依赖于p53状态，例如，不依赖于p53是否具有特定的突变，或不依赖于其表达水平。本文中表明，NEAT1抑制干扰DNA修复途径，尤其是干扰双链修复机制(如，同源重组(HR)和非同源末端连接(NHEJ))。这意味着其中NEAT1被抑制的细胞将对剩余的单链修复途径(切除修复途径)如，碱基切除修复(BER)的抑制特别敏感，然而其中NEAT1未被抑制的细胞将对这种治疗不敏感得多。因此，根据特别的实施方案，提供了DNA切除修复酶的抑制剂与NEAT1的功能性表达的抑制剂的组合，用于在癌症的治疗中使用。预期这会在细胞中诱导合成致死。根据具体的实施方案，DNA切除修复酶的抑制剂是DNA碱基切除修复酶的抑制剂。根据进一步的具体实施方案，DNA碱基切除修复酶的抑制剂是PARP抑制剂。此外，本文中表明，NEAT1控制线粒体动力学，并且这可能也有助于其致癌活性。对于MFF的表达来说，NEAT1是必需的，而MFF反过来又调节线粒体分裂。失去NEAT1导致MFF表达显著减少，并最终导致肿胀的线粒体以及对氧化胁迫和/或致癌胁迫的增加的敏感性。靶向NEAT1使得癌细胞对氧化胁迫极为敏感。因此，根据具体的实施方案，提供了增加氧化胁迫的活性剂与NEAT1的功能性表达的抑制剂的组合，其用于在癌症的治疗中使用。预期这也会在细胞中诱导合成致死。这类增加氧化胁迫的活性剂的例子在本领域中是已知的，并且，包括(但不限于)例如鱼藤酮、H2O2、tBHP、冈田酸。根据类似的方面，提供了治疗癌症的方法，包括将NEAT1的功能性表达的抑制剂施用给有需要的对象，该方法可以进一步包括施用DNA碱基切除修复酶的抑制剂。这可以作为组合治疗(即，伴随施用或同时施用)而完成，或者可以通过分别施用所述化合物来完成，但尤其是通过随后的施用(即，在彼此的有限时间范围内，使得两种抑制剂在对象中同时有活性)来完成。根据另一个方面，提供了鉴定肿瘤是否适合于用NEAT1的功能性表达的抑制剂治疗的方法。这些方法通常具有以下步骤：‐确定在肿瘤中或者在肿瘤细胞的样品中NEAT1的表达是否增加；‐确立肿瘤是否是适合于治疗，其中增加的表达表明治疗的适合性。通常，肿瘤将是实体肿瘤。因此这些方法可以包括提供(实体)肿瘤细胞样品的第一步骤。确定步骤可以完全在体外发生，即，没有在人体或动物体上相互作用的步骤。根据特定的实施方案，所述肿瘤是上皮癌。根据备选的实施方案，所述肿瘤选自乳腺癌、皮肤癌、骨肉瘤、结肠直肠癌和神经母细胞瘤。根据具体的实施方案，当确立了肿瘤适合于治疗时，该方法可以进一步包括将NEAT1的功能性表达的抑制剂施用给其中存在肿瘤的对象的步骤。这是为了治疗肿瘤。这些抑制剂还可以与例如DNA切除修复酶的抑制剂或增加氧化胁迫的活性剂组合。附图的简要说明图1提供的证据表明，NEAT1在乳腺癌细胞系MCF-7中是直接的p53靶基因。RNA-seq和p53ChIPseq实验已在暴露于MDM2拮抗剂Nutlin3a24小时后的MCF-本文档来自技高网...

【技术保护点】
NEAT1的功能性表达的抑制剂，其用作药物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.02.07 EP 14154284.51.NEAT1的功能性表达的抑制剂，其用作药物。2.NEAT1的功能性表达的抑制剂，其用于治疗癌症，特别是实体肿瘤。3.权利要求2的抑制剂，其中实体肿瘤是上皮癌。4.权利要求2的抑制剂，其中实体肿瘤选自乳腺癌、皮肤癌、骨肉瘤、结肠直肠癌和神经母细胞瘤的组。5.权利要求1至4中任一项的抑制剂，其选自gapmer、shRNA、siRNA、CRISPR、TALEN或锌指核酸酶。6.根据权利要求2至5中任一项的抑制剂，其在癌细胞中选择性地诱导细胞凋亡。7.DNA碱基切除修复酶的抑制剂与NEAT1的功能性表达的抑制剂的组合，所述组合用于治疗癌症。8.权利要求7的组合，其中DNA碱基切除修复酶的抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：JC·马林，L·斯坦德尔特，
申请(专利权)人：非营利性组织佛兰芒综合大学生物技术研究所，天主教鲁汶大学研究发展中心，
类型：发明
国别省市：比利时;BE