用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂制造技术

本公开涉及用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂。本公开涉及含有发动蛋白2抑制剂的药物组合物，并涉及所述药物组合物在治疗中央核性肌病中的用途。本公开还涉及对有益于治疗中央核性肌病的分子进行识别或筛选的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及用于治疗中央核性肌病(centronuclear myopathies)的发动蛋白2抑制剂。本公开还涉及包含发动蛋白2抑制剂的药物组合物及其在治疗中央核性肌病中的用途。
技术介绍
中央核性肌病(CNM)是一类先天性肌病，其表征为肌肉力弱，并在组织学上由纤维萎缩、I型纤维占优势以及核中央化的增加而确认，并非是继发于肌肉再生。已表征了CNM的三种主要形式：由于磷酸肌醇磷酸酶肌管素(MTM1)突变造成的X连锁CNM(XLCNM，也称为肌管肌病，OMIM 310400)(Laporte，J.等，Nature Genetics，1996，13(2)：175-82页)；由于膜重塑蛋白双载蛋白(amphiphysin)2(BIN1)突变造成的常染色体隐性CNM(ARCNM，OMIM 255200)(Nicot，A.S.等，Nature Genetics，2007，39(9)：1134-9页)；以及由于发动蛋白2(DNM2)突变(Bitoun，M.等，Nature Genetics，2005，37(11)：1207-9页)或由于其它基因(如BIN1)突变(Bohm等，Brain，2014年9月25日，pii：awu272，[印刷版之前的电子出版])造成的常染色体显性CNM(ADCNM，OMIM 160150)。已将CNM样肌病与其它基因相关联：编码兰诺定受体(ryanodine receptor)的RYR1；编码肌联蛋白的TTN；CCDC78(OMIM 614807)；以及磷酸肌醇磷酸酶MTMR14(称为hJUMPY；OMIM 160150)。所牵涉的这些基因之间的遗传关系尚不明确，并且缺乏有效的治疗方法。X连锁中央核性肌病也称为肌管肌病，是最常见且最严重的CNM形式，新生儿发病和死亡通常发生在生命的第一年(Jungbluth，H.等，Orphanet J Rare Dis，2008，3：第26页)。这种疾病目前既无法治愈，也无有效治疗。目前为止已经报道了约450个家族中的超过200种不同的MTM1突变，其中大部分导致蛋白大量减少。之前已对Mtm1敲除或敲入的小鼠进行了表征，其重现了CNM表型，具有典型的组织学特征，包括细胞器定位异常、细胞核定位错误和肌肉萎缩，并伴有肌肉力量相应下降。已
在具有不同形式CNM的数种动物模型和患者中检测到与异常兴奋-收缩偶联相关的三联体(triads)结构缺陷，在全部CNM形式中识别出共同缺陷(Defects in amphiphysin 2(BIN1)and triads in several forms of centronuclear myopathies，Toussaint，A.等，Acta Neuropathol，2011年2月；121(2)：253-66)。这与所提出的MTM1在三联体肌质网部分的磷酸肌醇水平调节中的作用相一致。发动蛋白是在膜运输(trafficking)、胞吞作用以及肌动蛋白细胞骨架组装中起重要作用的大GTPase蛋白。发动蛋白包含用于蛋白-蛋白相互作用的PRD(富含脯氨酸的结构域)、N-末端GTPase结构域、中间结构域、PH结构域(磷酸肌醇结合)和GED(GTPase效应结构域)。已经鉴别了三种人发动蛋白：发动蛋白1，仅在神经元中表达；发动蛋白3，主要在脑和睾丸中表达；以及发动蛋白2(DNM2)，普遍表达。已经在组织特异性疾病中鉴别了不同的杂合DNM2突变：影响骨骼肌的常染色体显性中央核性肌病；以及常染色体显性Charcot-Marie-Tooth(CMTDIB，OMIM 606482)周围神经病变。最近的生化研究表明，一些导致CNM的DNM2突变使得发动蛋白寡聚物稳定性以及GTPase活性升高。在小鼠中，借助最常见的CNM-DNM2患者突变(p.R465W)的敲入或过表达进行体内补偿，这在成年小鼠中诱导CNM样特征，表明该疾病不归因于单倍体不足(haploinsufficiency)。野生型(WT)DNM2的过表达也对肌肉造成干扰，不过程度较小。专利申请WO 2013/0065558描述了miR-133a对DNM2表达起到调制作用。由于CNM中DNM2是突变的，指出miR-133家族成员的激动剂可能有利于中央核性肌病的治疗。然而，miR-133具有多个靶标(参见miRNA靶标预测和功能注释的在线数据库，例如http://mirdb.org/miRDB/，给出了miRDB中的hsa-miR-133a的226个预测靶标，其中没有DNM2，利用其它在线数据库也得到相同类型的结果)。由于miR-133具有多个靶标而没有选择性，这可能具有有害影响。此外，至今没有利用miR133递送来改善CNM的报道。因此，对于中央核性肌病的合适治疗方法，特别是新的、更有效的治疗剂具有显著需求。
技术实现思路
对具有前景的中央核性肌病疗法的探索使得专利技术人发现，DNM2的下调可以预防、阻止并潜在地逆转(overturn)XLCNM表型的进展。此外，经确认，MTM1在肌肉组织化和肌肉力量中起着DNM2的负调节因子的作用。尽管DNM2是重要细胞过程的关键动力酶(mechanoenzyme)，其减少对于XLCNM和其它中央核性肌病是非常有利的，并因此代表了新的潜在治疗手段。本文展示的工作表明，DNM2的下调对中央核性肌病具有强效治疗作用。在第一方面，本专利技术涉及用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂。在具体的实施方式中，所述中央核性肌病选自于由如下疾病所组成的组：X连锁CNM(XLCNM)、常染色体隐性CNM(ARCNM)和常染色体显性CNM(ADCNM)。在优选的实施方式中，所述中央核性肌病是XLCNM或ARCNM。本专利技术还涉及用于治疗中央核性肌病的药物组合物，所述药物组合物包含发动蛋白2抑制剂和药学上可接受的载体/赋形剂。本专利技术进一步涉及用于治疗中央核性肌病的方法，其中，该方法包括将治疗有效量的发动蛋白2抑制剂给予需要此类治疗的受试者的步骤。最后，本专利技术涉及发动蛋白2抑制剂在制备用于治疗中央核性肌病的药物组合物中的用途。所述发动蛋白2抑制剂优选选自于由如下抑制剂所组成的组：针对发动蛋白2的抗体；特异性干扰发动蛋白2表达的核酸分子；以及抑制发动蛋白2的活性、表达或功能的小分子。在优选的实施方式中，所述发动蛋白2抑制剂选自于由特异性干扰发动蛋白2表达的核酸分子所组成的组。在具体的实施方式中，所述发动蛋白2抑制剂是特异性干扰发动蛋白2表达的核酶、RNAi或反义核酸。在更具体的实施方式中，所述发动蛋白2抑制剂是siRNA、shRNA或反义snRNA。本专利技术进一步的目标涉及对有益于治疗中央核性肌病的化合物进行筛选或识别的方法，所述方法包括如下步骤：a)提供或获得候选化合物；以及b)确定所述候选化合物是否抑制发动蛋白2的活性/表达；c)如果所述候选化合物抑制发动蛋白2的活性/表达，选择所述候选化合物。对适于治疗中央核性肌病的分子进行筛选或识别的方法可任选地进一步包括如下步骤：在体内或体外将所选择的分子给予中央核性肌病非人动物模型或其部分(组织或细胞)，并分析对肌病发病或进展的作用。在对本专利技术进行详细描述之后，本专利技术的这些及其它目的和实施方式将变得更本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂，其中，所述发动蛋白2抑制剂选自于由如下抑制剂所组成的组：针对发动蛋白2的抗体；特异性干扰发动蛋白2表达的核酸分子；以及抑制发动蛋白2的活性、表达或功能的小分子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.18 EP 13306440.21.一种用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂，其中，所述发动蛋白2抑制剂选自于由如下抑制剂所组成的组：针对发动蛋白2的抗体；特异性干扰发动蛋白2表达的核酸分子；以及抑制发动蛋白2的活性、表达或功能的小分子。2.根据权利要求1所述的用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂，其中，所述小分子选自于由如下小分子所组成的组：3-羟基萘-2-甲酸(3,4-二羟基苯亚甲基)酰肼；3-羟基-N'-[(2,4,5-三羟基苯基)亚甲基]萘-2-甲酰肼；十四烷基三甲基溴化铵；4-氯-2-((2-(3-硝基苯基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-5-羰基)-氨基)-苯甲酸；2-氰基-N-辛基-3-[1-(3-二甲基氨丙基)-1H-吲哚-3-基]丙烯酰胺；3-(2,4-二氯-5-甲氧基苯基)-2-硫烷基喹唑啉-4(3H)-酮；N,N'-(丙烷-1,3-二基)双(7,8-二羟基-2-亚氨基-2H-苯并吡喃-3-甲酰胺)；N,N'-(乙烷-1,2-二基)双(7,8-二羟基-2-亚氨基-2H-苯并吡喃-3-甲酰胺)；十八烷基三甲基溴化铵；具有氨基酸序列QVPSRPNRAP的发动蛋白抑制肽；3-羟基-N'-[(2,4,5-三羟基苯基)亚甲基]萘-2-甲酰肼；和4-(N,N-二甲基-N-十八烷基-N-乙基)-4-氮杂-10-氧杂三环-[5.2.1]癸烷-3,5-二酮溴化物。3.根据权利要求1或2所述的用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂，其中，所述中央核性肌病选自于由如下疾病所组成的组：X连锁CNM、常染色体隐性CNM和常染色体显性CNM。4.根据权利要求1或2所述的用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂，其中，所述中央核性肌病是X连锁CNM或常染色体隐性CNM。5.根据权利要求1或2所述的用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂，其中，所述中央核性肌病是由BIN1突变造成的中央核性肌病。6.根据权利要求1、3、4和5中任一项所述的用于治疗中央核性肌
\t病的发动蛋白2抑制剂，其中，所述发动蛋白2抑制剂选自于由如下抑制剂所组成的组：针对发动蛋白2的抗体；或特异性干扰发动蛋白2表达的核酸分子。7.根据权利要求1、3、4、5和6中任一项所述的用于治疗中央核性肌病的发动蛋白2抑制剂，其中，所述发动蛋白2抑制剂是特异性干扰发动蛋白2表达的核酶、RNAi或反义核酸，优选地，所述发动蛋白2抑制剂是siRNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔斯林·拉波特，贝林达·考林，伊莎姆·塔斯法欧特，
申请(专利权)人：斯特拉斯堡大学，法国国家科学研究中心，国家健康医学研究所，
类型：发明
国别省市：法国;FR