用于基因表达控制的人工模拟miRNA及其用途制造技术

本发明专利技术提供一种利用了miRNA的新的人工模拟miRNA。将单链核酸作为人工模拟miRNA，所述单链核酸的X区域和Y区域连结，所述X区域为成熟miRNA的引导链序列或其部分序列，由相对于所述Y区域的连结侧区域(XB)及非连结侧区域(XF)构成，所述连结侧区域(XB)为在该区域内不进行分子内退火的序列，所述Y区域为与所述X区域的所述非连结侧区域(XF)进行分子内退火的序列。根据该人工模拟miRNA，可以抑制所述目标基因的表达。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种抑制基因表达的人工模拟miRNA及其用途。
技术介绍
已知微RNA(miRNA)作为抑制基因的表达的核酸分子，例如，报道有经过如下的生成工艺抑制基因所编码的蛋白质的转录。即，首先在核内生成miRNA转录产物(Pri-miRNA)。所述Pri-miRNA在5’末端具有帽子结构，在3’末端具有聚(A)。该Pri-miRNA被RNase(Drosha)切断，生成miRNA前体(Pre-miRNA)。所述Pre-miRNA采取具有环区域和茎区域的发夹结构。该Pre-miRNA移动至核外之后，被细胞质的RNase(Dicer)分解，双链的miRNA(成熟miRNA)被切出。所述成熟miRNA在各链的3’末端具有1～4个碱基的突出端。该双链的miRNA中，一条链被称为引导链，另一条链被称为过客链，所述引导链与类似于RNA诱导沉默复合体(RNA inducedSilencing Complex，RISC)的复合体结合。通过该miRNA/RISC复合体与特定的mRNA的3’非翻译区域(3’UTR)结合，抑制来自所述mRNA的蛋白质的翻译。已知miRNA与分化、细胞增殖、凋亡等生命现象或病毒感染症，癌等许多疾病密切相关(专利文献1、非专利文献1、非专利文献2)。由此，特别期待医疗区域中的应用。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2010/056737A2非专利文献非专利文献1：Deiters,2009,The AAPS Journal,12,51-60非专利文献2：Takeshita etal.,2010,Mol.Ther.,18,181-187专利技术内容专利技术所要解决的问题在应用所述miRNA时，例如有使用双链的成熟miRNA的方法、使用所述成熟miRNA被切出之前的miRNA前体(Pre-miRNA)的方法等。但是，前者在使用之前必需将两条中的一条链核酸分子进行退火，有可能通过识别双链的TLR3等而产生自我免疫。另外，后者一般而言成为约50～180个碱基长、主要约70个碱基长的长核酸分子，因此，担心合成的成本高。因此，本专利技术的目的在于，提供利用了miRNA的新的人工模拟miRNA。用于解决问题的方案为了实现上述目的，本专利技术的人工模拟miRNA的特征在于，为X区域和Y区域连结成的单链核酸，所述X区域为成熟miRNA的引导链序列或其部分序列，由相对于所述Y区域的连结侧区域(XB)及非连结侧区域(XF)构成，所述连结侧区域(XB)为在该区域内不进行分子内退火的序列，所述Y区域为与所述X区域的所述非连结侧区域(XF)进行分子内退火的序列。本专利技术的组合物为用于抑制基因的表达的组合物，其特征在于，含有所述本专利技术的人工模拟miRNA。本专利技术的组合物为药物组合物，其特征在于，含有所述本专利技术的人工模拟miRNA。本专利技术的表达抑制方法为抑制目标基因的表达的方法，其特征在于，使用所述本专利技术的人工模拟miRNA。本专利技术的疾病的治疗方法的特征在于，包含将所述本专利技术的人工模拟miRNA给药于患者的工序，所述人工模拟miRNA中的所述引导链或其部分序列为抑制参与所述疾病的基因的表达的成熟miRNA的引导链或其部分序列。本专利技术的核酸分子为用于疾病的治疗的人工模拟miRNA，其特征在于，所述人工模拟miRNA为所述本专利技术的人工模拟miRNA，所述人工模拟miRNA中的所述引导链或其部分序列为抑制参与所述疾病的基因的表达的成熟miRNA的引导链或其部分序列。专利技术效果根据本专利技术的人工模拟miRNA，可以容易地以低成本合成，且可以抑制所述基因所编码的蛋白质的翻译。附图说明图1是表示本专利技术的人工模拟miRNA的一例的概略图。图2是表示本专利技术的人工模拟miRNA的一例的概略图。图3是表示本专利技术的实施例1中的AXL mRNA量的相对值的图表。图4是表示本专利技术的实施例1中的MET mRNA量的相对值的图表。图5是表示本专利技术的实施例1中的CDK6mRNA量的相对值的图表。图6是表示本专利技术的实施例2中的AXL mRNA量的相对值的图表。图7是表示本专利技术的实施例2中的MET mRNA量的相对值的图表。图8是表示本专利技术的实施例3中的AXL mRNA量的相对值的图表。图9是表示本专利技术的实施例4中的HMGA2mRNA量的相对值的图
表。图10是表示本专利技术的实施例5中的AXL mRNA量的相对值的图表。图11是表示本专利技术的实施例5中的表达细胞数的图表。图12是表示本专利技术的实施例6中的细胞因子mRNA量的相对值的图表。图13是表示本专利技术的实施例7中的CAB39mRNA量的相对值的图表。图14是表示利用本专利技术的实施例7中的miRNA抑制表达的基因的数的图表。图15是在本专利技术的实施例8中表示人Dicer1mRNA中的CRISPR/Cas9引导链的杂交的位置的概略图。图16是表示本专利技术的实施例8中的AXL mRNA量的相对值的图表。图17是在本专利技术的实施例8中表示人AGO mRNA中的CRISPR/Cas9引导链的杂交的位置的概略图。图18是表示本专利技术的实施例8中的AXL mRNA量的相对值的图表。图19是表示本专利技术的实施例9中的胚重量、肿瘤的体积比例、肿瘤块的数量的图表。具体实施方式只要没有特别提及，本说明书中使用的用语可以以本
中所通常使用的含义使用。本专利技术的人工模拟miRNA例如所述X区域配置于5’侧，所述Y区域配置于3’侧。本专利技术的人工模拟miRNA例如所述X区域中的所述连结侧区域(XB)为0～12个碱基长。本专利技术的人工模拟miRNA例如在所述非连结侧区域(XF)中，0～6个碱
基相对于所述Y区域为非互补的碱基。本专利技术的人工模拟miRNA例如所述Y区域在与所述X区域未连结的末端侧具有突出端。本专利技术的人工模拟miRNA例如所述突出端为0～4个碱基长。本专利技术的人工模拟miRNA例如所述引导链的部分序列为在所述引导链中3’末端侧的碱基缺失的序列。本专利技术的人工模拟miRNA例如所述引导链的部分序列为在所述引导链中3’末端侧的1～10个碱基缺失的序列。本专利技术的人工模拟miRNA例如所述引导链的部分序列为在所述引导链中3’末端的1个碱基缺失的序列、或在所述引导链中从3’末端连续的2～10个碱基长缺失的序列。本专利技术的人工模拟miRNA例如所述成熟miRNA为miR-34a。本专利技术的人工模拟miRNA例如所述X区域为12～24个碱基长，所述Y区域为6～18个碱基长。本专利技术的人工模拟miRNA例如全长为18～42个碱基长。本专利技术的表达抑制方法例如包含将所述人工模拟miRNA给药于细胞、组织或器官的工序。本专利技术的表达抑制方法例如将所述人工模拟miRNA在活体内或活体外进行给药。
本专利技术的表达抑制方法例如将所述人工模拟miRNA给药于非人动物。(1)人工模拟miRNA本专利技术的人工模拟miRNA如上所述，其特征在于，为X区域和Y区域连结成的单链核酸，所述X区域为成熟miRNA的引导链序列或其部分序列，由相对于所述Y区域的连结侧区域(XB)及非连结侧区域(XF)构成，所述连结侧区域(XB)为在该区域内不进行分子内退火的序列，所述Y区域为与所述X区域的所述非连结侧区域(XF)进行分子内退火的序列。本专利技术的人工模拟miRNA例如可以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人工模拟miRNA，其特征在于，为X区域和Y区域连结成的单链核酸，所述X区域为成熟miRNA的引导链序列或其部分序列，由相对于所述Y区域的连结侧区域(XB)及非连结侧区域(XF)构成，所述连结侧区域(XB)为在该区域内不进行分子内退火的序列，所述Y区域包含与所述X区域的所述非连结侧区域(XF)进行分子内退火的序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.26 JP 2013-2695991.一种人工模拟miRNA，其特征在于，为X区域和Y区域连结成的单链核酸，所述X区域为成熟miRNA的引导链序列或其部分序列，由相对于所述Y区域的连结侧区域(XB)及非连结侧区域(XF)构成，所述连结侧区域(XB)为在该区域内不进行分子内退火的序列，所述Y区域包含与所述X区域的所述非连结侧区域(XF)进行分子内退火的序列。2.根据权利要求1所述的人工模拟miRNA，其中，所述X区域配置于5’侧，所述Y区域配置于3’侧。3.根据权利要求1或2所述的人工模拟miRNA，其中，所述X区域中的所述连结侧区域(XB)为0～12个碱基长。4.根据权利要求1～3中任一项所述的人工模拟miRNA，其中，在所述非连结侧区域(XF)，0～6个碱基相对于所述Y区域为非互补的碱基。5.根据权利要求1～4中任一项所述的人工模拟miRNA，其中，所述Y区域在与所述X区域未连结的末端侧具有突出端。6.根据权利要求5所述的人工模拟miRNA，其中，所述突出端为0～4个碱基长。7.根据权利要求1～6中任一项所述的人工模拟miRNA，其中，所述引导链的部分序列为在所述引导链中3’末端侧的碱基缺失的序列。8.根据权利要求7所述的人工模拟miRNA，其中，所述引导链的部分序列为在所述引导链中3’末端侧的1～10个碱基缺失的序列。9.根据权利要求7所述的人工模拟miRNA，其中，所述引导链的部分序列为在所述引导链中3’末端的1个碱基缺失的序列、或在所述引导链中从3’末端连续的2～10个碱基长缺失的序列。10.根据权利要求1～9中任一项所述的人工模拟miRNA，其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黑田雅彦，大野慎一郎，
申请(专利权)人：学校法人东京医科大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP