一株粘质沙雷氏菌及其在抑制肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株粘质沙雷氏菌，该菌株分类命名为沙雷氏菌Serratia sp.已于2016年01月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.11987。本发明专利技术的粘质沙雷氏菌，对A549非小细胞肺癌和S180腹水瘤的抑制效果明显，疗效非常突出，因此，可以以该粘质沙雷氏菌为原料制备用于抑制肿瘤的药物，比如：培养该菌获得培养物，并添加或不添加其它药物、辅料等加工制备成菌剂。本发明专利技术为研究沙雷氏菌的抑制肿瘤机制、用途、药物开发等提供了优良的菌种资源。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株粘质沙雷氏菌，及其在抑制肿瘤中的应用，属于生物

技术介绍
WHO《全球癌症报告2014》数据显示，2012年全球癌症患者和死亡病例都在增加，新增病例近一半出现在亚洲，其中大部分在中国、印度。在肝、食道、胃和肺等4种恶性肿瘤中，中国新增病例和死亡人数均居世界首位。手术治疗有效，但多数患者就诊时已经错过手术时机，只能依赖化疗、放疗，疗效不佳。寻找新机制的治疗方法是领域内不懈的追求。二十世纪八十年代，有人发现细菌感染者的皮肤癌、淋巴癌和白血病患病几率较低，且发现这些细菌注入动物体内会导致肿瘤萎缩，从此细菌及其产物治疗肿瘤成为热门课题之一。沙雷氏菌是众多具有抑瘤效果的细菌之一。有关沙雷氏菌治疗恶性肿瘤实验研究和临床研究均不乏报道，1997年靳小青等发现粘质沙雷氏菌S311抑制小鼠艾氏腹水癌，小鼠P388白血病，小鼠B16黑色素瘤肺转移和小鼠Lewis肺癌肿瘤细胞；2003年靳小青采用小鼠模型研究粘质沙雷氏菌苗的抑制肿瘤的效果，提示腹腔注射可明显抑制小鼠HCA的原发灶和转移灶、抑制肿瘤转移和复发。1993年HavasHF首先将粘质沙雷氏菌复方制剂用至临床11例难治性恶性肿瘤，发现1例轻微反应，1例部分反应，4例病情暂时稳定，5例病情进展，其中一例艾滋病Kaposi's肉瘤患者病情得到改善。有关粘质沙雷氏菌治疗肿瘤的报道资料国内多于国外，1999年徐永茂等通过胸、腹腔内注射观察了粘质沙雷氏菌S311的疗效，发现<br>在5例癌性胸水患者中4例完全缓解，在9例癌性腹水患者中5例完全缓解。2000年顾建庆将粘质沙雷氏菌S311制剂进行了Ⅰ期临床试验，结果提示制剂对胸水有效。2000年张沂平临床资料报道粘质沙雷氏菌S311制剂对恶性胸腔积液有效率为88.6％，完全缓解率48.6％，尤其对少、中量积液疗效较好。2001年朱允中在Ⅱ临床试验中对241恶性胸水做了观察，总有效率92.1％，且部分胸水癌细胞转阴。2002年茅国新报道粘质沙雷氏菌制剂控制癌性胸腔积液有效率达90.6％，生活质量改善率为84.4％，0.5年、1年、1.5年生存率分别是：93.8％、62.5％、40.6％，毒副反应为胸痛(18.8％)和发热(15.6％)。2007年王庆蓉对18例脑神经胶质细胞瘤术后患者进行观察，采用化疗囊瘤内注射，发现1、2、4年的生存率分别为72.2％、55.68％、55.68％，高于对照组。2002年何晓文采用改良端粒重复序列扩增(TRAP)-银染方法检测20例膀胱移行上皮细胞癌肿瘤组织粘质沙雷氏菌制剂灌注前后的端粒酶活性，发现粘质沙雷氏菌制剂可使肿瘤组织端粒酶活性降低。有关沙雷氏菌的抑瘤现象已被诸多实验资料证实，但是其疗效机制至今研究不明；综合诸多资料，其抑瘤机制可归纳为两个主要途径，抑瘤机制之一是粘质沙雷氏菌胞壁含有多种对肿瘤细胞直接细胞毒活性，具有直接杀伤肿瘤细胞的作用，比如1994年赵虎等人发现粘质沙雷氏菌能够直接杀伤体外培养的SMMC-7721细胞株、HeLa细胞株、KM3细胞株、S0肉瘤细胞株等肿瘤细胞，对正常组织细胞无明显的影响作用。还有些人认为粘质沙雷氏菌抑制肿瘤的疗效与其在28℃产生的灵菌红素有关，且进行了提纯，新合成的PG衍生物GX15-070，作为多种癌症的治疗药物，已进入临床Ⅱ期研究。根据NIC公布的数据,灵菌红素对人60个常见癌细胞株的平均IC50值约为2.1μM，灵菌红素NSC编号为47147-F。抑瘤机制之二则认为粘质沙雷氏菌的抑瘤效果与免疫调节机制有关。资料提示，粘质沙雷氏菌制剂具有巨噬细胞及T淋巴系统刺激活性，可诱导巨噬细胞吞噬功能增强和分泌肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)、白介素1(IL-1)及IL-2等免疫因子，可增强NK细胞杀伤活性，可抑制肿瘤转移相关基因nm23-1和Tiam-1的表达。比如粘质沙雷氏菌DNA含有的“CpG结构”，具有强大的免疫调节作用，能活化NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞等抗原提呈细胞，使之产生IFN和IL-12等Th1细胞因子，从而抑制Th2细胞因子IL-4、IL-5的产生，并阻断IgE的合成，从而有效抑制反应原诱导的高反应性及变态反应性改变，改善免疫功能的紊乱。同时粘质沙雷氏菌可以提高外周血及局部灌注周围组织的T细胞亚群的功能，CD4+和CD8+细胞增加，改善机体免疫功能低下，激活免疫系统，纠正细胞免疫及体液免疫的异常，从而促进疾病的恢复。总之，对于粘质沙雷氏菌，前人虽然已做了许多研究，也公开过多个专利资料，但终因疗效不够突出至今没有发展成真正的临床药物，一直停留在实验室研究阶段。
技术实现思路
针对上述现有技术，为了获得更加突出的抑瘤效果的沙雷氏菌，本专利技术对引自中国菌种库的沙雷氏菌进行了紫外诱变，并采用抑瘤实验、观察抑瘤效果，筛选获得了一株对A549实体瘤和S180腹水瘤疗效非常突出的粘质沙雷氏突变菌株，而且疗效是在不产生灵菌红素的情况下产生的。经16SrDNA测序、比对，确定所筛选菌株为粘质沙雷氏菌。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一株粘质沙雷氏菌，该菌株分类命名为沙雷氏菌Serratiasp.,已于2016年01月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.11987。所述粘质沙雷氏菌的16SrDNA序列，经与Genbank中其它菌的16SrDNA序列相比对，此菌株与Genbank中Serratiasp.CH-B17同源性为99.79％；与Serratiasp.EBL4相似率99.78％，SerratiamarcescensstrainTCCC11387相似率99.77％，SerratiamarcescensstrainAU1209相似率99.76％，SerratiamarcescensstrainSER1相似率99.437％，这些菌株同属于粘质沙雷氏菌。所述粘质沙雷氏菌，经实验证明，对A549实体瘤和S180腹水瘤的抑制效果明显，疗效非常突出，因此，可以以该粘质沙雷氏菌为原料制备用于抑制肿瘤的药物，比如：培养该菌获得培养物，并添加或不添加其它药物、辅料等加工制备成菌剂。本专利技术为研究沙雷氏菌的抑制肿瘤机制、用途、药物开发等提供了优良的菌种资源。附图说明一株粘质沙雷氏菌SM-1，该菌株分类命名为沙雷氏菌Serratiasp.,已于2016年01月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.11987，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。图1：正常对照组动物腹腔洗液涂片(200本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株粘质沙雷氏菌，其特征在于：该菌株分类命名为沙雷氏菌Serratia sp.,已于2016年01月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.11987。

【技术特征摘要】
1.一株粘质沙雷氏菌，其特征在于：该菌株分类命名为沙雷氏菌Serratiasp.,已于
2016年01月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为
CGMCCNO.11987。
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【专利技术属性】
技术研发人员：蔡剑前，张忆军，孟红，陈雪梅，孙永庆，
申请(专利权)人：蔡剑前，张忆军，
类型：发明
国别省市：山东;37