本发明专利技术提供一种绵羊UCP1等位基因型的检测试剂盒，包括特异性引物对和绵羊UCP1等位基因标准DNA；特异性引物对为：上游引物：5’‑AGATACAAGCGGAAGAGACAC‑3’；下游引物：5’‑TGAAGGGTTGGGTCTGTCA‑3’；绵羊UCP1等位基因标准DNA为序列表中SEQ ID No.1‑3。本发明专利技术还提供一种绵羊UCP1等位基因型的检测方法。本发明专利技术的检测方法对绵羊UCP1不同等位基因型与绵羊胴体脂肪含量性状进行关联分析，研究表明绵羊UCP1等位基因型对绵羊群体的胴体脂肪含量性状具有显著影响（P<0.05）。因此，绵羊UCP1基因能够作为提高绵羊胴体脂肪含量性状的分子标记。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因等位基因的检测与鉴定，具体涉及一种绵羊UCP1等位基因型的检测方法及其检测试剂盒。
技术介绍
我国是养羊大国，羊饲养量位居世界首位，随着近年来世界养羊格局的变化，肉羊生产逐渐成为主流，但是国内肉羊群体产肉效率较低，其生产远不能满足国内消费对高质量羊肉产品的需求。加速改良绵羊肉用性状，提高羊肉产品质量，已成为绵羊选育工作中亟待解决的问题。脂肪含量是影响肉嫩度的关键因素之一。肉的脂肪特征包括胴体脂肪含量、背膘厚度、板油率、花油率、IMF和肌间脂肪。胴体脂肪含量是研究脂肪对肉嫩度影响的主要表型指标。胴体肉质性状与很多经济性状或生产性状相关联,例如增加肉的嫩度需要选择胴体含脂肪量高的个体，但胴体的脂肪量增加意味着瘦肉率的下降和饲料转化率降低，因为和机体沉积蛋白相比，沉积相同重量的脂肪需要更多的能量，并且在能量转化为脂肪的过程中能量利用率低于转化为蛋白质的利用率。以传统的表型选择提高肉质将是一个漫长复杂的过程。另一方面，和欧美国家相比，我国优质肉用绵羊的培育起步晚，相对落后，如何有效利用我国现有的优良绵羊种质资源，提高绵羊的肉质性状是一个紧迫的问题。解决这些问题的关键是在保存现有优良绵羊遗传资源的同时,寻求一种相对快速有效的育种手段提高绵羊肉质性状。利用和进行分子标记辅助育种是比较实际和可行的技术方法。羊肉胴体脂肪含量性状作为复杂的数量性状（quantitative trait，QT），其变异由多基因控制，受遗传和环境的共同影响。此外，大部分数量性状表型变异，除了受微效多基因控制外，还受一个或多个能对其产生较大效应的主效基因(major gene)的影响。通过传统的表型选择提高肉质性状可能是漫长而低效的选种选育过程，随着现代生物技术的发展以及分子育种理论的不断丰富使我们直接利用分子标记辅助选育成为可能。因此，寻找和研究这些主效基因，是提高绵羊肉用性能的有效途径之一。解偶联蛋白1（uncoupling protein 1，UCP1）是褐色脂肪组织（brown adipose tissue，BAT）存在的标志基因。褐色脂肪细胞中含有大量的线粒体，UCP1蛋白大量存在于线粒体内膜上。通过质子漏的作用，UCP1蛋白消耗一部分氧化磷酸化过程中产生的质子浓度梯度，使三磷酸腺苷的合成量降低，能量转而以热的形式被释放。因此，作为一种天然耗能型脂肪，褐色脂肪对于维持体温和能量平衡起重要作用。UCP1基因与脂肪代谢、能量平衡有着密切的联系。初生羔羊脂肪组织中UCP1基因的表达水平对羔羊出生后的成活率起重要作用。有关UCP1基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）的研究表明，启动子区-3826A＞G和-1766A＞G，外显子2的Ala64Thr和外显子5的Met229Leu及内含子4的208T＞G的突变与人的体重、身体质量指数（body mass index，BMI）和腰臀围比、腰围与身高比例、体脂重、脂肪率、腹部皮下脂肪和腹部内脏脂肪重，以及Ⅱ型糖尿病的患病几率等存在显著关联。前人研究绵羊UCP1基因主要集中在组织表达特征研究，但关于UCP1对胴体脂肪沉积的研究还不多，同时针对UCP1基因对绵羊胴体脂肪含量的相关研究更少。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题在于提供一种检测绵羊UCP1等位基因的方法，寻找与经济性状关联的等位基因型作为分子标记，以加快具有优质胴体脂肪含量性状绵羊种群的建立。本专利技术通过以下技术方案来实现：本专利技术提供一种绵羊UCP1等位基因型的检测试剂盒，所述试剂盒包括特异性引物对和绵羊UCP1等位基因标准DNA；所述特异性引物对为：上游引物：5’-AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3’；下游引物：5’-TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3’；所述绵羊UCP1等位基因标准DNA为序列表中SEQ ID No.1-3。本专利技术还提供一种绵羊UCP1等位基因型的检测方法，步骤如下：（1）设计特异性引物对：上游引物：5’-AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3’；下游引物：5’-TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3’；（2）对待测样本进行PCR扩增；（3）用变性剂处理PCR扩增产物后，对变性后的扩增片段和绵羊UCP1等位基因标准DNA样本同步进行SSCP电泳，根据标准DNA样本电泳结果判定待测样本的UCP1等位基因型；所述绵羊UCP1等位基因标准DNA为序列表中SEQ ID No.1-3。作为优选，步骤（2）中所述PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s、退火温度60℃ 30s、72℃延伸1min，循环35次，72℃延伸5min，4℃保存。本专利技术还提供一种绵羊胴体脂肪含量性状的分子标记辅助筛选方法，首先鉴定待测样本的UCP1等位基因型，然后对结果进行判定：等位基因型为UCP1*B时，绵羊胴体脂肪含量性状为优质；等位基因型为UCP1*A时，绵羊胴体脂肪含量性状为合格；等位基因型为UCP1*C时，绵羊胴体脂肪含量性状为低劣。作为优选，所述鉴定待测样本的UCP1等位基因型的方法为：（1）设计特异性引物对：上游引物：5’-AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3’；下游引物：5’-TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3’；（2）对待测样本进行PCR扩增；（3）用变性剂处理PCR扩增产物后，对变性后的扩增片段和标准DNA样本同步进行SSCP电泳，根据标准DNA样本电泳结果判定待测样本的UCP1等位基因型。作为优选，步骤（2）中所述PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s、退火温度60℃ 30s、72℃延伸1min，循环35次，72℃延伸5min，4℃保存。本专利技术还提供优质胴体脂肪含量性状绵羊种群的建立方法，首先鉴定待测样本的UCP1等位基因型，然后对结果进行筛选：将胴体脂肪含量性状为UCP1*C的绵羊个体淘汰；将胴体脂肪含量性状基因型为UCP1*B以及基因型为UCP1*BC的个体留种进行扩繁。作为优选，所述鉴定待测样本的UCP1等位基因型的方法为：（1）设计特异性引物对：上游引物：5’-AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3’；下游引物：5’-TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3’；（2）对待测样本进行PCR扩增；（3）用变性剂处理PCR扩增产物后，对变性后的扩增片段和标准DNA样本同步进行SSCP电泳，根据标准DNA样本电泳结果判定待测样本的UCP1等位基因型。作为优选，步骤（2）中所述PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s、退火温度60℃ 30s、72℃延伸1min，循环35次，72℃延伸5min，4℃保存。与现有技术相比，本专利技术具有以下技术效果：本专利技术根据已公布绵羊UCP1基因（GenBank Accession No. JN604985.1）的序列设计引物，以绵羊的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，通过对扩增产物的SSCP聚丙烯酰胺凝胶电泳以及测序分析发现在绵羊UCP1基因启动子区存在多态性与不同的等位基因型。针对上述绵羊UCP1基因的多态性与等位基因型，本专利技术还公开了基于SSCP的等位基因辨型和检测方法，进行PCR扩增后，用变性剂处理待测本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种绵羊UCP1等位基因型的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括特异性引物对和绵羊UCP1等位基因标准DNA；所述特异性引物对为：上游引物：5’‑AGATACAAGCGGAAGAGACAC‑3’；下游引物：5’‑TGAAGGGTTGGGTCTGTCA‑3’；所述绵羊UCP1等位基因标准DNA为序列表中SEQ ID No.1‑3。
【技术特征摘要】
1.一种绵羊UCP1等位基因型的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括特异性引物对和绵羊UCP1等位基因标准DNA；所述特异性引物对为：上游引物：5’-AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3’；下游引物：5’-TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3’；所述绵羊UCP1等位基因标准DNA为序列表中SEQ ID No.1-3。2.一种绵羊UCP1等位基因型的检测方法，其特征在于：步骤如下： （1）设计特异性引物对：上游引物：5’-AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3’；下游引物：5’-TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3’；（2）对待测样本进行PCR扩增；（3）用变性剂处理PCR扩增产物后，对变性后的扩增片段和绵羊UCP1等位基因标准DNA样本同步进行SSCP电泳，根据标准DNA样本电泳结果判定待测样本的UCP1等位基因型；所述绵羊UCP1等位基因标准DNA为序列表中SEQ ID No.1-3。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s、退火温度60℃ 30s、72℃延伸1min，循环35次，72℃延伸5min，4℃保存。4.一种绵羊胴体脂肪含量性状的分子标记辅助筛选方法，其特征在于：首先鉴定待测样本的UCP1等位基因型，然后对结果进行判定：等位基因型为UCP1*B时，绵羊胴体脂肪含量性状为优质；等位基因型为UCP1*A时，绵羊胴体脂肪含量性状为合格；等位基因型为UCP1*C时，绵羊胴体脂肪含量性状为低劣。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述鉴定待测样本的UCP1等位基因型的方法为：（...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨果，段子渊，赵凯，张玉宝，王小琪，谢忠奎，
申请(专利权)人：中国科学院寒区旱区环境与工程研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62
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