一种tRNAmu及其在提高链霉菌抗生素产量中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种突变的tRNAmu‑Asp‑AUC，所述的tRNAmu‑Asp‑AUC是通过对tRNA‑Asp‑AUC进行基因突变所获得的。所述的tRNAmu‑Asp‑AUC构建的表达系统pSH152‑ermE‑promoter‑tRNAmu‑Asp‑AUC，转化入天蓝色链霉菌后，相对于原始tRNA‑Asp‑AUC构建的表达系统pSH152‑ermE‑promoter‑tRNA‑Asp‑AUC，可以产更高产量的十一烷基灵菌红素(Undecylprodigiosin)和放线菌紫素(Actinorhodin)，能够显著的提高链霉菌的抗生素产量，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种tRNAmu及其在提高链霉菌抗生素产量中的应用
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种tRNAmu-Asp-AUC及其在提高链霉菌抗生素产量中的应用。
技术介绍
链霉菌是一类商业价值极高的放线菌，链霉菌在其复杂的形态分化过程中所产生的极为丰富的次级代谢产物，目前所发现抗生素，有1/2以上均产自链霉菌，在工、农、医等方面具有重要而广泛的应用价值。链霉菌中的抗生素基因属于次生代谢产物基因，大部分抗生素基因处于沉默状态，由于密码子的摆动效应，部分次生代谢产物基因能够实现表达，但是产量普遍不高，因此，如何研究出快速高效的提高链霉抗生素产量的方法显得十分重要，目前的常用方法包括两大类：一类是通过理化方法对链霉菌进行诱变，在突变株中筛选高产菌株；一类是通过遗传学方法，对菌株进行遗传改变，提高抗生素的产量。通过理化方法对链霉菌进行诱变已经取得了相当的成绩，得到了大量的高产菌株，但是，这种方法的筛选工作量大，无法准确的获得所需的菌株。随着对细菌基因组研究的深入，用遗传学的方法育种降低操作的盲目性，而且使工作量大大降低。专利号为201310177365.7，名称为《硫藤黄链霉菌抗生素调控基因及其提高链霉菌抗生素产量的方法》的专利技术专利中，公开了一种硫藤黄链霉菌抗生素调控基因ORF4，还公开了所述基因在制备抗生素高产链霉菌基因突变株中的应用以及一种提高链霉菌抗生素产量的方法。本专利技术通过使用硫膜黄谜霉菌抗生素调控基因ORF4，解决了传统链霉菌胃种的高工作量、高盲目性的问题。但是由于上述方法均无法从根本解决抗生素基因的沉默问题，所以结果并不理想。本专利技术提供了一种突变tRNAmu-Asp-AUC，将所述tRNAmu-Asp-AUC转入天蓝色链霉菌中，能够显著提高十一烷基灵菌红素(Undecylprodigiosin)和放线菌紫素(Actinorhodin)的产量，具有广阔的应用前景。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种突变tRNAmu-Asp-AUC，所述的tRNAmu-Asp-AUC是经过基因突变所得，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。含有所述tRNAmu-Asp-AUC的质粒。含有所述tRNAmu-Asp-AUC的细胞株。所述tRNAmu-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用。所述tRNAmu-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用，所述链霉菌为天蓝色链霉菌。所述tRNAmu-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用，所述抗生素为十一烷基灵菌红素(Undecylprodigiosin)和放线菌紫素(Actinorhodin)。一种可以有效促进链霉菌抗生素合成的表达系统，所述的表达系统包括含有所述tRNAmu-Asp-AUC的质粒。所述的表达系统在提高链霉菌抗生素产量中的应用。所述的表达系统在提高链霉菌抗生素产量中的应用，所述的链霉菌为天蓝色链霉菌。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种突变的tRNAmu-Asp-AUC，所述的tRNAmu-Asp-AUC是通过对tRNA-Asp-AUC进行基因突变所获得的。所述的tRNAmu-Asp-AUC构建的表达系统pSH152-ermE-promoter-tRNAmu-Asp-AUC，转化入天蓝色链霉菌后，相对于原始tRNA-Asp-AUC构建的表达系统pSH152-ermE-promoter-tRNA-Asp-AUC，可以产更高产量的十一烷基灵菌红素(Undecylprodigiosin)和放线菌紫素(Actinorhodin)，能够显著的提高链霉菌的抗生素产量。附图说明图1转化有原始tRNA-Asp-AUC和突变tRNAmu-Asp-AUC的天蓝色链霉菌所产的抗生素产量变化具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术进行详细的阐述，但本专利技术的保护范围并不限于以下实施例，任何本领域的技术人员在本专利技术的基础上，结合本领域公知常识所能想到的技术方案，都属于本专利技术的保护范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本专利技术中使用的pSH152质粒购自于北京合生基因科技有限公司，大肠杆菌JM109购自于北京全式金生物技术有限公司。下述实施例中用到的培养基：MM培养基(100ml培养基配方)：黄豆粉2g、甘露醇2g、琼脂2g，pH＝7.2-7.4。NA培养基：蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L。LB培养基：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g，5mol/LNaOH调pH至7.0。实施例一、tRNAmu-Asp-AUC序列突变1.委托上海强耀生物科技有限公司合成tRNA-Asp-AUC的序列，tRNA-Asp-AUC的原有序列如SEQIDNO:2所示。aaggctgtagcgcagaggtcgtcgcgcccacgcatcaagctggaggacgtcggttcgaatccgaccggtcttg2.PCR突变利用融合PCR对原始tRNA-Asp-AUC进行突变：突变引物Pmu1：aaggctgtagcgcagaggtcgtcgcgcccacgcatcaagctggagg突变引物Pmu2:caagaccggtcggattcgaaccgacgtcctccagcttgatgc取2XMix12.5μl、引物Pmu11μl和引物Pmu21μl，加水补至25μl。相互作为模板，进行PCR扩增，95℃3min(1个循环)；95℃30s、55℃40s、72℃20s(30个循环)；25℃恒温。3.突变后的tRNAmu-Asp-AUC序列如SEQIDNO:1所示。aaggctgtagcgcagaggtcgtcgcgcccacgcatcaagtgggaggacgtcggttcgaatccgaccggtcttg。通过全合成方式直接合成tRNAmu-Asp-AUC的序列也是本领域技术人员所能理解的。实施例2、pSH152-ermE-promoter-tRNAmu-Asp-AUC质粒构建及天蓝色链霉菌的抗生素产量对比由于突变后的tRNAmu-Asp-AUC不能自主进入到链霉菌中促使链霉菌表达抗生素，因此，需要将其插入到pSH152载体中，同时，在tRNAmu-Asp-AUC序列的前端插入ermE-promoter启动子序列，保证tRNAmu-Asp-AUC被插入到pSH152载体后的能够正常转录，翻译。构建获得的载体为pSH152-ermE-promoter-tRNAmu-Asp-AUC，具体构建方法如下所述：1.pSH152-ermE-promoter-tRNAmu-Asp-AUC质粒构建(1)引物构建引物pH1:CTGTTGTGGGCACAATCGTGCCGGTTGGTA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种突变tRNAmu-Asp-AUC，所述的tRNAmu-Asp-AUC的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种突变tRNAmu-Asp-AUC，所述的tRNAmu-Asp-AUC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.含有如权利要求1所述tRNAmu-Asp-AUC的质粒。


3.含有如权利要求1所述tRNAmu-Asp-AUC的细胞株。


4.如权利要求1所述tRNAmu-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用。


5.如权利要求4所述tRNAmu-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用，其特征在于，所述链霉菌为天蓝色链霉菌。

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【专利技术属性】
技术研发人员：陈熙明，牛军波，张昺林，张威，陈拓，刘光琇，
申请(专利权)人：中国科学院寒区旱区环境与工程研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62